一种果蝇卵巢高表达转基因载体的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种果蝇卵巢高表达转基因载体的构建方法，涉及生物基因工程技术领域，本发明专利技术使用一定长度的连接区(linker)将Gal4/UAS系统合二为一，并用VP16增强Gal4活性，以GFP蛋白质作为标签构建出一种在果蝇生殖系细胞中一步高表达的载体，该载体的NosP启动子两端有单一酶切位点，能够被替换，可以用来探究其它启动子的有效长度及表达模式，或者控制GFP的表达与否；在GFP序列的两端也有单一酶切位点，可被换成目的基因的编码区，进行组织特异性高表达靶蛋白；该载体具有直接、高效和灵活等特色，能够为广大科研工作者带来诸多便利。

【技术实现步骤摘要】
一种果蝇卵巢高表达转基因载体的构建方法
本专利技术涉及生物基因工程
，特别是指一种果蝇卵巢高表达转基因载体的构建方法。
技术介绍
绿色荧光蛋白(GFP)最早是由下村修等人在1962年在一种学名Aequoreavictoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色荧光。在细胞生物学与分子生物学领域中，绿色荧光蛋白基因常被用作为一个报告基因(reportergene)，克隆并转移到其他生物体内进行表达。1994年ChalfieM等人首先在大肠杆菌细胞中表达了GFP，开创了GFP应用研究的先河。1997年李寿东等在载体构建中将GFP用作重组子筛选的标记，同年，ChiocchettiA等人在研究转基因小鼠将GFP作为报告基因。GFP报告系统所涉及的实验方法，其具体过程是：首先，利用PCR技术获得标签的编码基因序列，然后，将此序列插入原核或真核表达载体的多克隆位点，在多克隆位点的上游已经存在表达所需的启动子。最后，将此表达载体转化适宜的宿主(细菌或真核细胞)来表达GFP。利用此技术，可以检测上游启动子的有效性和亚细胞定位。Gal4/UAS系统被广泛应用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种果蝇卵巢高表达转基因载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)GFP序列和果蝇nos基因3′UTR序列的扩增；(2)GFP‑nos3′UTR序列的扩增；(3)pattB‑NosP‑GFP‑3′UTR过渡载体的构建；(4)以果蝇基因组为模板，扩增出Gal4/VP16和nos3′UTR序列；以pcDNA3.1‑Flag‑HA质粒为模板，扩增出linker区；以pattB‑UASp载体为模板扩增出UASp序列；(5)GVP‑nos3′UTR和linker‑UASp序列的扩增；(6)GVP‑nos3′UTR‑linker‑UASp序列的扩增；(7)目标载体pattB‑NosP‑GVP‑n...

【技术特征摘要】
1.一种果蝇卵巢高表达转基因载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)GFP序列和果蝇nos基因3′UTR序列的扩增；(2)GFP-nos3′UTR序列的扩增；(3)pattB-NosP-GFP-3′UTR过渡载体的构建；(4)以果蝇基因组为模板，扩增出Gal4/VP16和nos3′UTR序列；以pcDNA3.1-Flag-HA质粒为模板，扩增出linker区；以pattB-UASp载体为模板扩增出UASp序列；(5)GVP-nos3′UTR和linker-UASp序列的扩增；(6)GVP-nos3′UTR-linker-UASp序列的扩增；(7)目标载体pattB-NosP-GVP-nos3′UTR-linker-UASp-GFP-nos3′UTR的构建。2.根据权利要求1所述的果蝇卵巢高表达转基因载体的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)GFP序列的扩增以PET28a-eGFP质粒为模板，扩增后GFP的碱基序列为SEQIDNO.1。3.根据权利要求1所述的果蝇卵巢高表达转基因载体的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)果蝇nos基因3′UTR序列的扩增以Bloom...

【专利技术属性】
技术研发人员：周利娟，孙福玲，陈冬生，
申请(专利权)人：安徽师范大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34