一种以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物及其制备方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物，所述的免疫抑制剂药物由内而外依次为免疫抑制剂、脂质体层、PBAE层、修饰聚乙二醇2000的PBAE层、聚谷氨酸层。本发明专利技术的目的在于提供一种靶向性高、能够有效降低T细胞和B细胞的免疫活性的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物及其制备方法。

An immunosuppressive drug with PBAE as drug carrier and its preparation method

The invention belongs to the field of biotechnology, and discloses an immunosuppressive drug with PBAE as drug carrier. The immunosuppressive drugs are in turn immunosuppressive agents, liposome layer, PBAE layer, PBAE layer modified with polyethylene glycol 2000 and polyglutamic acid layer from inside to outside. The aim of the present invention is to provide an immunosuppressive drug with PBAE as a drug carrier and its preparation method, which has high targeting and can effectively reduce the immune activity of T cells and B cells.

【技术实现步骤摘要】
一种以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物及其制备方法
本专利技术涉及生物
，特别是一种以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物及其制备方法。
技术介绍
免疫抑制剂是对机体的免疫反应具有抑制作用的药物，能抑制与免疫反应有关细胞(T细胞和B细胞等巨噬细胞)的增殖和功能，能降低机体免疫反应。免疫抑制剂主要用于器官移植抗排斥反应和自身免疫病如类风湿性关节炎、红斑狼疮、皮肤真菌病、膜肾球肾炎、炎性肠病和自身免疫性溶血贫血等。目前主流治疗药物有糖皮质激素、环孢素，吗替麦考酚酯、硫唑嘌呤等免疫抑制剂类药物。这些免疫抑制剂的主要作用有减低T、B淋巴细胞功能，减少特异性自体抗体生成，抑制细胞因子产生等。但是系统性免疫抑制剂的长期使用不可避免的带来一些严重毒副作用，如抑制生殖系统功能、增加肿瘤发生率，破坏造血功能等，导致正常的机体免疫功能受损，从而引起一系列其他副作用。现有的免疫抑制剂的药物载体靶向性低。
技术实现思路
为了解决上述的缺点和不足，本专利技术提供了一种靶向性高、能够有效降低T细胞和B细胞的免疫活性的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物及其制备方法。其具体方案为：一种以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物，所述的免疫抑制剂药物由内而外依次为免疫抑制剂、脂质体层、PBAE层、修饰聚乙二醇2000的PBAE层、聚谷氨酸层；所述的聚谷氨酸层外修饰有CD19或CD3。在上述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物中，所述免疫抑制剂为糖皮质激素类、钙调磷酸酶抑制药、环孢素、他克莫司、抗代谢药、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、巯嘌呤或霉酚酸酯。在上述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物中，所述的免疫抑制剂药物粒径为20-300nm。同时，本专利技术还公开了一种以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：通过脂质体包被免疫抑制药物；步骤2：制备PBAE聚合物；步骤3：制备表面修饰PEG2000的PBAE聚合物；步骤4：制备修饰CD19或CD3聚谷氨酸；步骤5：将步骤1-4所制备的物质组装成为免疫抑制剂药物。在上述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物的制备方法中，所述的步骤2具体为：将1,4-丁二醇二丙烯酸酯与二丙烯酸酯以1.1：1摩尔比混合，加热至90℃搅拌24小时以生成丙烯酸酯封端的聚(4-氨基-1-丁醇-共-1,4-丁二醇二丙烯酸酯)，将2.3g该聚合物溶于2ml四氢呋喃(THF)后与60.5mg/ml的1-(3-氨基丙基)-4-甲基哌嗪四氢呋喃溶液混合，在37℃搅拌2小时得到哌嗪封端的PBAE聚合物，封端的聚合物用5倍体积的乙醚沉淀，收集沉淀真空冷冻干燥，最后将收集到聚合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中至浓度为100mg/ml，储存于-20℃。在上述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物的制备方法中，所述的步骤3具体为：将1,4-丁二醇二丙烯酸酯与二丙烯酸酯以1.1：1摩尔比混合，加热至90℃搅拌24小时以生成丙烯酸酯封端的聚(4-氨基-1-丁醇-共-1,4-丁二醇二丙烯酸)，得到的聚合物在乙醇中纯化后真空冷冻干燥。将该聚合物与甲氧基PEG-巯基和1-(3-氨基丙基)-4-甲基哌嗪分子以1：2.5：0.2M比例混合为100mg/mL的DMSO溶液，并在室温下在1000rpm下搅拌24小时。最终的嵌段共聚物在室温下与乙醚中沉淀后冷冻干燥，最后将收集到聚合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中至浓度为100mg/ml，储存于-20℃备用。在上述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物的制备方法中，所述的步骤4具体为：将聚谷氨酸溶于水中至20mg/ml，然后在浴超声波仪中超声10分钟，加入等体积的N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺·HCl水溶液(4mg/ml)，并将该溶液在室温下混合5分钟，将得到的活化的PGA以4:1的摩尔比加入到磷酸盐缓冲盐水中的抗体溶液中，并在室温下混合6小时，通过对上述溶液透析24小时除去过量的试剂，随后通过40kZeba旋转柱过滤，备用。在上述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物的制备方法中，所述的步骤5具体为：所有组分均在乙酸钠缓冲液中稀释至以下浓度：包被免疫抑制药的脂质体纳米微球，0.1mg/ml；修饰有PEG2000的PBAE聚合物，3.14mg/ml；PGA抗体，0.45mg/ml；将PBAE聚合物和包被免疫抑制药的脂质体纳米微球以15：1的质量比混合轻轻涡旋10s，室温下孵育2h；再将修饰有PEG2000的PBAE以与该混合物体系中包被免疫抑制药的脂质体质量比为15：1加入前述的混合物中，轻轻涡旋10后室温孵育10min。最后将抗体以与体系中包被免疫抑制药的脂质体纳米微球质量比2.5：1的质量比加入，轻轻涡旋10后室温孵育10min；加入蔗糖作为冷冻保护剂，终浓度为30mg/ml。将混合物在液氮中涡旋冷冻，然后使用冷冻干燥机冷冻干燥系统；最后将冻干颗粒重悬于生理盐水中。本专利技术的有益效果在于：本专利技术的免疫抑制剂药物具有靶向性高、延长药效、提高疗效、避免耐受性、降低药物毒负作用、可改变给药途径等优点。PBAE含有大量氨基阳离子，具有正电性，能与负电性的细胞膜相互作用，有效携带药物通过胞吞介导进入细胞，同时由于氨基阳离子的“质子海绵作用”，可实现内吞体(或内涵体)逃逸及胞内的药物控制释放。然而大量的正电荷也使得PBAE在体内循环系统中的稳定性差，易造成红细胞溶血，具有一定的体内毒性，以其为材料的载药体系不能直接用于静脉注射。鉴于此,接枝聚乙二醇2000(PEG-2000)可以使脂质体躲避网状内皮系统(RES)的捕捉，延长载体在体内循环的时间,又不会降低靶向效果，从而增强其用作抗肿瘤药物载体的可行性。PGA聚合物是一种水溶性、可生物降解，连接CD19或CD3后能特异性识别T/B细胞。从而精准地把药物载入细胞，减少全身的不良反应。附图说明图1为本专利技术的实施例1的结构示意图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制。为了更加清楚的对本专利技术进行说明，列举如下实施例来说明本专利技术的优越性。如图1，一种以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物，所述的免疫抑制剂药物由内而外依次为免疫抑制剂1、脂质体层2、PBAE层3、修饰聚乙二醇2000的PBAE层4、聚谷氨酸层5；所述的PBAE层外修饰有聚乙二醇2000；所述的聚谷氨酸层外修饰有CD19或CD3。具体来说，以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物的制备方法，包括如下步骤。脂质体包被免疫抑制药物的制备：分别准确称量30mg的卵磷脂溶于少量的无水乙醇中，另取10mg他克莫司、40mg硬脂酸溶于二氯甲烷中，超声30分钟使其充分溶解，将所得乙醇溶液与二氯甲焼溶液混合构成有机相。精密称取泊洛沙姆188和Brij78(两者1；1)150mg，加入到双蒸水中，构成水相。将相同温度的油相用注射器缓慢注入1200r/min搅祥的(65±2)C°恒温水相中，持续搅拌3小时，使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩至约形成纳米乳。将所得的乳液快速混于另一0℃的冰水中，并在冰水浴超声30分钟，即得纳米粒混悬液。2、PBAE聚合物的制备：将1,4-丁二醇二丙烯酸酯与二丙烯酸酯以1.1：1摩尔比混合，加热至9本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物，其特征在于，所述的免疫抑制剂药物由内而外依次为免疫抑制剂、脂质体层、PBAE层、修饰聚乙二醇2000的PBAE层、聚谷氨酸层；所述的聚谷氨酸层外修饰有CD19或CD3。

