固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖水体中15种抗生素的方法技术

本发明专利技术提供了一种固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖水体中15种抗生素的方法。该方法包括：(1)水样预处理，加入磺胺甲噁唑‑

【技术实现步骤摘要】
固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖水体中15种抗生素的方法
本专利技术属于水环境污染物的检测
，涉及一种水产养殖水体中同时检测痕量15种常用抗生素的检测方法，尤其涉及一种固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖水体中15种抗生素的方法。
技术介绍
水产养殖中使用抗生素治疗和预防细菌性病害始于20世纪50年代。随着水产养殖业的迅速发展，养殖过程中病害的发生频率越来越高，抗生素作为兽药的使用范围和用量日益増大。随着养殖者们对水产养殖的经济利益追求和水生生物耐药性的增加，抗生素的使用剂量不断提高，甚至以不合理的高剂量使用。滥用抗生素的不良影响和对人类的危害显现越来越严重的趋势，并逐渐成为人们普遍关注的一个社会热点问题。据统计，我国每年大约有750-1000t金霉素、500-700t土霉素、400t诺氟沙星、100t环丙沙星、15t氧氟沙星用于动物的饲料添加剂。已有研究表明，2003年，我国磺胺类抗生素的总产量突破2000t，其中大约有4500t作为兽药在中国境内使用。可以看出，目前我国养殖业中抗生素类药物的使用数量相当惊人。在高密度的水产养殖业内，水产养殖过程中使用的抗生素70-80％最终进入水环境。随着人类对于水环境安全问题的日益重视，有关环境水体中抗生素残留检测的专利和论文已有公开发表，但这些研究多针对某一类或两三类抗生素的同步分析并且所分析抗生素的总数量最不多。然而抗生素的种类数量繁多，关于多种类多数量抗生素残留的分离富集和同步分析方法的建立显得颇为重要。高效液相色谱串联质谱法在定量分析时可以根据特征离子和由此特征离子断裂产生的特征碎片作为某一目标化合物的指纹，将它从复杂机制的混合物样品中筛选出来进行定量，保证了检测的准确度和精确度。随着抗生素在水产养殖过程中大量使用，对于能够快速、灵敏、准确地测定各种水产养殖水体中尽可能多的抗生素残留存在迫切需要。然而，目前针对水产养殖水体中多种抗生素的分离富集和共检测尚无一套完整可靠的检测方法，现有的检测方法普遍存在不稳定、干扰多、检测抗生素的数量和种类有限、回收率有限等问题，因此，急需一种检测结果稳定、干扰小，能够快速、高效、灵敏、准确，同时检测出水产养殖水体中尽可能多的抗生素残留的包括分离富集和共检测的完整可靠的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的旨在：克服现有技术存在的不稳定、干扰多、检测抗生素数量和回收率有限等问题的不足，提供一种检测结果稳定、干扰小、快速、高效的同时检测水产养殖水体种残留的15种典型抗生素的方法，即一种固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖水体中15种抗生素的方法。本专利技术的技术构思如下：本专利技术的方法采用固相萃取(SPE)前处理结合高效液相色谱串联质谱技术(SPE-HPLC-MS/MS)，通过前处理过程的优化、液相色谱条件和质谱条件的优化，最终能够实现准确、稳定，干扰小、快速并高效地对水产养殖水样品中15种典型抗生素的同时富集和定量测定。该方法采用单因素实验，筛选合适的固相萃取柱，并对固相萃取富集过程中活化方法、淋洗方法、洗脱方法进行了优化，可一次性同时检测出15种抗生素的残留情况，具有高精密度、高灵敏度、高稳定性、高选择性和检出限低等优点。该方法将指示回收率的内标物加在固相萃取前，能够很好地表示前处理过程中目标物质的损失，使最终结果真实可靠。