水产养殖用水体解毒抗应激剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供水产养殖用水体解毒抗应激剂及其制备方法，属于水产养殖技术领域，该制备方法的主要步骤为：按照卵磷脂、胆固醇和含有多糖、生物碱和曲古抑菌素的药物组合物在采取超声波分散法制成脂质体；将脂质体和寡糖、蒽醌类、维生素类和载体混合均匀，形成水体解毒抗应激剂。水体解毒抗应激剂中含有15‑22wt％的脂质体，40‑50wt％的寡糖、3‑8wt％的蒽醌类、1‑2wt％的维生素类，其余为载体。本发明专利技术制备方法制得的脂质体的包封率高，载药量高，均一性好；该水体解毒抗应激剂具有抗应激、快速解除重金属毒性、提高其非特异免疫性、提高机体的清除能力、维持体内自由基产生与清除之间的动态平衡、保存期长的优势。

Anti-stress and detoxification agents for aquaculture water and their preparation methods

The invention provides an antitoxic and antistress agent for aquaculture water body and a preparation method thereof, belonging to the technical field of aquaculture. The main steps of the preparation method are as follows: liposomes are prepared by ultrasonic dispersion according to lecithin, cholesterol and pharmaceutical compositions containing polysaccharides, alkaloids and trichostatin; liposomes and oligosaccharides, anthraquinones, vitamins and carriers are mixed evenly. Form water detoxification and anti-stress agent. Water detoxification and anti-stress agents contain 15 22wt% liposomes, 40 50wt% oligosaccharides, 3 8wt% anthraquinones, 1 2wt% vitamins, and the rest are carriers. The prepared liposome has the advantages of high encapsulation efficiency, high drug loading and good homogeneity; the water detoxification anti-stress agent has the advantages of anti-stress, rapid detoxification of heavy metal toxicity, improving its non-specific immunity, improving the scavenging capacity of the body, maintaining the dynamic balance between free radical production and scavenging in vivo and long preservation period.

【技术实现步骤摘要】
水产养殖用水体解毒抗应激剂及其制备方法
本专利技术属于水产养殖
，具体涉及水产养殖用水体解毒抗应激剂及其制备方法。
技术介绍
