This paper presents a method of producing T cells from peripheral blood mononuclear cells, such as cytotoxic T lymphocytes. This method does not have an independent step of producing and isolating antigen presenting cells, and uses a single round of antigen stimulation. This article also provides a method for treating cancer and/or viral infections using the cytotoxic T lymphocytes described above, for example.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T淋巴细胞生产方法和由此产生的T淋巴细胞本申请要求2015年12月30日提交的美国临时专利申请No.62/272,984的权益，其公开内容通过引用整体并入本文。1.领域本文的公开内容涉及免疫学领域，更具体地说，涉及产生抗原特异性T淋巴细胞及其使用方法。2.背景在体外产生抗原特异性T细胞，例如，细胞毒性T淋巴细胞(CTL)涉及T细胞抗原特异性活化，随后是例如T细胞增殖。这种T细胞的完全活化涉及T细胞受体(TCR)与抗原呈递细胞(APC)包括树突状细胞(DC)、巨噬细胞和B细胞呈递的同源MHC-肽复合物的连接，以及T细胞和APC之间的共刺激分子的连接。有时，使用无细胞MHC-肽复合物代替APC呈递的MHC-肽复合物。如果共刺激激活有缺陷，T细胞将变为部分激活、经历细胞凋亡、或进入无能状态。B细胞和单核细胞通常都表达MHC-肽复合物形成所需的HLA分子，但缺乏共刺激分子例如CD80和CD86的高表达。没有进一步活化或成熟来获得完全活化的APC，可能出现失败或次优的抗原特异性T细胞诱发和扩增。因此，在体外抗原特异性T细胞诱发之前，通常需要分开的APC诱导和分离步骤，通过从前...
【技术保护点】
1.一种生产包含抗原特异性T细胞，例如细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的细胞群体的方法，包括步骤：(a)从对象分离外周血单核细胞(PBMC)；(b)在抗原递呈细胞(APC)诱导培养基中培养所述PBMC以产生第一细胞群体，所述抗原递呈细胞诱导培养基包含白细胞介素4(IL‑4)和可溶性CD40配体(sCD40L)和/或包含粒细胞‑巨噬细胞集落‑刺激因子(GM‑CSF)和干扰素α(IFN‑α)；(c)在存在一种或更多种抗原的情况下培养所述第一细胞群体以产生第二细胞群体；和(d)在T细胞扩增培养基中培养所述第二细胞群体来产生第三细胞群体，所述T细胞扩增培养基包含白细胞介素7(IL‑7)...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.30 US 62/272,9691.一种生产包含抗原特异性T细胞，例如细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的细胞群体的方法，包括步骤：(a)从对象分离外周血单核细胞(PBMC)；(b)在抗原递呈细胞(APC)诱导培养基中培养所述PBMC以产生第一细胞群体，所述抗原递呈细胞诱导培养基包含白细胞介素4(IL-4)和可溶性CD40配体(sCD40L)和/或包含粒细胞-巨噬细胞集落-刺激因子(GM-CSF)和干扰素α(IFN-α)；(c)在存在一种或更多种抗原的情况下培养所述第一细胞群体以产生第二细胞群体；和(d)在T细胞扩增培养基中培养所述第二细胞群体来产生第三细胞群体，所述T细胞扩增培养基包含白细胞介素7(IL-7)、白细胞介素15(IL-15)和IL-4；其中所述第三细胞群体包含CD3+和特异于步骤(c)中添加的抗原的T细胞。2.权利要求1的方法，其中所述第三细胞群体包含额外为CD4+的T细胞。3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述第三细胞群体包含额外为CD8+的T细胞。4.权利要求1-3的任一项的方法，其中所述APC诱导培养基包含IL-4和sCD40L。5.权利要求1-4的任一项的方法，进一步包括在第二T细胞扩增培养基中培养所述第三细胞群体以创建第四细胞群体的步骤，所述第二T细胞扩增培养基包含IL-7和IL-15，但不包含IL-4；其中所述第四细胞群体包含CD3+和特异于步骤(c)中添加的抗原的T细胞。6.权利要求1-5的任一项的方法，其中所述一种或更多种抗原是冻干的肽的库。7.权利要求1-6的任一项的方法，其中所述冻干的肽的库覆盖的人HPV16E6、HPV16E7、HPV18E6和HPV18E7蛋白的完整序列。8.权利要求6或权利要求7的方法，其中所述肽的浓度是1μg/mL。9.权利要求1-8的任一项的方法，其中所述APC诱导培养基包含8-12ng/mL的IL-4和0.8-1.2μg/mL的sCD40L。10.权利要求9的方法，其中所述APC诱导培养基包含10ng/mL的IL-4和1μg/mL的sCD40L。11.权利要求1-10的任一项的方法，其中所述T细胞扩增培养基包含40-60ng/mL的IL-7、7-11ng/mL的IL-15，和45-65ng/mL的IL-4。12.权利要求11的方法，其中所述T细胞扩增培养基包含50ng/mL的IL-7、9ng/mL的IL-15和55ng/mL的IL-4。13.权利要求5-12的任一项的方法，其中所述第二T细胞扩增培养基包含40-60ng/mL的IL-7和7-11ng/mL的IL-15。14.权利要求13的方法，其中所述第二T细胞扩增培养基包含50ng/mL的IL-7和9ng/mL的IL-15。15.权利要求1-14的任一项的方法,其中步骤(b)的持续时间是1-3天。16.权利要求15的方法，其中步骤(b)的持续时间是1天。17.权利要求1-16的任一项的方法，其中所述PBMC分离自全血、淡黄层或富集的白细胞除去的产品。18.权利要求1-17的任一项的方法，进一步包括从所述第三细胞群体或所述第四细胞群体分离CD3+的T细胞的步骤。19.权利要求1-18的任一项的方法，其中所述抗原特异性CD3+细胞通过细胞内的细胞因子染色(ICCS)来鉴定。20.权利要求1-19的任一项的方法，其中步骤(c)在APC诱导培养基中进行。21.权利要求1-20的任一项的方法，其中所述培养步骤在G–设备中进行。22.权利要求4-21的任一项的方法，其中所述APC诱导培养基进一步包含具有未甲基化的CpG二核苷酸基序的合成的寡核苷酸。23.权利要求22的方法，其中所述APC诱导培养基进一步包含GM-CSF和IFN-α。24.权利要求1的方法，其中所述APC诱导培养基包含GM-CSF和IFN-a。25.权利要求1-24的任一项的方法,其中步骤(d)的持续时间是8-16天。26.权利要求25的方法，其中步骤(d)的持续时间是12天。27.权利要求1-26的任一项的方法，其中所述PBMC以4-6×106/cm2的密度接种在所述APC诱导培养基中。28.权利要求27的方法，其中所述PBMC以5×106/cm2的密度接种。29.一种通过权利要求1-28的任一项的方法生产的抗原特异性T细胞群体。30.一种治疗癌症或病毒感染的方法，包括向有需要的对象施用权利要求29的抗原特异性T细胞群体，其中所述分离的PBMC对于所述患者是自体的。3...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕涛·梁，陆晓华，伟·刘，凯西·E·卡拉斯威茨门德斯，克里斯多佛·维维，克鲁蒂·沙，
申请(专利权)人：细胞基因公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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