一种L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸对映异构体的检测方法，属于食品和药物分析技术领域，其主要包括系统适用性溶液的制备、对映异构体对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、衍生化试液的制备、柱前衍生化、色谱条件与系统适用性试验及L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸对映异构体测定等步骤。本发明专利技术检验方法具有较高的灵敏度、准确度、精密度，耐用性强，可准确反映L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸对映异构体的含量，适合工业上用于L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸对映异构体的检测及质量控制，从而为合理的质量标准制定提供依据，以便更好控制和掌握产品质量，确保食用和药用的安全性。

A Method for the Detection of Enantiomers of L-2-Amino-5-Guanylvalerate

The invention discloses a detection method for L_2_amino_5_guanylvalerate enantiomers, which belongs to the field of food and pharmaceutical analysis technology. It mainly includes preparation of system applicable solution, preparation of enantiomer reference solution, preparation of sample solution, preparation of derivative test solution, pre-column derivatization, chromatographic conditions and system applicable test and L_2_amino group. _5 The method has high sensitivity, accuracy, precision and durability, and can accurately reflect the content of L_2_amino_5_guanylvalerate enantiomers. It is suitable for industrial application in the detection and quality control of L_2_amino_5_guanylvalerate enantiomers, so as to provide basis for the formulation of reasonable quality standards, so as to better control and master product quality. To ensure the safety of food and medicine.

【技术实现步骤摘要】
一种L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法
本专利技术属于食品和药物分析
，具体涉及一种L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法。
技术介绍
L-2-氨基-5-胍基戊酸(CAS登录号为74-79-3)属于氨基酸类化合物，具有重要的生理功能，常作为营养补充剂，也是氨基酸胶囊和输液的重要成分。L-2-氨基-5-胍基戊酸可有效提高免疫力、促进免疫系统分泌内生性物质，有利于对抗癌细胞及预防病毒感染；有利于严重外伤、烧伤等需要大量组织修护患者的康护。临床上，L-2-氨基-5-胍基戊酸适用于血氨增高的肝昏迷，特别是伴有碱中毒的患者；用于辅助测定脑垂体功能；用于精液分泌不足和精子缺乏引起的男性不育症；用于婴幼儿补充L-2-氨基-5-胍基戊酸缺乏等，具有广泛的应用。目前，L-2-氨基-5-胍基戊酸主要采用微生物发酵法生产，微生物代谢过程中会产生少量的L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体(图1)，即D-2-氨基-5-胍基戊酸。由于L-2-氨基-5-胍基戊酸与其对映异构体的性质及其接近，在L-2-氨基-5-胍基戊酸的分离纯化过程中，其对映异构体难于清除(图2)，易于残留于L-2-氨基-5-胍基戊酸原料中，影响产品质量。现行各国药典均没有收载L-2-氨基-5-胍基戊酸的对映异构体查项。因此，如何分析及制备L-2-氨基-5-胍基戊酸及其对映异构体，控制D-2-氨基-5-胍基戊酸杂质含量，进而确保L-2-氨基-5-胍基戊酸质量显得尤为重要。然而，对于2-氨基-5-胍基戊酸两种对映异构体分析分离方法未见相关报道。其中可能主要涉及L-2-氨基-5-胍基戊酸与其对映异构体衍生物的分离度、作为杂质的对映异构体的检测灵敏度、L-2-氨基-5-胍基戊酸对对映异构体检测的干扰等诸多问题。因此，如何建立一种能够简单、快速、高效的分析分离2-氨基-5-胍基戊酸两种对映异构体的方法，进而实现对L-2-氨基-5-胍基戊酸原料药的质量进行全面检测和控制，是目前需要解决的技术问题。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的是提供一种L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的高效液相色谱检测方法，为L-2-氨基-5-胍基戊酸的质量标准制定提供依据，以便更好控制产品质量，确保食用和药用安全。