雪梨膏的指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术公开了雪梨膏的指纹图谱检测方法，该方法包括以下步骤：步骤1、雪梨膏供试品溶液的制备；步骤2、混合对照品溶液的制备：步骤3、分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的雪梨膏指纹图谱仪器导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择不同批次雪梨膏的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成雪梨膏的对照指纹图谱；计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。本发明专利技术所提供的雪梨膏指纹图谱，能全面，客观地表征雪梨膏的质量。本发明专利技术提供的指纹图谱的检测方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。

【技术实现步骤摘要】
雪梨膏的指纹图谱检测方法
本专利技术属于中药检测
，具体地说，涉及一种雪梨膏的指纹图谱检测方法及其指纹图谱。
技术介绍
雪梨膏有养阴清肺，除烦止咳的作用，主治肺燥咳嗽，吐血，咯血，心火烦躁，口渴喉干，并除胸膜痰热。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴别手段。中药指纹图谱具有信息量大、特征性强、整体性和模糊性等特点。包括对已知成分和未知成分的分析，反映的化学成分信息(具体表现为相对保留时间和相对峰面积)具有高度特异性和选择性，反应化学成分及含量的分布。能够结合各种色谱、光谱、波谱手段，特征性地鉴定中药的真伪与优劣，成为中药自身的“化学条码”。现行雪梨膏有关药品标准出自卫生部药品标准中药成方制剂第十册，其中检查部分仅有相对密度，因此，采用高效液相色谱法建立一种雪梨膏指纹图谱对于准确控制雪梨膏膏的质量具有重要意义。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是克服现有技术的不足，开发一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，通过本专利技术的方法可以保证雪梨膏的质量稳定性、一致性和可控性，从而确保雪梨膏的安全性和有效性。技术方案：为实现以上目的，本专利技术采用的技术方案为：一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，包括以下步骤：步骤1、雪梨膏供试品溶液的制备：取待测雪梨膏至容量瓶中，加入甲醇，超声处理后加甲醇至刻度线，静置，取上清液用0.45μm有机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；步骤2、混合对照品溶液的制备：分别取绿原酸、橙皮苷对照品适量，精密称定，分别置于容量瓶中，加甲醇分别配成对照品储备液；然后分别精密吸取绿原酸和橙皮苷的对照品溶液适量，加甲醇定容至10ml，制成绿原酸和橙皮苷的混合对照品溶液；步骤3、分别精密吸取步骤1的雪梨膏供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的雪梨膏供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次雪梨膏的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成雪梨膏的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。作为优选方案，以上所述的一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤1、雪梨膏供试品溶液的制备方法为：取待测雪梨膏15ml至50ml容量瓶中，加甲醇15～35ml，在250w，40KHz的条件下超声处理15～45min，然后加甲醇至刻度线，静置1～8h，取上清液用0.45μm有机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。作为优选方案，以上所述的一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，步骤2、混合对照品溶液的制备：分别取绿原酸、橙皮苷对照品适量，精密称定，置于10ml容量瓶中，加甲醇配成浓度分别为487μg/ml、243μg/ml的对照品储备液；分别精密吸取绿原酸和橙皮苷对照品溶液适量，加甲醇定容至10ml，制成每1ml含绿原酸48.7μg、橙皮苷24.3μg的混合对照品溶液。作为优选方案，以上所述的一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，步骤3高效液相色谱仪检测的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含0.1％体积醋酸的水作为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml·min-1，柱温25～40℃，检测波长200～360nm；作为优选方案，以上所述的一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤3高效液相色谱仪检测的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含0.1％体积醋酸的水作为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速为0.6ml·min-1，柱温30℃，检测波长280nm。作为优选方案，以上所述的一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，梯度洗脱优选如下表：时间/min流动相A体积百分比流动相B体积百分比095515919459010554060704060800100。作为优选方案，以上所述的一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，色谱柱为色谱柱为PurospherSTARLPRP-18endcapped，4.6*250mm，5μm。作为优选方案，以上所述的一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，得到的雪梨膏指纹图谱中有6个共有峰，各共有峰的保留时间分别为：共有峰1，保留时间为10.632min；共有峰2，保留时间为14.877min；共有峰3，保留时间为19.792min；共有峰4，保留时间为26.055min；共有峰5，保留时间为47.11min；共有峰6，保留时间为58.244min。