一种靶向聚合物制备方法、靶向脂质体、脂质体靶向制剂的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种靶标分子二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇‑甘草次酸，利用靶标分子制备脂质体，该脂质体包括以下组分DSPE‑PEG‑GA、卵磷脂和胆固醇，由于GA分子的引入使得脂质体递送药物的准确性提高，运送药物到达靶标部位进行释放，更好的发挥抗肿瘤作用，故利用该脂质体负载CUR与CA4P，得到CUR&CA4P/GA‑LPs。本发明专利技术采用姜黄素和康普瑞汀磷酸二钠两种药物联合，通过抑制肿瘤细胞增殖和抗肿瘤血管生成两种途径达到协同抗肿瘤的效果，并解决了单一药物长期治疗所产生的肿瘤耐药性问题。

Preparation of a Targeted Polymer, Preparation and Application of Targeted Liposomes and Liposome Targeted Preparations

The invention discloses a target molecule, bisstearoyl phosphatidylethanolamine, polyethylene glycol and glycyrrhetinic acid, and uses the target molecule to prepare liposomes. The liposomes include the following components: DSPE, PEG, GA, lecithin and cholesterol. The introduction of GA molecule improves the accuracy of the delivery of drugs by liposomes, and the delivery of drugs reaches the target site for release, thus giving better anti-swelling effect. Therefore, the liposome was used to load CUR and CA4P to obtain CUR&CA4P/GA LPs. The invention combines curcumin and diphosphate diphosphate, achieves synergistic anti-tumor effect by inhibiting the proliferation of tumor cells and anti-angiogenesis of tumors, and solves the problem of drug resistance caused by long-term treatment of single drug.

【技术实现步骤摘要】
一种靶向聚合物制备方法、靶向脂质体、脂质体靶向制剂的制备方法及应用
本专利技术涉及一种靶向药物系统、具体涉及一种用于靶向药物系统中的靶向聚合物、靶向聚合物的制备方法、靶向脂质体、脂质体靶向制剂及其制备方法。
技术介绍
肝细胞癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。化疗是肝癌临床治疗的主要策略之一。然而，各种临床研究表明，传统的细胞毒性化疗药物，如阿霉素、紫杉醇等，由于全身毒性、缺乏选择性和耐药性，临床疗效有限。所以，寻找一种新的治疗方案以解决此类问题的需求是非常迫切的。在临床上，两种或两种以上药物通过不同的抗肿瘤方法联合治疗的效果越来越明显，抗血管生成是一种很有前途的抗肿瘤策略，通过阻断肿瘤血管的发展。因此，将化疗药物与抗血管生成药物联合使用，可以更有效地提高治疗效果。姜黄素(CUR)是一种从姜黄根茎中提取出来的二酚类化合物，具有抗前列腺癌、乳腺癌和结肠癌的强效作用，被认为是第三代抗癌药物。它可以通过抑制增殖来调控信号通路，从而抑制癌细胞生长并诱导细胞凋亡。亲水性药物康普瑞汀磷酸二钠是一种以血管为靶点的新型抗肿瘤化合物，是可溶性磷酸盐康普瑞汀的前体药物。