人们消费的水产品约有43％来自养殖，由于渔业捕捞产量的停滞不前和人们对水产品需求的日益增多，加上集约化养殖模式的大力推广和应用，水产养殖业在迅猛发展。然而，高密度的养殖，消毒剂和其他药物组合物的滥用，频繁投饵等不规范饲养操作等原因，造成现今养殖水体环境恶化，使得养殖鱼类处于各种环境应激之下，如拥挤、低溶氧、水体富营养化等，同时温度、光照等急剧变化也会使养殖鱼类产生应激反应。鱼类的应激反应分三个阶段：第一阶段是机体神经内分泌活动的变化即动员阶段，主要是下丘脑-垂体-肾间组织轴(Hypothalamic–pituitary-interrenalaxis，HPI)作用释放大量糖皮质激素及肾上腺髓质释放儿茶酚胺类，加速体内糖原分解，产生可利用的能量；第二阶段是适应阶段，由第一阶段释放激素引起的包括呼吸系统、心血管系统、能量代谢、电解质平衡及免疫系统等一系列生理、生化、免疫反应的变化。此阶段机体代谢的一个重要特征是以葡萄糖为代表的生物学资源发生重新分配以更好地应对应激，使机体适应外界环境的变化，恢复平衡即新的稳态或者进入第三阶段；第三阶段即衰竭阶段，机体能量耗竭或者肾上皮质衰竭，使得机体抵抗应激能力减弱，无法恢复平衡而死亡。应激对鱼类的生长、繁殖和健康造成一定的影响，减缓鱼类的生长，降低繁殖率等，应激对鱼类健康的影响主要体现在以下两个方面：一是应激可导致强烈的组织机能改变，导致局部或者全身性的病变；二是通过抑制免疫机能(特异性和非特异性)，导致养殖鱼类更易感染病原，增加发病率和死亡率。目前除了通过改善养殖水体，减少应激操作等外源途径来减少养殖鱼类受到应激外，还可以通过加强养殖鱼类的营养途径来增强鱼类的抗应激能力。研究动物抗应激相关的营养素有维生素C、维生素E、脂肪酸、微量元素(铁、锌、硒、铜等)和非营养型免疫增强剂(免疫多糖、化学合成物、微生态制剂以及中草药)，其中中草药有既可发挥良好的抗应激作用，又可避免毒物残留对人体健康危害的等特点，具有广泛的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种制得的脂质体的包封率高，载药量高，均一性好，能提高水体解毒抗应激剂的药效的水产养殖用水体解毒抗应激剂的制备方法，该制备方法制得的水体解毒抗应激剂具有抗应激、快速解除重金属毒性、提高其非特异免疫性、提高机体的清除能力、维持体内自由基产生与清除之间的动态平衡、保存期长的优势。本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：水产养殖用水体解毒抗应激剂的制备方法，主要步骤为：a)按照卵磷脂、胆固醇和含有多糖、生物碱和曲古抑菌素的药物组合物在采取超声波分散法制成脂质体；b)将脂质体和寡糖、蒽醌类、维生素类和载体混合均匀，形成水体解毒抗应激剂。其中药物组合物包括重量比为100:12-25:0.01-0.05的多糖、生物碱和曲古抑菌素。本专利技术制备方法制备脂质体时用药物组合物中多糖、生物碱和曲古抑菌素的合理比例能够发挥增益作用，能够刺激水产动物机体内的沉默基因，使得水产动物机体中的18:1n-9转化为18:2n-6，然后合成花生四烯酸，而花生四烯酸的环氧合酶代谢产物前列腺素能够调控下丘脑-垂体-肾上腺轴的敏感性，在面对应激的时候能够改变皮质醇和皮质酮的释放，能够部分抵消胁迫引起的皮质醇反应，同时还能够抵消抗应激剂和饲料饲喂引起的鳃的Na+/K+-ATP酶活性的升高，且还能够改变水产动物在应激状态下的反应以及调节渗透压过程，促进水产动物的生长，降低脂质蓄积，此外还能激活T、B淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞，提高非特异性免疫等功能，能够抵抗部分虫体侵害和继发性的细菌性疾病，快速修复机体损伤，使淡水鱼能够更好地抵抗病毒害，辅助提高水产动物的成活率。同时本专利技术制备方法中卵磷脂和胆固醇的用量可使脂质体的包封率最高。作为优选，步骤a)中，采取超声波分散法制成脂质体的具体步骤为：将含卵磷脂和胆固醇溶解于等体积的乙醇和氯仿混合液中，然后蒸发掉有机溶剂，形成干膜，加入溶解了药物组合物的PBS溶液，微波处理至形成均匀混悬液，然后超声处理后依次通过不同孔径的微孔滤膜，即可。该采取超声波分散法制成脂质体步骤将脂溶性药物组合物和膜材料溶于含药水相，再加入至有机溶剂中，混合均匀后将有机溶剂去除，剩余液体经过超声获得脂质体，制得的脂质体的包封率高，载药量高，均一性好，其进入机体后主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能和抗应激性，最终提高水体解毒抗应激剂的药效。