实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，采用柱前衍生高效液相色谱法：1)柱前衍生：分别取系统适用性溶液、对映异构体对照品溶液和供试品溶液适量，并各加入等体积的衍生化试液得到柱前衍生体系，混匀，室温放置衍生40～180min，即得到各溶液的衍生化溶液；所述系统适用性溶液为L-2-氨基-5-胍基戊酸与对映异构体对照品加稀释液溶解制成的混合溶液，其中L-2-氨基-5-胍基戊酸的浓度范围为0.2～1.0mg/mL，对映异构体的浓度范围为10～30μg/mL；所述对映异构体对照品溶液为L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体对照品加稀释液溶解制成的溶液，其浓度范围为0.5～5μg/mL；所述供试品溶液为L-2-氨基-5-胍基戊酸原料加稀释液溶解制成的溶液，其浓度范围为0.1～3.0mg/mL；所述衍生化试液为溶有2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯的乙腈溶液，其浓度范围为1～5mg/mL；2)系统适用性试验：取步骤1)制备的系统适用性溶液的衍生化溶液进行高效液相色谱分析，L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体衍生物峰与相邻峰的分离度应符合要求，理论板数按L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体峰计算不低于3000；3)L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的测定：分别取步骤1)制备的供试品溶液的衍生化溶液和对映异构体对照品溶液的衍生化溶液进行高效液相色谱分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量。优选的，所述高效液相色谱分析条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以浓度为5～20mmol/LpH值2.5～3.2的磷酸盐溶液为流动相A，以甲醇为流动相B；流速为0.8～1.2mL/min；洗脱方式为梯度洗脱；检测波长为245～255nm；柱温为20～35℃；进样量为2～20μL。优选的，所述稀释液是体积比为50:50:0.2～0.6的乙腈、水和二乙胺的混合溶液，所述二乙胺还可以是三乙胺。优选的，所述供试品溶液的柱前衍生体系中L-2-氨基-5-胍基戊酸与2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯的质量比为0.05～0.85：1。优选的，所述按外标法以峰面积计算对映异构体的含量，对映异构体对照品峰面积需乘以校正因子1.25～1.35。优选的，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。优选的，L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，具体步骤包括：1)系统适用性溶液的制备：以稀释液为溶剂，将L-2-氨基-5-胍基戊酸及其对映异构体对照品分别配制成浓度为0.5mg/mL和15μg/mL的溶液，作为系统适用性溶液；2)对映异构体对照品溶液的制备：以稀释液为溶剂，将L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体对照品配制成浓度约为1.5μg/mL的溶液，作为对映异构体对照品溶液；3)供试品溶液的制备：精密称取L-2-氨基-5-胍基戊酸待测样品，以稀释液为溶剂配制成浓度为0.1～2.0mg/mL的溶液，作为供试品溶液；4)衍生化试液的制备：称取衍生试剂2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯加乙腈溶解配制浓度为2.4mg/mL的溶液，作为衍生化试液；5)分别取系统适用性溶液、对映异构体对照品溶液和供试品溶液各100μL，再各加入等体积衍生化试液，混匀，室温放置衍生40～180min，即得到各溶液的衍生化溶液；6)色谱条件与系统适用性试验：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(pH值2.5～3.2)为流动相A，以甲醇为流动相B；流速为每分钟0.8～1.2mL；洗脱方式为梯度洗脱；检测波长为245～255nm；柱温为20～35℃；进样量为2～20μL；取步骤5)制备的系统适用性溶液的衍生化溶液进行系统适用性试验，L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体衍生物峰与相邻峰的分离度应符合要求，理论板数按L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体峰计算不低于3000；7)L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的测定：取步骤5)所制备的对映异构体对照品溶液的衍生化溶液及供试品溶液的衍生化溶液各2～20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量，对映异构体对照品峰面积需乘以校正因子1.25～1.35。进一步，L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，其优化的步骤包括：1)系统适用性溶液的制备：以稀释液为溶剂，将L-2-氨基-5-胍基戊酸及其对映异构体对照品分别配制成浓度为0.5mg/mL和15μg/mL的溶液，作为系统适用性溶液；2)对映异构体对照品溶液的制备：以稀释液为溶剂，将L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体对照品配制成浓度为1.5μg/mL的溶液，作为对映异构体对照品溶液；3)供试品溶液的制备：精密称取L-2-氨基-5-胍基戊酸待测样品，以稀释液为溶剂配制成浓度为1.5mg/mL的溶液，作为供试品溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸对映异构体的检测方法，其特征在于，采用柱前衍生高效液相色谱法：1)柱前衍生：分别取系统适用性溶液、对映异构体对照品溶液和供试品溶液适量，并各加入等体积的衍生化试液得到柱前衍生体系，混匀，室温放置衍生40～180min，即得到各溶液的衍生化溶液；所述系统适用性溶液为L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸与对映异构体对照品加稀释液溶解制成的混合溶液，其中L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸的浓度范围为0.2～1.0mg/mL，对映异构体的浓度范围为10～30μg/mL；所述对映异构体对照品溶液为L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸对映异构体对照品加稀释液溶解制成的溶液，其浓度范围为0.5～5μg/mL；所述供试品溶液为L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸原料加稀释液溶解制成的溶液，其浓度范围为0.1～3.0mg/mL；所述衍生化试液为溶有2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯的乙腈溶液，其浓度范围为1～5mg/mL；2)系统适用性试验：取步骤1)制备的系统适用性溶液的衍生化溶液进行高效液相色谱分析，L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸对映异构体衍生物峰与相邻峰的分离度应符合要求，理论板数按L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸对映异构体峰计算不低于3000；3)L‑2‑氨基‑5‑胍基戊酸对映异构体的测定：分别取步骤1)制备的供试品溶液的衍生化溶液和对映异构体对照品溶液的衍生化溶液进行高效液相色谱分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，其特征在于，采用柱前衍生高效液相色谱法：1)柱前衍生：分别取系统适用性溶液、对映异构体对照品溶液和供试品溶液适量，并各加入等体积的衍生化试液得到柱前衍生体系，混匀，室温放置衍生40～180min，即得到各溶液的衍生化溶液；所述系统适用性溶液为L-2-氨基-5-胍基戊酸与对映异构体对照品加稀释液溶解制成的混合溶液，其中L-2-氨基-5-胍基戊酸的浓度范围为0.2～1.0mg/mL，对映异构体的浓度范围为10～30μg/mL；所述对映异构体对照品溶液为L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体对照品加稀释液溶解制成的溶液，其浓度范围为0.5～5μg/mL；所述供试品溶液为L-2-氨基-5-胍基戊酸原料加稀释液溶解制成的溶液，其浓度范围为0.1～3.0mg/mL；所述衍生化试液为溶有2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯的乙腈溶液，其浓度范围为1～5mg/mL；2)系统适用性试验：取步骤1)制备的系统适用性溶液的衍生化溶液进行高效液相色谱分析，L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体衍生物峰与相邻峰的分离度应符合要求，理论板数按L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体峰计算不低于3000；3)L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的测定：分别取步骤1)制备的供试品溶液的衍生化溶液和对映异构体对照品溶液的衍生化溶液进行高效液相色谱分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量。2.根据权利要求1所述L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，其特征在于，所述步骤2)和/或步骤3)的高效液相色谱分析条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以浓度为5～20mmol/LpH值2.5～3.2的磷酸盐溶液为流动相A，以甲醇为流动相B；流速为0.8～1.2mL/min；洗脱方式为梯度洗脱；检测波长为245～255nm；柱温为20～35℃；进样量为2～20μL。3.根据权利要求1所述L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，其特征在于，所述稀释液是体积比为50:50:0.2～0.6的乙腈、水和二乙胺的混合溶液，所述二乙胺还可以是三乙胺。4.根据权利要求1所述L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的柱前衍生体系中L-2-氨基-5-胍基戊酸与2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯的质量比为0.05～0.85：1。5.根据权利要求1所述L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，其特征在于，所述按外标法以峰面积计算对映异构体的含量，对映异构体对照品峰面积需乘以校正因子1.25～1.35。6.根据权利要求2所述L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。7.根据权利要求1～6任一项所述的L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法，其特征在于，其步骤包括：1)系统适用性溶液的制备：以稀释液为溶剂，将L-2-氨基-5-胍基戊酸及其对映异构体对照品分别配制成浓度为0.5mg/mL和15μg/mL的溶液，作为系统适用性溶液；2)对映异构体对照品溶液的制备：以稀释液为溶剂，将L-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体对照品配制成浓度为1.5μg/mL的溶液，作为对映异构体对照品溶液；3)供试品溶液的制备：精密称取L-2-氨基-5-胍基戊酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈程俊，李绪全，刘红，方佳茂，陈伟滨，林晓群，张松浩，陈榕兴，
申请(专利权)人：广东盛泰华生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44