该方法可为水产养殖水体中残留的抗生素，包括磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺间二甲氧基嘧啶、甲氧苄啶、喹乙醇、磺胺甲恶唑、阿莫西林、呋喃唑酮、环丙沙星盐酸盐、诺氟沙星、恩诺沙星、金霉素、土霉素和盐酸多西环素15种抗生素，提供有效准确的检测方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：本专利技术一种固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖水体中15种抗生素的方法，该方法包括：(1)水样的预处理，在目标物富集前加入内标物指示回收率；(2)使用固相萃取柱富集净化目标抗生素；(3)采用内标法，使用液质联用仪定量检测水产养殖水体中15种抗生素的含量。本专利技术一种固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖水体中15种抗生素的方法，具体按如下步骤进行：(1)水样的预处理水样经滤膜过滤除去悬浮物后，分别加入磺胺甲噁唑-13C6、甲氧苄啶-D3、青霉素G钾盐-D5、诺氟沙星-D5、四环素-D6、喹乙醇-D4、阿莫西林-13C6这七种指示回收率的内标物；调节水样pH；(2)固相萃取富集目标抗生素：依次用甲基叔丁基醚、甲醇、超纯水活化固相萃取柱；将步骤(1)中处理过的水样过已活化的固相萃取柱；富集完成后用淋洗液淋洗固相萃取柱并真空干燥；再用一定体积的洗脱溶剂洗脱目标物，收集洗脱液并在氮气流下吹干，所得残渣重新溶解，定容；过滤后转移至棕色进样瓶中，待测；(3)高效液相色谱串联质谱法测定水体中七类15种抗生素的含量将步骤(2)中待测样品，采用内标法，在高效液相色谱串联质谱仪上，定量检测棕色进样瓶内从水体富集到的15种抗生素的含量；所述的15种抗生素包括水产养殖常用或被禁用的物质，包括磺胺类、喹诺酮类、四环素类、β-内酰胺类、硝基呋喃类、甲氧苄啶、喹乙醇这七类抗生素；15种抗生素分别为磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺间二甲氧基嘧啶、甲氧苄啶、喹乙醇、磺胺甲噁唑、磺胺二甲嘧啶、阿莫西林、呋喃唑酮、环丙沙星盐酸盐、诺氟沙星、恩诺沙星、金霉素、土霉素和盐酸多西环素。进一步地，步骤(1)中，固相萃取前分别加入100ng/L的磺胺甲噁唑-13C6、甲氧苄啶-D3、青霉素G钾盐-D5、诺氟沙星-D5、四环素-D6、喹乙醇-D4和阿莫西林-13C6这七种内标物指示回收率。进一步地，步骤(1)中，水样经玻璃纤维滤膜过滤除去颗粒状悬浮物后，先加入指示回收率的内标物，再用稀盐酸调节pH值至3左右，pH值大致范围在3±0.1。更进一步地，步骤(1)中，样品过滤采用孔径为0.7μmWhatmanGF/F系列玻璃纤维滤膜。其目的是过滤去除颗粒悬浮物质，防止影响后续对目标物的富集和检测。进一步地，上述步骤(2)中，浓缩富集样品所用的固相萃取柱是Waters公司OasisHLB小柱，其吸附剂是由亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔共聚物，是用于酸性、中性和碱性化合物的通用型吸附剂。更进一步地，上述步骤(2)中，活化固相萃取柱所用的甲基叔丁基醚、甲醇和水用量各为萃取柱体积的1倍，活化固相萃取柱的流速控制在1-4mL/min；水样过柱流速(水样上样速度)控制在3-5mL/min；淋洗萃取柱所用的纯水和低浓度甲醇水溶液各为萃取柱体积的1-2倍；淋洗后的抽干，时间为2min；洗脱固相萃取柱所用的洗脱溶剂为甲醇，甲醇洗脱溶剂的量为萃取柱体积的2倍，洗脱液流速控制在4-5mL/min。更进一步地，上述步骤(2)中，淋洗所用的低浓度甲醇为体积浓度小于5％的甲醇-水溶液，目的是去除杂质，减少噪声干扰。更进一步地，上述步骤(2)中，洗脱固相萃取柱所用的甲醇采用HPLC级甲醇洗脱，结束后真空将柱子里残留的甲醇收集。洗脱后，洗脱液在水浴加热40℃条件下氮吹至近干。