肽类似物制造技术

提供了CLR/RAMP受体配体的类似物，所述类似物具有激动剂、超激动剂、拮抗剂或超拮抗剂活性。所述类似物可对一种或多种CLR/RAMP受体具有选择性，或者可以是泛特异性的。

Peptide analogues

A CLR/RAMP receptor ligand analogue with agonist, hyperagonist, antagonist or hyperantagonist activity is provided. The analogues may be selective to one or more CLR/RAMP receptors or may be pan-specific.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肽类似物交叉引用本申请要求2016年1月4日提交的美国临时专利申请号62/274,638的权益，所述申请以引用的方式整体并入本文。
本专利技术实施方案涉及肽激素的肾上腺髓质素(ADM)/降钙素基因相关肽(CGRP)/垂体中叶素(肾上腺髓质素2，IMD)家族的超激动剂和超拮抗剂及其治疗性用途。
技术介绍
G蛋白偶联受体(GPCR)是细胞表面受体并且代表人类基因组中最大蛋白质家族之一。基于系统发育标准，人GPCR的大型超家族可细分为五个主要亚家族：谷氨酸酯、视紫红质、粘附、卷曲/味觉和促胰液素(‘GRAFS'命名法)，其中促胰液素家族(类似于Kolakowski/NC-IUPHAR扩展命名系统中的B类GPCR家族)是研究最多的亚类之一。到目前为止，超过三分之一的所有药物都靶向GPCR。GPCR信号转导的规范观点集中于细胞内异三聚体鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(G蛋白)的活化(等人(2008)NatRevDrugDiscov；7:339-357)。配体引发受体介导的细胞反应的能力通过术语“功效”来解决(Kenakin(2013)BrJPharmacol168:554-575；Rajagopal(2013)NatRevDrugDiscov12:483)。历史上，配体的功效源自浓度-效应曲线，并通过相对于标准化合物(如内源性配体)的Emax的功效浓度(EC50)和最大效应(Emax)来量化(Langmead和Christopoulos(2013)BrJPharmacol169:353-356)。然而，在系统中诱导最大反应的药物可在功效上不同，因为激动剂结合所需的受体部分可取决于受体活化的个体功效。因此，反应通常具有一定的测定依赖性限制。GPCR配体通常根据其功效(即引发受体介导的药理学反应的能力)进行分类(Smith等人(2011)MolCellEndocrinol331:241-247)。使用活性状态的GPCR的晶体学研究表明，激动剂结合和G蛋白的结合对于捕获完全活性状态的蛋白质来说是重要的(Rasmussen等人(2011)Nature477:549-555)。此外，最近的研究表明，GPCR激动剂仅稳定可能的构象状态的子集(Kobilka和Deupi(2007)TrendsPharmacolSci28:397-406；Kenakin(2013)BrJPharmacol168:554-575)。因此，给定受体蛋白的各种激动剂可稳定对特定信号传导途径的活化具有不同功效的构象的不同子集(Kenakin(2013)BrJPharmacol168:554-575)。因此，‘强’激动剂可构成类似于由高效激动剂产生的更均匀和完全活性构象的一组构象。因此，稳定比内源性激动剂更均匀的构象的化合物的超生理功效代表超激动剂(Schrage等人(2015)BrJPharmacoldoi:10.1111/bph.13278)。在最大和最‘可药化’的GPCR(视紫红质样类或A类)中，已经描述了表现出比内源性配体更大的内在功效的一些合成化合物。这些化合物包括生长抑素sst4受体、生长素释放肽受体、α2A-肾上腺素受体、促甲状腺激素释放激素TRH1受体和毒蕈碱M2胆碱受体的那些化合物(Schrage等人(2015)BrJPharmacoldoi:10.1111/bph.13278)。在配体门控离子通道处也存在超生理学激动剂功效的实例(Carlier等人(2002)BioorgMedChemLett12:1985-1988；lhara等人(2004)BiosciBiotechnolBiochem68:761-763)。实例包括GABA受体。ADM/CGRP/IMD肽家族包括降钙素基因相关肽(CGRPα和CGRPβ)、肾上腺髓质素(ADM)、垂体中叶素(IM)、降钙素(CT)和淀粉不溶素。其中，CGRP、ADM和IMD在结构上相似，并且通过由两种跨膜组分，即降钙素受体样受体(CLR)和三种受体活性修饰蛋白(RAMP1、2和3)中的一种组成的受体复合物发出信号。降钙素受体样受体(CLR)和受体活性修饰蛋白(RAMP)的共表达是产生CGRP、ADM和IMD的功能性受体所需的。CGRP主要通过CLR/RAMP1受体起作用，而ADM对CLR/RAMP2和3受体具有高亲和力。另一方面，IMD未表现出对三种CLR/RAMP受体的明显偏爱。