一种三肽及其制备方法与用途技术

本发明专利技术涉及多肽技术领域，尤其涉及一种三肽及其制备方法与用途。本发明专利技术提供的三肽FGF，氨基酸序列为Phe‑Gln‑Phe，并提供了该三肽的制备方法和用途，实验表明，FQF高、低剂量组的FITC荧光强度均具有显著性差异，表明FQF可以显著性降低细胞内ROS水平，起到抗氧化的作用。可广泛应用于制备抑制CD38酶活的药物或食品，或者应用于制备具有抗氧化、延缓衰老功效的药物或食品。

A tripeptide and its preparation method and Application

The invention relates to the technical field of polypeptide, in particular to a tripeptide and its preparation method and use. The tripeptide fibroblast growth factor provided by the invention has the amino acid sequence of Phe Gln Phe, and provides the preparation method and application of the tripeptide. The experimental results show that the FITC fluorescence intensity of the high and low dose groups of FQF has significant difference, indicating that FQF can significantly reduce the ROS level in cells and play an antioxidant role. It can be widely used in the preparation of drugs or foods that inhibit the activity of CD38 enzymes, or in the preparation of drugs or foods with antioxidant and anti-aging effects.

【技术实现步骤摘要】
一种三肽及其制备方法与用途
本专利技术涉及多肽
，尤其涉及一种三肽及其制备方法与用途。
技术介绍
CD38酶催化底物环腺苷二磷酸核糖(cADPR)、腺苷二磷酸核糖(ADPR)以及烟酸腺苷二核苷磷酸(NAADP)可以与不同的受体或通道结合，从而参与调控细胞中的钙信号，通过作用于人体相关受体系统，这些Ca2+信使小分子可以在生理条件下调控细胞内钙库钙离子的释放和胞外钙离子的内流，进而调节细胞的功能和生命活动。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)作为Sir2-相关酶类(Sir2-relatedenzymessirtuins)的底物并作为连接尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamidephosphoribosyltransferase,Nampt)和SIRT1的分子,最近受到了广泛的研究,因为NAD+的水平高低直接决定了sirtuins家族的活性,而sirtuins活性又对细胞寿命有着重要的影响。机体中NAD+的水平与其合成酶和降解酶或者两者的结合相关，机体中NAD+合成酶有烟酰胺磷酸核糖转移酶(NMNPT1-3)、烟酸单核苷酸转移酶(NMNAT)和烟酰磷酸核糖转移酶(NAPRT)等，NAD+降解酶有CD38，聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)和sirtuins等，研究发现，在衰老过程中，机体的肝脏、脂肪组织、脾脏、骨骼肌中的CD38蛋白水平相比其他NAD+合成酶或降解酶含量明显增加，CD38的mRNA也表达明显增加、NAD+水平下降，说明CD38相较于其他其他NAD+合成酶或降解酶对NAD+水平影响更为明显，即CD38是NAD+下水平降的关键因素。CD38是哺乳动物组织中主要的NAD+降解酶，超过90％的CD38发挥NAD+水解酶的作用，将NAD+分子水解为烟酰胺与二磷酸腺苷核糖(ADPR)，不到10％的CD38发挥ADP-核糖基环化酶的作用，环化NAD+为cADPR与烟酰胺。此外，CD38降解NAD+产生的烟酰胺也是sirtuins的内源性抑制剂。基于维持NAD+水平在衰老和年龄相关疾病的重要性，通过抑制CD38酶的活性来提高衰老人群的NAD+水平，是一种潜在的延缓衰老的重要方法。衰老(Aging)是生物个体随年龄增长而发生的不可逆的退行性变化，而氧化则是引起衰老的主要原因之一。目前，人口老龄化已成为全球性的社会问题。为了延缓衰老，临床上常使用一些合成的抗氧化剂来清除体内自由基及代谢废物，从而防止过度氧化，但长期用药会对机体产生毒副作用。因此，探索和开发天然抗氧化剂对于延缓衰老具有重要意义。自由基学说认为，衰老过程中的退行性变化是由自由基积累产生的毒害作用所导致的。机体正常代谢过程会产生一定量的自由基，它们在体内具有信号传导、调控基因转录和表达、调节细胞分裂和分化等生理功能。同时机体内有一套内源性自由基清除系统，由酶促和非酶促抗氧化体系共同组成，使自由基维持在低量无害的动态平衡状态。随着年龄的增长，体内自由基清除系统逐步退化，自由基水平的动态平衡被打破。