作为优选，超声处理采用超声30s间隔10s的模式，超声处理15-25min。作为优选，微波处理采用加热30s暂停60s的间歇式加热，微波处理功率为300-500W，微波处理温度为30-38℃、时间为8-12min。该合理的间歇式加热设置及微波功率能够将高强度短脉冲微波辐射聚焦到脂质膜表面，与微波的强烈相互作用，微波能转变为热，使脂质膜表面上一些点被选择性地快速加热至很高的温度，进而使与脂质膜中接触的有机溶剂快速被蒸发掉，加快脂质膜的水化速度，且能减小脂质体乳浊液中分散质粒子的粒径和提高粒径的均匀，进而提高后续脂质体的包封率、载药量和样品的均一性，最终提高水产养殖用水体解毒抗应激剂的药效。作为优选，脂质体的载药量≥7.0％。作为优选，步骤c)中，载体为玉米和/或麦麸和/或秸秆粉末，载体经500-800MHz微波处理后粉碎而得到的。采用500-800MHz微波处理玉米和/或麦麸和/或秸秆，一方面可灭杀玉米、胡萝卜表明或内部存在的细菌物质，能够提高所制备水体解毒抗应激剂的保存期，同时微波处理可以除去玉米和/或麦麸和/或秸秆内的结合水，在减小水膜对被吸附物质的吸附阻力同时使其内部形成多孔的管状结构，增大内部比表面积，而在玉米和/或麦麸和/或秸秆经球磨后能够把管状结构显露处理，从而提高吸附脂质体和寡糖、蒽醌类、维生素C的性能，最终提高所制备水水体解毒抗应激剂的使用效果，且还能迅速络合和螯合水体中的重金属离子，快速解除重金属毒性，减少重金属在水产动物体内富集的危险。作为优选，寡糖为果寡糖，所述果寡糖选自果寡2糖、果寡3糖或果寡4糖。寡糖能显著降低水产动物血液中皮质醇浓度，增强抗应激能力，具有增强免疫力、抗病毒、抗菌、抗应激及改善生产性能的功能，添加寡聚糖，可增强水产动物的抗应激能力，非特异性免疫指标下降幅度减小，抗病力增强。作为优选，蒽醌类选自大黄蒽醌提取物、何首乌蒽醌提取物、决明子蒽醌提取物或芦荟蒽醌提取物。蒽醌提取物能降低水产动物血液中皮质醇浓度，提高其非特异免疫性，增强抗高密度和抗高温应激能力及抵抗嗜水气单孢菌感染的能力，同时能够显著地降低肝脏过氧化氧酶活性、超氧化物歧化酶活性，提高水产动物机体的清除能力，维持体内自由基产生与清除之间的动态平衡，造成应激会造成机体内自由基产生增多而产生的脂质过氧化损伤。水产养殖用水体解毒抗应激剂，由上述的水产养殖用水体解毒抗应激剂的制备方法制备得到。作为优选，水体解毒抗应激剂中含有15-22wt％的脂质体，40-50wt％的寡糖、3-8wt％的蒽醌类、1-2wt％的维生素类，其余为载体。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.水产养殖用水体解毒抗应激剂的制备方法，其特征在于：主要步骤为：a)按照卵磷脂、胆固醇和含有多糖、生物碱和曲古抑菌素的药物组合物在采取超声波分散法制成脂质体；b)将所述脂质体和寡糖、蒽醌类、维生素类和载体混合均匀，形成水体解毒抗应激剂。

【技术特征摘要】
1.水产养殖用水体解毒抗应激剂的制备方法，其特征在于：主要步骤为：a)按照卵磷脂、胆固醇和含有多糖、生物碱和曲古抑菌素的药物组合物在采取超声波分散法制成脂质体；b)将所述脂质体和寡糖、蒽醌类、维生素类和载体混合均匀，形成水体解毒抗应激剂。2.根据权利要求1所述的水产养殖用水体解毒抗应激剂的制备方法，其特征在于：所述步骤a)中，采取超声波分散法制成脂质体的具体步骤为：将含卵磷脂和胆固醇溶解于等体积的乙醇和氯仿混合液中，然后蒸发掉有机溶剂，形成干膜，加入溶解了药物组合物的PBS溶液，微波处理至形成均匀混悬液，然后超声处理后依次通过不同孔径的微孔滤膜，即可。3.根据权利要求1或2所述的水产养殖用水体解毒抗应激剂的制备方法，其特征在于：所述超声处理采用超声30s间隔10s的模式，超声处理15-25min。4.根据权利要求2所述的水产养殖用水体解毒抗应激剂的制备方法，其特征在于：所述微波处理采用加热30s暂停60s的间歇式加热，微波处理功率为300-500W，微波处理温度为30-38℃、时...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁月晗，张建设，胡利腾，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33