The invention discloses a purification method of natural thrombin regulatory protein. The method consists of the following steps: (1) a composite column with hydrophobic groups and anisole as ligand is selected and then equipped with equilibrium solution and eluent; (2) an intermediate in thrombin-regulated protein solution with a concentration of 0.005 10 mg/mL is selected to regulate the intermediate in thrombin-regulated protein solution by balancing 3 5 times the volume of phosphate to the conductivity and pH of the equilibrium solution; (2) an intermediate in thrombin-regulated protein solution with a concentration of 0.005 10 mg/mL is selected to regulate At pH 4.0 8.0, the sample was purified by composite column chromatography. After the sample was sampled, it was washed with equilibrium solution of pH 4.0 8.0, then washed with washing solution of pH 4.0 8.0, and then washed with eluent to collect the eluent; (3) the eluent obtained in step (2) was ultrafiltered to obtain the concentrated solution; (4) the concentrated solution obtained in step (3) was poured into freeze-dried plate to obtain thrombin-regulated eggs. White refined products. The invention has simple operation, high yield and high purity.
【技术实现步骤摘要】
一种天然凝血酶调节蛋白的纯化方法
本专利技术涉及一种天然凝血酶调节蛋白的纯化方法。
技术介绍
溶解型凝血酶调节蛋白(Thrombomodulin，TM)主要存在于人血浆和人尿液中，是由557个氨基酸残基构成的糖蛋白，分子量约为60,300D，等电点约为3.8。TM最初由N.L.Esmon等于1981年在实验中发现，其结构包括一个氨基端的植物凝集样结构域，6个重复排列的内皮生长因子(endothelialgrowthfactor，EGF)样结构域，一个丝氨酸/苏氨酸富集区(疏水区域)，一个跨膜区和一个短的细胞内尾端。TM因具有强力的血液凝固阻断作用而为人所知，其通过与凝血酶特异性结合来阻断凝血酶的血液凝固活性，同时TM能够显著促进凝血酶的蛋白质C(ProteinC，PC)的活化，是PC抗凝途径的重要辅因子。临床上TM主要用于凝血系统紊乱而致的弥散性血管内凝血(DIC)。目前各类文献中针对天然来源——人凝血酶调节蛋白的分离提纯也做了不少工作，例如Yamamoto等纯化TM的过程使用了QAE交联葡聚糖，抗TM单克隆抗体柱，凝血酶作为配体的亲和柱和交联葡聚糖G-200，但...
【技术保护点】
1.一种天然凝血酶调节蛋白的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)选用带有疏水基团并以苯甲醚为配基的复合型层析柱，然后配置平衡液和洗脱液；复合型层析柱用3‑5倍柱体积的磷酸盐平衡至电导、pH与平衡液一致，磷酸盐的pH为4.0‑8.0，磷酸盐的浓度为0.02‑0.05摩尔/升；(2)取浓度为0.005‑10mg/mL的凝血酶调节蛋白溶液中间体，调节凝血酶调节蛋白溶液中间体的pH至4.0‑8.0，上样复合型层析柱层析纯化，上样结束后用pH为4.0‑8.0的平衡液冲洗，再用pH为4.0‑8.0的冲洗液冲洗，该冲洗液包括0‑0.3摩尔/升的氯化钠，然后用pH为4.0‑8.0的洗...
【技术特征摘要】
1.一种天然凝血酶调节蛋白的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)选用带有疏水基团并以苯甲醚为配基的复合型层析柱，然后配置平衡液和洗脱液；复合型层析柱用3-5倍柱体积的磷酸盐平衡至电导、pH与平衡液一致，磷酸盐的pH为4.0-8.0，磷酸盐的浓度为0.02-0.05摩尔/升；(2)取浓度为0.005-10mg/mL的凝血酶调节蛋白溶液中间体，调节凝血酶调节蛋白溶液中间体的pH至4.0-8.0，上样复合型层析柱层析纯化，上样结束后用pH为4.0-8.0的平衡液冲洗，再用pH为4.0-8.0的冲洗液冲洗，该冲洗液包括0-0.3摩尔/升的氯化钠，然后用pH为4.0-8.0的洗脱液洗脱，收集洗脱液；(3)将步骤(2)中得到的洗脱液进行超滤，得到浓缩液；(4)将步骤(3)中得到的浓缩液倒至冻干盘冻干，得到凝血酶调节蛋白精制品。2.根据权利要求1所述的天然凝血酶调节蛋白的纯化方法，其特征在于：所述平衡液为乙酸钠或磷酸盐，所述平衡液...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯晓彦，傅和亮，李文全，沈小宁，苏古方，许冬至，贺宜龙，顾明月，
申请(专利权)人：江苏艾迪药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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