52-氨基酸ADM在肾上腺、肺、肾、心肌和其他器官中产生；而CGRP肽是神经递质。ADM、CGRP和IMD的血浆水平在皮摩尔范围内。CLR/RAMP受体的活化导致携带受体的细胞中腺苷3',5'-环一磷酸(cAMP)的细胞内升高。CLR/RAMP受体存在于几乎所有器官(包括内皮细胞)中的不同细胞类型上。认为这些肽通过中性肽链内切酶代谢，并且主要通过肾清除，或者在CLR/RAMP受体高度表达的肺中清除[GibbonsC,DackorR,DunworthW,Fritz-SixK,CaronKM,MolEndocrinol21(4),783-796(2007)]。虽然ADM和IMD最初被表征为有效的血管内皮机能调节剂，但随后的研究表明这些肽的功能远远超出降压作用，并且它们在各种器官中表现出多效性效应。对转基因小鼠的研究表明，ADM、CLR和RAMP2对胚胎发育和成人期期间的血液和淋巴脉管系统的正常发育至关重要。已经显示ADM或IMD的输注减轻血管收缩、外周血管阻力和水肿，并且增加动物的心输出量和肾小球滤过率。这些肽还已经显示对人、绵羊和啮齿类动物的心力衰竭和心肌梗塞；人、猪和大鼠的肺动脉高压具有有益作用。此外，普遍认为ADM和IMD是在疾病状态下作为对损伤和缺氧的代偿性反应而增加的反调节激素。此外，已显示ADM在多种动物模型中改善由脂多糖(LPS)、弹性蛋白酶、野百合碱、博来霉素、缺血再灌注和角叉菜胶诱导的急性或慢性肺损伤。此外，已显示外源性ADM和IMD在体外刺激内皮和淋巴内皮细胞的增殖和迁移，以及在各种动物模型中使受损的淋巴和血管再血管化。此外，这些激素通过改善内皮细胞存活、血管生成和血管完整性、心输出量和肾小球滤过率在患有心力衰竭、心肌梗塞、中风、顽固性高血压、肺动脉高压、先兆子痫、继发性淋巴水肿和糖尿病性溃疡的动物中表现出有神经保护、肾脏保护、利尿和/或尿钠排泄作用。此外，ADM可动员并增强各种干细胞/祖细胞的存活、分化和血管生成效力。CGRP是具有有效血管舒张、强心和疼痛传递作用的感觉神经肽，如Evans等人的美国专利号4,530,838中所描述。CGRP存在于中枢神经系统和外周神经系统中，并且集中在身体的接收来自背角的感觉输入的那些区域中，其具有与自主输入相关的有限量。在脑中，所述肽存在于感觉和运动颅神经的细胞核中以及下丘脑、视前区、腹内侧丘脑、海马体等的细胞体中(Poyner,D.1992,Pharmac.Ther.56:23-51)。此外，已知ADM/CGRP/IMD家族肽对内皮细胞的增殖具有有效的刺激作用，所述内皮细胞充当血管、血管生成和血管重构的起始材料。因为ADM、CGRP和IMD是人中已知最有效的血管舒张剂之一，所以这些肽对于在正常生理学和妊娠期间维持高流量/低阻力循环和胎儿-胎盘组织发育可能是功能本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CLR/RAMP受体激动剂肽，其包含式I的结构：Ba‑Ca‑Da      (I)其中：Ba是肾上腺髓质素肽家族成员的修饰的N‑末端片段，所述片段包含二十至二十八个氨基酸残基，其中所述片段的两个氨基酸残基是半胱氨酸(Cys)，其中所述片段的C‑末端残基是苏氨酸(Thr)；Ca是由3‑12个氨基酸组成的中心核心；并且Da是垂体中叶素(IMD)的修饰的C‑末端片段，所述片段包含3‑6个氨基酸残基与C‑末端酰胺，其中所述C‑末端片段的至少一个氨基酸是组氨酸(His)、脯氨酸(P)、丝氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.04 US 62/274,6381.一种CLR/RAMP受体激动剂肽，其包含式I的结构：Ba-Ca-Da(I)其中：Ba是肾上腺髓质素肽家族成员的修饰的N-末端片段，所述片段包含二十至二十八个氨基酸残基，其中所述片段的两个氨基酸残基是半胱氨酸(Cys)，其中所述片段的C-末端残基是苏氨酸(Thr)；Ca是由3-12个氨基酸组成的中心核心；并且Da是垂体中叶素(IMD)的修饰的C-末端片段，所述片段包含3-6个氨基酸残基与C-末端酰胺，其中所述C-末端片段的至少一个氨基酸是组氨酸(His)、脯氨酸(P)、丝氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)。2.如权利要求1所述的激动剂，其中Ca是3-12个残基的核心。3.如权利要求1或权利要求2所述的激动剂，其中所述N-末端片段Ba包含：B0-B1-B2-C-B4-B5-G-B7-C-B9-B10-B11-B12-B13-B14-B15-B16-B17-B18-B19-B20-B21(SEQIDNO:1)，其中：B0存在或不存在，或是KTKKTLRT的氨基串；B1是选自由以下组成的组：空残基、组氨酸(His)、酰化组氨酸(acy-His)、双酰化氨基酸(acy-His(acy))、ace-组氨酸(acy)(ace-His(acy))、微型-PEG-酰化-组氨酸(微型-PEG-His(acy))、精氨酸(Arg)、酰化精氨酸(acy-Arg)、双酰化精氨酸(acy-Arg(acy))、ace-精氨酸(acy)(ace-Arg(acy))、微型-PEG-酰化-精氨酸(微型-PEG-Arg(acy))、赖氨酸(Lys)、酰化赖氨酸(acy-Lys)、双酰化赖氨酸(acy-Lys(acy))、ace-赖氨酸(acy)(ace-Lys(acy))以及微型-PEG-酰化-赖氨酸(微型-PEG-Lys(acy))；B2是选自由甘氨酸(Gly)和空残基组成的组；B4是选自由精氨酸(Arg)、组氨酸(His)和赖氨酸(Lys)组成的组；B5是选自由苯丙氨酸(Phe)和亮氨酸(Leu)组成的组；B7是选自由丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)组成的组；B9是选自由丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)、谷氨酰胺(Gln)以及天冬酰胺(Asn)组成的组；B10是选自由缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)以及亮氨酸(Leu)组成的组；B11是选自由谷氨酰胺(Gln)和天冬酰胺(Asn)组成的组；B12是选自由组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、谷氨酰胺(Gln)和天冬酰胺(Asn)组成的组；B13是选自由缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)组成的组；B14是选自由缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)组成的组；B15是选自由组氨酸(His)、精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)组成的组；B16是选自由空残基、谷氨酰胺(Gln)和天冬酰胺(Asn)组成的组；B17是选自由缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)组成的组；B18是选自由色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)组成的组；B19是选自由谷氨酰胺(Gln)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和天冬酰胺(Asn)组成的组；B20是选自由色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)组成的组；B21是选自由丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)、甲硫氨酸(Met)、色氨酸(Trp)以及苯丙氨酸(Phe)组成的组。4.如权利要求1-3中任一项所述的激动剂，其中所述Ba序列是选自由SEQIDNO:2-16组成的组。5.如权利要求1-5中任一项所述的激动剂，其中所述中心核心Ca包含人肾上腺髓质素或垂体中叶素的片段。6.如权利要求5所述的激动剂，其中Ca的片段包含3至12个氨基酸。7.如权利要求1-6中任一项所述的激动剂，其中Ca包含：C1-C2-C3-C4-C5-C6-C7-C8-C9-C10-C11-C12(SEQIDNO:17)，其中：C1是选自由空残基、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)和脯氨酸(Pro)组成的组；C2是选自由空残基、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)组成的组；C3是选自由空残基、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)组成的组；C4是选自由空残基、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)组成的组；C5是选自由空残基、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)和天冬酰胺(Asn)组成的组；C6是选自由空残基、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)和天冬酰胺(Asn)组成的组；C7是选自由空残基、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)组成的组；C8是选自由空残基、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)组成的组；C9是选自由空残基、脯氨酸(Pro)、缬氨酸(VI)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)组成的组；C10是选自由空残基、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)组成的组；C11是选自由空残基、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)组成的组；C12是选自由空残基、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)和脯氨酸(Pro)组成的组。