其中5号峰为绿原酸、6号峰为橙皮苷。指纹图谱检测条件的优化实验：(1)不同流动相的选择：本专利技术通过大量实验筛选了纯水-乙腈、纯水-甲醇、0.1％磷酸水-乙腈、0.1％冰醋酸水-乙腈等流动相系统进行检测，检测结果显示，选择含0.1％冰醋酸的水和乙腈作为流动相，系统基线平稳、峰形、各峰分离度情况最好。故选择以含0.1％冰醋酸体积的水作为流动相A，以乙腈为流动相B为最佳流动相；咋确定流动相基础上，为了达到更好的分离度，本专利技术筛选了梯度洗脱方式，实验结果表明，不同的梯度洗脱方式，对各化合物的分离度影响大，本专利技术通过调整不同时间段的分离度和色谱峰数目，优选得到最佳的梯度洗脱方式为：流动相B的比例变化为：0～15min，5％～9％乙腈；15～45min，9％～10％乙腈；45～55min，10％～60％乙腈；55～70min，60％乙腈；70～80min，60～100％乙腈。(2)不同检测波长的选择：本专利技术通过大量实验筛选了不同波长200nm、254nm、280nm下色谱检测结果，检测结果显示在280nm下各特征峰强度较好，故选择280nm作为检测波长，如图1所示。(3)不同流速的选择：本专利技术分别在流速为0.6ml·min-1、1.0ml·min-1、1.2ml·min-1下进行检测，检测结果显示流速在0.6ml·min-1下各特征峰分离度较好，故选择流速为0.6ml·min-1。本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术所建立的雪梨膏膏指纹图谱，能有效地表征雪梨膏膏的质量，有利于全面监控药物的质量。(2)本专利技术建立的指纹图谱，可注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征，既可避免因测定个别化学成分而判定雪梨膏质量的片面性，又可减少为质量达标而人为处理的可能性。(3)本专利技术方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好的优点。附图说明图1为雪梨膏供试品在280nm下的色谱图图2为10批雪梨膏供试品溶液匹配的指纹图谱。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。以下实施例所用仪器日本岛津公司ShimadzuLC-20AB高效液相色谱系统，包括在线脱气机，自动进样器ProminenceSIL-20A，二极管阵列检测器SPD-M20A和柱温箱CTO-20A；ME204E电子分析天平(梅特勒-托利多国际股份有限公司，精确到十万分之一)；BSM220.4分析天平(上海卓精公司，精确到万分之一)；GVS型超声波清洗器(深圳市够威科技有限公司)。以下实施例所用试药如下：绿原酸对照品(批号1700422，纯度≥98％)、橙皮苷对照品(批号161231，纯度≥本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、雪梨膏供试品溶液的制备：取待测雪梨膏至容量瓶中，加入甲醇，超声处理后加甲醇至刻度线，静置，取上清液用0.45μm有机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；步骤2、混合对照品溶液的制备：分别取绿原酸、橙皮苷对照品适量，精密称定，分别置于容量瓶中，加甲醇分别配成对照品储备液；然后分别精密吸取绿原酸和橙皮苷的对照品溶液适量，加甲醇定容至10ml，制成绿原酸和橙皮苷的混合对照品溶液；步骤3、分别精密吸取步骤1的雪梨膏供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的雪梨膏供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次雪梨膏的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成雪梨膏的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。

【技术特征摘要】
1.一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、雪梨膏供试品溶液的制备：取待测雪梨膏至容量瓶中，加入甲醇，超声处理后加甲醇至刻度线，静置，取上清液用0.45μm有机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；步骤2、混合对照品溶液的制备：分别取绿原酸、橙皮苷对照品适量，精密称定，分别置于容量瓶中，加甲醇分别配成对照品储备液；然后分别精密吸取绿原酸和橙皮苷的对照品溶液适量，加甲醇定容至10ml，制成绿原酸和橙皮苷的混合对照品溶液；步骤3、分别精密吸取步骤1的雪梨膏供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的雪梨膏供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次雪梨膏的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成雪梨膏的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。2.根据权利要求1所述的一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤1、雪梨膏供试品溶液的制备方法为：取待测雪梨膏15ml至50ml容量瓶中，加甲醇15～35ml，在250w，40KHz的条件下超声处理15～45min，然后加甲醇至刻度线，静置1～8h，取上清液用0.45μm有机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。3.根据权利要求1所述的一种雪梨膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤2、混合对照品溶液的制备：分别取绿原酸、橙皮苷对照品适量，精密称定，置于10ml容量瓶中，加甲醇配成浓度分别为487μg/ml、243μg/ml的对照品储备液；分别精密吸取...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡宝昌，李国维，金俊杰，陈海超，孙戡平，郑艳萍，
申请(专利权)人：南京海昌中药集团有限公司，江苏海昇药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32