过量的自由基在机体内累积，促使生物膜中的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，引起细胞膜结构破坏和功能紊乱。同时，产生的脂质过氧化物促使蛋白质分子发生交联，破坏酶结构并降低酶活性，从而损伤DNA双螺旋结构并影响遗传信息的正确表达。这些自由基损伤效应的累积造成细胞结构破坏、功能减退甚至细胞凋亡或坏死，是机体衰老和多种老年疾病的重要根源之一。研究证实，活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)是细胞内多种氧化还原反应的正常代谢产物，在机体内的产生和清除处于动态平衡状态。当机体受到内源性或外源性有害因素刺激时，可致ROS生成增加，即出现氧化应激(oxidativestress，OS)。氧化应激可引起DNA氧化损伤和蛋白质的表达异常，使机体处于易损状态。动脉粥样硬化、心脏病、帕金森氏综合征、阿尔兹海默症、肿瘤、衰老糖尿病等疾病，大多数是在氧化应激基础上发生的疾病，年龄越大，罹患风险越高。当自身清除自由基能力不足、氧化和抗氧化之间的平衡被打破时，补充外援抗氧化剂能够抑制氧化应激、缓解机体损伤，对于延缓机体衰老及许多老年疾病的预防和治疗，具有重要的意义。生物活性肽是一类具有生物活性的肽分子，对人体具有多种生理功能。与氨基酸和蛋白质相比，多肽更容易被人体消化吸收，与其他化合物小分子相比，其更安全、特异性更强，且不易引起严重的免疫排斥反应。目前国内外对于抗衰老肽的研究仍处于初步阶段。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种三肽及其制备方法与用途，该三肽具有良好的抗氧化活性。本专利技术提供了氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的三肽。所述三肽的氨基酸序列为Phe-Gln-Phe，简称FQF。其中，Phe为苯丙氨酸的氨基酸相应残基，Gln为谷氨酰胺的氨基酸相应残基。其化学式如式I所示：本专利技术还提供了编码权利要求1所述三肽的DNA分子。本专利技术中，所述编码所述三肽的DNA分子的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，具体为AAAGTTAAA。本专利技术所述三肽可采用固相合成法、液相合成法或固液结合的方式进行人工合成，也可以采用基因工程的手段进行三肽的合成。本专利技术所述三肽的制备方法，包括：按照SEQIDNO:1所示氨基酸序列，在固相载体上逐一偶联氨基酸得到肽树脂，裂解后得到三肽。具体的，所述固相合成的方法具体包括：按照所述SEQIDNO:1所示多肽的氨基酸序列，从氨基酸序列的C端到N端，将Fmoc保护氨基酸和树脂进行逐一偶联，然后裂解液脱除树脂和保护氨基酸侧链保护基，获得粗品，粗品纯化后获得所述三肽。固相合成发合成三肽的方法中，所述固相载体为二氯树脂。固相合成发合成三肽的方法中，所述偶联的偶联剂为DIEA。所述偶联剂用量优选为过量。具体为10倍树脂摩尔量。所述偶联的条件为室温30min。固相合成发合成三肽的方法中，所述裂解的裂解剂由TFA、水、EDT和TIS组成。优选的，TFA、水、EDT和TIS的体积比为94.5:2:2.5:1。所述裂解的条件为30℃，2h。进一步的，所述逐一偶联方式中在每步偶联前还包括脱除Fmoc步骤。在一些实施例中，所述脱除Fmoc的试剂为20％哌啶DMF溶液，即哌啶：DMF＝1:4(体积比)，反应时间为15min。本专利技术所述制备方法还包括对制得的多肽进行纯化的步骤。优选采用高效液相色谱纯化多肽。流动相是水和乙腈，所述制备高效液相色谱的起始梯度为：水95％，乙腈5％，结束梯度为：水25％，乙腈75％，梯度时间40min。纯度达到99％以上。所述三肽的基因工程制备方法，包括：将包含编码所述三肽的DNA分子的表达载体转化宿主细胞，诱导表达所述的三肽。所述基因工程的宿主细胞为原核生物、真核生物。具体为大肠杆菌。酵母菌或昆虫细胞。三肽在制备抑制CD38活性的产品中的应用。采用分子对接技术，将FQF肽配体与CD38晶体结构进行对接处理。结果表明，FQF可以与CD38的活性位点Lys129及Asp156发生相互作用，并且能够进入CD38的疏水区域，从而抑制其活性。三肽在制备降低ROS水平的制剂中的应用。不同浓度过氧化氢诱导下Hek293细胞的存活率，表明过氧化氢诱导的损伤能使细胞内ROS水平上升，最终导致细胞死亡。而FQF高、低剂量组的F本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的三肽。

【技术特征摘要】
1.氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的三肽。2.编码权利要求1所述三肽的DNA分子。3.权利要求1所述三肽的制备方法，包括：按照SEQIDNO:1所示氨基酸序列，在固相载体上逐一偶联氨基酸得到肽树脂，裂解后得到三肽。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述偶联的偶联剂为DIEA。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述裂解的裂解剂由TFA、水、EDT和T...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹西拳，梁明，马忠华，任娇艳，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44