8.如权利要求7所述的激动剂，其中Ca的所述序列是选自SEQIDNO:18-26。9.如权利要求7所述的激动剂，其中Ca的所述序列与选自SEQIDNO:18-26的序列具有至少60％的序列同一性。10.如权利要求1-9中任一项所述的激动剂，其中Da包含：D1-D2-D3-D4-D5-D6-NH2(SEQIDNO:27)，其中：D1是选自由空残基、Ser、Thr和Tyr组成的组；D2是选自由空残基、Ser、Thr和Tyr组成的组；D3是选自由空残基、Pro、Val、Ala、Gly、Ile和Leu组成的组；D4是选自由空残基、His、Arg和Lys组成的组；D5是选自由空残基、Ser、Thr和Tyr组成的组；并且D6是选自由Ser、Thr和Tyr组成的组。11.如权利要求9所述的激动剂，其中D1-D2-D3-D4-D5-D6-NH2是Ser-Ser-Pro-His-Ser-Tyr-NH2。如权利要求9所述的激动剂，其中Da与Ser-Ser-Pro-His-Ser-Tyr-NH2具有60％的序列同一性。12.如权利要求1所述的激动剂，其包含29至46个氨基酸残基。13.如权利要求1所述的激动剂，其包含第一肽片段，所述第一肽片段具有来自肾上腺髓质素的21个氨基酸残基或更少氨基酸残基；第二肽片段，所述第二肽片段具有来自肾上腺髓质素或垂体中叶素的3-12个氨基酸；以及第三肽片段，所述第三肽片段具有来自垂体中叶素的六个氨基酸残基或更少氨基酸残基。14.如权利要求1所述的激动剂，其包含选自SEQIDNO:29-51和92的序列或其药学上可接受的盐。15.一种修饰的CLR/RAMP2受体特异性超激动剂，所述激动剂包含选自SEQIDNO:69、70、94、101、103和110的序列。16.一种CLR/RAMP受体超激动剂，其包含与SEQIDNO:28-51、69-70、92、94、101、103和110的氨基酸序列具有大于60％序列同一性的氨基酸序列。17.一种CLR/RAMP受体超激动剂，其包含选自SEQIDNO:28-51、69-70、92、94、101、103和110的氨基酸序列的立体异构体、衍生物或肽模拟物。18.一种CLR/RAMP受体超拮抗剂，其包含式II的结构：Bb-Cb-Db(II)，其中Bb是肾上腺髓质素肽家族成员的N-末端片段，所述片段包含四至十三个氨基酸残基；Cb是由3-12个氨基酸组成的中心核心；并且Db是垂体中叶素(IMD)的修饰的C-末端片段，所述片段包含3-6个氨基酸残基与C-末端酰胺，其中所述C-末端片段的至少一个氨基酸是组氨酸(His)、脯氨酸(P)、丝氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)。19.如权利要求18所述的拮抗剂，其中所述N-末端片段Bb包含：B0-B1-B2-B3-B4-B5-B6-B7-B8-B9-B10-B11-B12，其中：B0是选自由以下组成的组：空残基、酰化组氨酸(acy-His)、酰化精氨酸(acy-Arg)、酰化赖氨酸(acy-Lys)、酰化丝氨酸(acy-Ser)、酰化苏氨酸(acy-Thr)、酰化酪氨酸(acy-Tyr)、酰化天冬氨酸(acy-Asp)、酰化谷氨酸(acy-Glu)、酰化谷氨酰胺(acy-Gln)、酰化天冬酰胺(acy-Asn)、酰化缬氨酸(acy-Val)、酰化丙氨酸(acy-Ala)、酰化甘氨酸(acy-Gly)、酰化异亮氨酸(acy-Ile)、酰化亮氨酸(acy-Leu)、酰化苯丙氨酸(acy-Phe)、酰化色氨酸(acy-Trp)、酰化脯氨酸(acy-Pro)、酰化甲硫氨酸(acy-Met)、酰化半胱氨酸(acy-Cys)、双酰化组氨酸(acy-His(acy))、ace-组氨酸(acy)(ace-His(acy))、微型-PEG-酰化-组氨酸(微型-PEG-His(acy))、双酰化精氨酸(acy-Arg(acy))、ace-精氨酸(acy)(ace-Arg(acy))、微型-PEG-酰化-精氨酸(微型-PEG-Arg(acy))、赖氨酸(Lys)、双酰化赖氨酸(acy-Lys(acy))、ace-赖氨酸(acy)(ace-Lys(acy))以及微型-PEG-酰化-赖氨酸(微型-PEG-Lys(acy)；B1是选自由空残基、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)组成的组；B2是选自由空残基、谷氨酰胺(Gln)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和天冬酰胺(Asn)组成的组；B3是选自由空残基、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、谷氨酰胺(Gln)和天冬酰胺(Asp)组成的组；B4是选自由空残基、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)组成的组；B5是选自由空残基、缬氨酸(Val)、丙...

【专利技术属性】
技术研发人员：许晓瑜，
申请(专利权)人：艾得佩索拉公司，
类型：发明
国别省市：美国,US