【技术特征摘要】
1.一种以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物，其特征在于，所述的免疫抑制剂药物由内而外依次为免疫抑制剂、脂质体层、PBAE层、修饰聚乙二醇2000的PBAE层、聚谷氨酸层；所述的聚谷氨酸层外修饰有CD19或CD3。2.根据权利要求1所述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物，其特征在于，所述免疫抑制剂为糖皮质激素类、钙调磷酸酶抑制药、环孢素、他克莫司、抗代谢药、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、巯嘌呤或霉酚酸酯。3.根据权利要求1所述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物，其特征在于，所述的免疫抑制剂药物粒径为20-300nm。4.一种如权利要求1-3任一所述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：通过脂质体包被免疫抑制药物；步骤2：制备PBAE聚合物；步骤3：制备表面修饰PEG2000的PBAE聚合物；步骤4：制备修饰CD19或CD3聚谷氨酸；步骤5：将步骤1-4所制备的物质组装成为免疫抑制剂药物。5.根据权利要求4所述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物的制备方法，其特征在于，所述的步骤2具体为：将1,4-丁二醇二丙烯酸酯与二丙烯酸酯以1.1：1摩尔比混合，加热至90℃搅拌24小时以生成丙烯酸酯封端的聚(4-氨基-1-丁醇-共-1,4-丁二醇二丙烯酸酯)，将2.3g该聚合物溶于2ml四氢呋喃(THF)后与60.5mg/ml的1-(3-氨基丙基)-4-甲基哌嗪四氢呋喃溶液混合，在37℃搅拌2小时得到哌嗪封端的PBAE聚合物，封端的聚合物用5倍体积的乙醚沉淀，收集沉淀真空冷冻干燥，最后将收集到聚合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中至浓度为100mg/ml，储存于-20℃。6.根据权利要求4所述的以PBAE作为药物载体的免疫抑制剂药物的制备方法，其特征在于，所述的步骤3具体为：将1,4-丁二醇二丙烯酸酯与二丙烯酸酯以1.1：1摩尔比混合，加热至90℃搅拌24小时以生成丙烯酸酯封端的聚(4...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔惠，
申请(专利权)人：广州弗赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44