本发明专利技术是关于一种夫妻草萃取物的用途，特别是关于一种夫妻草萃取物用于制备抑制基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表现及胶原蛋白分解的组合物的用途。本发明专利技术的夫妻草萃取物是以水、醇类、或醇水混合物为溶剂对夫妻草进行萃取而制得。该夫妻草萃取物透过抑制皮肤纤维母细胞中MMP2的基因表现而降低皮肤中胶原蛋白的分解，因此有助于提升皮肤弹性与紧致度、减少皮肤细纹与皱纹、及推迟皮肤老化。
Use of extract of Herba Margaritae for preparation of compositions inhibiting MMP2 gene expression and collagen decomposition
The invention relates to the use of an extract of marital weed, in particular to the use of an extract of marital weed for preparing a composition for inhibiting the gene expression of matrix metalloproteinase 2 (MMP2) and collagen decomposition. The extract of marital herb is prepared by extracting marital herb with water, alcohols or mixture of alcohol and water as solvent. By inhibiting the expression of MMP2 gene in skin fibroblasts, the extract can reduce the collagen breakdown in skin, thus helping to improve skin elasticity and compactness, reduce fine lines and wrinkles, and postpone skin aging.
【技术实现步骤摘要】
夫妻草萃取物用于制备抑制MMP2基因表现及胶原蛋白分解的组合物的用途
本专利技术是关于一种夫妻草萃取物的用途，特别是关于一种夫妻草萃取物用于制备抑制基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表现及抑制胶原蛋白分解的组合物的用途。
技术介绍
胶原蛋白(collagen)是动物体内含量高丰富的蛋白质，约占体内总蛋白质的25％。胶原蛋白主要分布于动物体内的结缔组织的细胞外基质，例如韧带、肌腱、软骨、眼睛角膜，是结缔组织中最主要的蛋白质，约占结缔组织的20％～30％。胶原蛋白具有纤维状的结构，能提供结缔组织所需的力学支撑与强度，亦与血液凝结、伤口愈合、组织修复相关，使一种非常重要的结构性蛋白质。人体内的胶原蛋白由于多胜肽组成的差异可分为不同类型，其中，与皮肤构造最相关的是第一型、第三型、与第四型胶原蛋白。真皮层中含有第一型与第三型胶原蛋白，其与皮肤的水分保持及弹性增加有关，上皮组织下方的基底膜中含有第四型胶原蛋白，其与皮肤的水分输送及养分维持有关。随着年龄增长及紫外线长期照射，皮肤中的胶原蛋白会流失并导致皮肤含水量减少，而皮肤的干燥状态会进一步造成皮肤弹性变差、皱纹生成、及毛孔粗大。因此，设法补充皮肤胶原蛋白、提升胶原蛋白的合成、及减少胶原蛋白的分解已成为减缓皮肤老化、维持皮肤健康的研究重心。由于皮肤表皮层的阻隔作用，直接将含有胶原蛋白的保养品涂抹于皮肤表面无法有效补充皮肤深层的胶原蛋白。另一方面，若以口服方式摄取胶原蛋白，由于大分子的胶原蛋白在消化道被分解为小分子的氨基酸，人体各部位获得该些氨基酸后未必会合成所需的胶原蛋白，故口服胶原蛋白以提升皮肤胶原蛋白合成的效果有限。有鉴于此，开发一种能有效抑制胶原蛋白分解的新颖组成物以达到减少胶原蛋白流失、避免皮肤老化的目标，实有其必要。
技术实现思路
缘此，本专利技术的一目的在提供一种夫妻草(Mimosapudica)萃取物用于制备抑制基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase2，MMP2)基因表现的组合物的用途。本专利技术的另一目的在提供一种前述夫妻草萃取物用于制备抑制胶原蛋白分解的组合物的用途，其中该夫妻草萃取物是以一溶剂萃取一夫妻草而获得。在本专利技术的一实施例中，该溶剂为水、醇类、或醇水混合物，该溶剂与夫妻草的液固比为5～20∶1～5，且该萃取是在50℃～100℃进行。在本专利技术的一实施例中，该夫妻草萃取物是为一夫妻草的水萃取物，其浓度为至少0.5mg/mL。在本专利技术的一实施例中，该胶原蛋白为第四型胶原蛋白。本专利技术以水、醇类、或醇水混合物为溶剂所萃取得的夫妻草萃取物能透过抑制皮肤纤维母细胞中MMP2的基因表现而减少细胞外基质中第四型胶原蛋白的降解，最终达到增加皮肤中胶原蛋白含量的效果，因此有助于提升皮肤弹性与紧致度、减少皮肤细纹与皱纹、及推迟皮肤老化。故本专利技术夫妻草萃取物可用于制备抑制MMP2基因表现及抑制胶原蛋白分解的组合物，该组合物可为粉末状、颗粒状、液状、胶状或膏状，且可制成食品、饮品、药品、试剂或营养补充剂，藉由口服、皮肤涂抹等方式给予一个体。以下将配合图式进一步说明本专利技术的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本专利技术的专利技术特点及应用，而非以限定本专利技术的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本专利技术的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本专利技术的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。