康普瑞汀磷酸二钠((CA4P)主要作用于肿瘤的血管内皮细胞，引起肿瘤血管收缩功能障碍，导致肿瘤细胞因供血不足而死亡。但是二者在临床应用上均具有一定的局限性，如：姜黄素属于脂溶性药物，在水中溶解度低，康普瑞汀磷酸二钠在体内的半衰期较短，影响疗效的发挥。还存在着多药耐药、系统性毒性以及非特异性的缺点。所以，寻求一种新的药物剂型，对于实现提高两药联用的治疗效果得同时降低系统性毒副作用方面是非常必要的。药物递送系统(DDS)提供了一个可以实现有效地共同递送多种药物的机会，且已有多种纳米载药系统上市和进行临床实验阶段。在不同的纳米载体中，脂质体(liposomes，LPs)受到越来越多的关注，其结构包含亲水核和疏水壳，对亲水、疏水和两性药物具有显著的包封强度，解决药物的溶解性问题。此外，脂质体相对于其他药物传递载体具有显著的优势，包括能降低全身毒性，适当的粒径可增强实体肿瘤的特异性积累，结构的灵活性可增强药物的持续释放等。再者，脂质体具有被动靶向性，很容易被巨噬细胞所代表的单核细胞吞噬。静脉给药可选择性聚焦于单核吞噬细胞系统，70％～89％聚焦于肝脾，所以对于治疗肝肿瘤和预防肿瘤转移比较有优势。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术提供了一种靶向聚合物制备方法。本专利技术的另一目的是提供了利用靶向聚合物制备的靶向脂质体。本专利技术还提供了脂质体靶向制剂的制备方法及应用。技术方案：为了解决上述问题，本专利技术第一方面提供了一种靶向聚合物制备方法，包括以下步骤：(1a)将甘草次酸溶于有机溶剂，加入缩合剂，搅拌1-2h，去除有机溶剂，将所得固体加入到乙二胺中，室温搅拌12-24h，去除乙二胺，提纯得到经乙二胺改性的甘草次酸；(1b)将DSPE-PEG-NHS与步骤(1a)得到的改性的甘草次酸，按照摩尔比为1:1-10溶于有机溶剂中，氮气保护下反应室温反应36-48h，反应结束后，进行反应物提纯，得到靶向聚合物二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-甘草次酸(DSPE-PEG-GA)。优选地，步骤(1a)中，所述缩合剂为DMT-MM，所述甘草次酸、缩合剂与乙二胺的质量比为1-1.5:0.5-1.5:5-30。优选地，步骤(1b)中，在所述有机溶剂中加入pH调节剂和催化剂，所述pH调节剂为三乙胺，所述催化剂为EDC。本专利技术中的靶向聚合物的反应原理如图(1)所示，本专利技术的靶向聚合物的制备包括以下步骤：如图1A所示，先将甘草次酸(GA)溶于有机溶剂甲醇中，加入缩合剂4-(4,6-二甲氧基三嗪)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMT-MM)，置于反应容器中反应，室温下搅拌，旋蒸除去甲醇，将所得的固体缓慢加入到乙二胺中，室温搅拌过夜，旋蒸除去乙二胺，旋蒸后的固体用乙醇溶解，超声，加入硅胶粉，旋蒸除去乙醇，得到粉末状固体，经分离纯化后得到经过乙二胺修饰的甘草次酸(GA-N)粉末，分离纯化的具体步骤为：将硅胶粉溶解在乙酸乙酯中，导入柱子，使硅胶沉积，形成致密的硅胶柱；上样：将GA-N粉末缓缓倒入柱内，加乙酸乙酯，使得液面不低于粉末；洗脱：将体积比为2:1的乙酸乙酯和乙醇作为展开剂，加入柱内进行洗脱；收集：样品加入时开始收集，收集过程中进行TLC检测，待出现样品点为止。如图1B所示，将修饰后的甘草次酸溶于二甲基亚砜，随后加入DSPE-PEG-NHS粉末，可视反应情况，加EDC催化反应，在反应体系中加入少量pH调节剂三乙胺以调节pH，氮气保护下反应，将所得的反应产物透析，冷冻干燥得DSPE-PEG-GA固体。本专利技术第二方面提供了上述制备的靶向聚合物在肝脏靶向给药系统中的应用。本专利技术第三方面提供了利用上述制备的靶向聚合物制备的靶向脂质体，所述靶向脂质体包含质量比为1-10:3-30:2-20的靶向聚合物、磷脂和胆固醇。GA分子的引入增强了整个脂质体体系的主动靶向性，肝细胞膜上存在GA的特异性受体，与GA特异性结合。因此，与未修饰的脂质体相比，GA修饰的脂质体对肝癌细胞和组织有更理想的主动靶向作用，这将有利于进一步提高其抗肿瘤疗效。