更进一步地，上述步骤(2)中，采用体积浓度为70％的甲醇-水溶液定容，超声2min后用针式滤器过滤后转移至棕色进样瓶中待测，针式滤器选用孔径为0.22μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖水体中15种抗生素的方法，其特征在于，按以下步骤进行：(1)水样的预处理水样经滤膜过滤除去悬浮物后，分别加入磺胺甲噁唑‑13C6、甲氧苄啶‑D3、青霉素G钾盐‑D5、诺氟沙星‑D5、四环素‑D6、喹乙醇‑D4和阿莫西林‑13C6这七种指示回收率的内标物；调节水样pH；(2)固相萃取富集目标抗生素依次用甲基叔丁基醚、甲醇、超纯水活化固相萃取柱；将步骤(1)中处理过的水样过已活化的固相萃取柱；富集完成后用淋洗液淋洗固相萃取柱并真空干燥；再用一定体积的洗脱溶剂洗脱目标物，收集洗脱液并在氮气流下吹干，所得残渣重新溶解，定容；过滤后转移至进样瓶中，待测；(3)高效液相色谱串联质谱法测定水体中七类15种抗生素的含量采用内标法，在高效液相色谱串联质谱仪上，定量检测进样瓶内从水体富集到的15种抗生素的含量；所述的15种抗生素包括磺胺类、喹诺酮类、四环素类、β‑内酰胺类、硝基呋喃类、甲氧苄啶、喹乙醇这七类抗生素；15种抗生素分别为磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺间二甲氧基嘧啶、甲氧苄啶、喹乙醇、磺胺甲噁唑、磺胺二甲嘧啶、阿莫西林、呋喃唑酮、环丙沙星盐酸盐、诺氟沙星、恩诺沙星、金霉素、土霉素和盐酸多西环素。...

【技术特征摘要】
1.一种固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖水体中15种抗生素的方法，其特征在于，按以下步骤进行：(1)水样的预处理水样经滤膜过滤除去悬浮物后，分别加入磺胺甲噁唑-13C6、甲氧苄啶-D3、青霉素G钾盐-D5、诺氟沙星-D5、四环素-D6、喹乙醇-D4和阿莫西林-13C6这七种指示回收率的内标物；调节水样pH；(2)固相萃取富集目标抗生素依次用甲基叔丁基醚、甲醇、超纯水活化固相萃取柱；将步骤(1)中处理过的水样过已活化的固相萃取柱；富集完成后用淋洗液淋洗固相萃取柱并真空干燥；再用一定体积的洗脱溶剂洗脱目标物，收集洗脱液并在氮气流下吹干，所得残渣重新溶解，定容；过滤后转移至进样瓶中，待测；(3)高效液相色谱串联质谱法测定水体中七类15种抗生素的含量采用内标法，在高效液相色谱串联质谱仪上，定量检测进样瓶内从水体富集到的15种抗生素的含量；所述的15种抗生素包括磺胺类、喹诺酮类、四环素类、β-内酰胺类、硝基呋喃类、甲氧苄啶、喹乙醇这七类抗生素；15种抗生素分别为磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺间二甲氧基嘧啶、甲氧苄啶、喹乙醇、磺胺甲噁唑、磺胺二甲嘧啶、阿莫西林、呋喃唑酮、环丙沙星盐酸盐、诺氟沙星、恩诺沙星、金霉素、土霉素和盐酸多西环素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，分别加入100ng/L的磺胺甲噁唑-13C6、甲氧苄啶-D3、青霉素G钾盐-D5、诺氟沙星-D5、四环素-D6、喹乙醇-D4和阿莫西林-13C6这七种内标物指示回收率。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，水样经玻璃纤维滤膜过滤除去颗粒状悬浮物后，先加入指示回收率的内标物，再用稀盐酸调节pH值至3±0.1。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，水样过滤所用的玻璃纤维滤膜为孔径0.7μmWhatmanGF/F系列玻璃纤维滤膜。5.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所用的固相萃取柱是Waters公司OasisHLB小柱，其吸附剂是由亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔共聚物，是用于酸性、中性和碱性化合...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洪昌，沈根祥，胡双庆，郭春霞，钱晓雍，王真，汪仙仙，李贞金，
申请(专利权)人：上海市环境科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海,31