附图说明图1显示经本专利技术夫妻草萃取物处理的人类皮肤纤维母细胞及控制组人类皮肤纤维母细胞的胶原蛋白相对产量。图2显示经过本专利技术夫妻草萃取物处理的人类皮肤纤维母细胞中MMP2基因的相对表现量。具体实施方式本专利技术提供一种夫妻草萃取物用于制备抑制胶原蛋白分解的组合物的用途。本专利技术的夫妻草萃取物是以一溶剂萃取一夫妻草的植株而获得，其中，该溶剂为水、醇类、或醇水混合物，该溶剂与该夫妻草的液固比为5～20∶1～5，且该萃取是在50℃～100℃进行。透过胶原蛋白含量试验及胶原蛋白分解相关基因的表现量分析，本专利技术夫妻草萃取物被证实能提高人类皮肤纤维母细胞的胶原蛋白产量，且该产量的增加与MMP2基因的表现量减少有关。因此，本专利技术的夫妻草萃取物亦可用于制备抑制MMP2基因表现的组合物。定义本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。材料与方法材料自Gibco购买含Earle’s平衡盐溶液的Eagle’s最低基本培养基(Eagle’sminimumessentialmedium，简称MEM培养基)，胎牛血清(fetalbovineserum，简称FBS)，非必需氨基酸，碳酸氢钠，丙酮酸钠，及磷酸缓冲盐溶液(phosphatebufferedsaline，简称PBS溶液)。细胞培养以下实施例使用人类皮肤纤维母细胞(Humanskinfibroblast)CCD-966SK(BCRC60153)进行实验。人类皮肤纤维母细胞在37℃、5％二氧化碳的条件下培养于添加10％FBS、0.1mM非必需氨基酸、1.5g/L碳酸氢钠、1mM丙酮酸钠的MEM培养基，以下称细胞培养基。胶原蛋白含量试验本专利技术利用可溶性胶原蛋白分析套组(SircolSolubleCollagenAssayKit，Bicolor)测定细胞所分泌胶原蛋白的含量，其步骤简述如下。取1000μL细胞培养基与200μL胶原蛋白分离/浓缩试剂混合，于4℃下翻转培养一段时间后，以12000rpm的转速离心该混合液10分钟，移除上清液。其次，将余下沉淀与1000μLSircol染剂混合30分钟，再以12000rpm的转速离心该染剂混合液10分钟以形成胶原蛋白沉淀物。待移除上清液，先以750μL酸性盐溶液清洗该胶原蛋白沉淀物并移除多余液体，添加250μL碱性试剂以溶解该胶原蛋白沉淀物，再使用酵素免疫分析仪(ELISAreader，BioTek)测量该胶原蛋白溶液在波长555nm的吸光值。对照水溶性胶原蛋白标准品的标准曲线，可计算得待测的细胞培养基中的胶原蛋白含量。统计分析是使用Excel软件的学生t检定进行判定。基因表现量分析本专利技术以定量聚合酶链锁反应(quantitativepolymerasechainreaction，简称Q-PCR)测定细胞中与胶原蛋白分解有关的酵素的基因表现量，其步骤简述如下。依据厂商使用说明，利用核糖核酸萃取套组(RNAExtractionKit，Geneaid)自细胞分离出RNA后，于37℃下以反转录酶IIIReverseTranscriptase(Invitrogen)将RNA反转录为互补脱氧核醣核酸(cDNA)，其次，利用Q-PCR套组(KAPACYBRFASTqPCRKit(2X)，KAPABiosystems)、针对MMP2基因的正向引子5’-GATACCCCTTTGACGGTAAGGA-3’(SEQIDNO：1)与反向引子5’-CCTTCTCCCAAGGTCCATAGC-3’(SEQIDNO：2)、及聚合酶链锁反应仪(StepOnePlusTMReal-TimePCRSystems)对该cDNA进行PCR，以取得基因表现量数据。实施例1夫妻草萃取物的制备首先，将夫妻草洗净晾干，以均质机将夫妻草磨碎。其次，以水、醇类、或醇水混合物为溶剂对夫妻草均质物本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种夫妻草萃取物用于制备抑制基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表现的组合物的用途，其中该夫妻草萃取物是以一溶剂萃取一夫妻草而获得。
【技术特征摘要】
2017.07.21 TW 1061245941.一种夫妻草萃取物用于制备抑制基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表现的组合物的用途，其中该夫妻草萃取物是以一溶剂萃取一夫妻草而获得。2.根据权利要求1所述的用途，其中该溶剂为水、醇类、或醇水混合物。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述溶剂与该夫妻草的液固比为5～20∶1～5。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述萃取是在50℃～100℃进行。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述夫妻草萃取物是为一夫妻草的水萃取物，其浓度为至少0.5mg/mL。6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述夫妻草萃取物是以口服或皮肤涂...
【专利技术属性】
技术研发人员：林咏翔，林于婷，
申请(专利权)人：大江生医股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71
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