本专利技术中的磷脂可选自天然磷脂，也可选自合成磷脂，优选地，所述磷脂选自大豆磷脂、卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中的一种或多种。进一步地，本专利技术中的磷脂可全部选自天然磷脂，如大豆磷脂、卵磷脂中的一种或几种；本专利技术的磷脂也可全部来自合成磷脂，如二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)中的一种或多种。本专利技术的靶向脂质体采用薄膜分散法制备，优选地，制备靶向脂质体采用的介质为pH＝7.4的PBS缓冲液，其作用为乳化磷脂和胆固醇以形成纳米脂质体。本专利技术第四方面提供了脂质体靶向制剂，具体为在上述靶向脂质体中负载药物姜黄素和康普瑞汀二钠；所述脂质体靶向制剂包含脂质体、姜黄素和康普瑞汀二钠；所述姜黄素与所述磷脂的质量比为1:20-60；所述姜黄素与所述康普瑞汀二钠的质量比为10-1:1-10。本专利技术第五方面提供了脂质体靶向制剂的制备方法，具体为包含以下步骤：(2a)将磷脂、胆固醇，DSPE-PEG-GA，溶解于有机溶剂中，加入姜黄素溶解，旋蒸除去有机溶剂，待形成一层均匀的薄膜时，加入康普瑞汀二钠水溶液进行水化，水化时间为30-60min；(2b)将步骤(2a)中经过水化的溶液超声处理，超声时间为5-10min，随后除去未包封的游离药物，得脂质体靶向制剂。步骤(2a)中，所述DSPE-PEG-GA、磷脂和胆固醇质量比为1-10:3-30:2-20；所述姜黄素与所述磷脂的质量比为1:20-60；所述姜黄素与所述康普瑞汀二钠的质量比为10-1:1-10。进一步地，步骤(2a)中的有机溶剂可选用三氯甲烷(氯仿)或者乙醚，旋蒸仪旋蒸的条件可为：转速为15-60rpm，水浴温度为30-40℃。待形成均匀的薄膜后，加入康普瑞汀磷酸二钠PBS水溶液进行水化，水浴温度为35-60℃，水化时间为30-60min。进一步地，除去游离药物选用透本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向聚合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1a)将甘草次酸溶于有机溶剂，加入缩合剂，搅拌1‑2h，去除有机溶剂，将所得固体加入到乙二胺中，室温搅拌12‑24h，去除乙二胺，提纯得到经乙二胺改性的甘草次酸；(1b)将DSPE‑PEG‑NHS与步骤(1a)得到的改性的甘草次酸，按照摩尔比为1:1‑10溶于有机溶剂中，氮气保护下反应室温反应36‑48h，反应结束后，进行反应物提纯，得到靶向聚合物DSPE‑PEG‑GA。

【技术特征摘要】
1.一种靶向聚合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1a)将甘草次酸溶于有机溶剂，加入缩合剂，搅拌1-2h，去除有机溶剂，将所得固体加入到乙二胺中，室温搅拌12-24h，去除乙二胺，提纯得到经乙二胺改性的甘草次酸；(1b)将DSPE-PEG-NHS与步骤(1a)得到的改性的甘草次酸，按照摩尔比为1:1-10溶于有机溶剂中，氮气保护下反应室温反应36-48h，反应结束后，进行反应物提纯，得到靶向聚合物DSPE-PEG-GA。2.根据权利要求1所述的靶向聚合物的制备方法，其特征在于步骤(1a)中，所述缩合剂为DMT-MM，所述甘草次酸、缩合剂与乙二胺的质量比为1-1.5:0.5-1.5:5-30。3.根据权利要求1所述的靶向聚合物的制备方法，其特征在于步骤(1b)中，在所述有机溶剂中加入pH调节剂和催化剂，所述pH调节剂为三乙胺，所述催化剂为EDC。4.一种由权利要求1-3制备的靶向聚合物在肝脏靶向给药系统中的应用。5.一种靶向脂质体，其特征在于，包含如权利要求1-3所述的任一靶向聚合物、磷脂和胆固醇，所述靶向聚合物、磷脂与胆固醇的质量比为1-10:3-30:2-20。6.根据权利要求5所述的靶向脂质体，其特征在于，所述磷脂选自大豆磷脂、卵磷脂、二硬脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：武敬亮，姜虹，高志芹，张波，田桂香，李志鹏，连波，
申请(专利权)人：潍坊医学院，
类型：发明
国别省市：山东,37