一种基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法，包括如下步骤：步骤1：在磁性微球表面标记能够识别靶标物的抗体或核酸适配体；步骤2：在步骤1得到的磁性微球表面通过抗体或核酸适配体富集靶标物；步骤3：将能够特异性识别靶标物的连接有辣根过氧化物酶的抗体标记物与步骤2得到的磁性微球的靶标物结合；步骤4：将磁性微球表面的带有抗体或核酸适配体‑靶标物‑抗体标记物的三明治结构分离；步骤5：将步骤4得到的三明治结构物质分离，加入显色剂，通过分离后的溶液吸光度计算靶标物的浓度。该方法检测特异性高、检测精度高。

A Fast Target Detection Method Based on Colorimetric Method and Magnetic Bead Antibody Enrichment Technology

The invention belongs to the field of biotechnology, and discloses a method for rapid detection of targets based on colorimetric method and magnetic bead antibody enrichment technology, which comprises the following steps: step 1: labeling antibodies or nucleic acid adapters capable of identifying targets on the surface of magnetic microspheres; step 2: enriching targets on the surface of magnetic microspheres obtained in step 1 through antibodies or nucleic acid adapters; step 3: The antibody markers linked with horseradish peroxidase can specifically recognize the target and bind to the target of the magnetic microspheres obtained in step 2; step 4: the sandwich structure with antibody or nucleic acid adapter, target and antibody marker on the surface of the magnetic microspheres is separated; step 5: the sandwich structure material obtained in step 4 is separated, and the chromogenic agent is added to the sandwich structure material after separation. Solution absorbance was used to calculate the target concentration. The method has high specificity and accuracy.

【技术实现步骤摘要】
一种基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法
本专利技术涉及生物
，特别是一种基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法。
技术介绍
恶性肿瘤是一种以细胞异常增生为基本特征的人类疾病。伴随着肿瘤的发生发展，其大分子物质(包括核酸、蛋白和多糖等)可以由癌细胞释放进入血液循环，此类游离(Circulating)大分子作为生物标志物(Biomarkers)在肿瘤诊断、预后评估及病情随访中均具有广泛的临床价值。但是现有的基于磁珠抗体富集技术的检测方法普遍存在检测精度低的问题，无法实现痕量检测。
技术实现思路
为了解决上述的缺点和不足，本专利技术提供了一种检测精度高的基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法。其具体方案为：一种基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法，包括如下步骤：步骤1：在磁性微球表面标记能够识别靶标物的抗体或核酸适配体；步骤2：在步骤1得到的磁性微球表面通过抗体或核酸适配体富集靶标物；步骤3：将能够特异性识别靶标物的连接有辣根过氧化物酶的抗体标记物与步骤2得到的磁性微球的靶标物结合；步骤4：将磁性微球表面的带有抗体或核酸适配体-靶标物-抗体标记物的三明治结构分离；步骤5：将步骤4得到的三明治结构物质分离，加入显色剂，通过分离后的溶液吸光度计算靶标物的浓度。在上述的基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，靶标物为细菌、病毒、病原体、细胞或蛋白质。在上述的基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，步骤1的磁性微球为经过羧基化的磁性微球。在上述的基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，所述的步骤2中抗体或核酸适配体与靶标物的偶联通过碳化二亚胺进行偶联。在上述的基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，所述的磁性微球的粒径为25nm。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过比色方法和磁珠抗体富集技术进行结合，可以对靶标物实现痕量检测，检测精度高。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制。为了更加清楚的对本专利技术进行说明，列举如下实施例来说明本专利技术的优越性。实施例1肿瘤细胞检测Bio-抗体与辣根过氧化物酶标记链霉亲和素结合1、Biotin与anti-tumor抗体标记1)配置10mMSulfo-NHS-LC-Biotin；2)用PBS将抗体anti-tumor抗体稀释成0.5mg/mL；3)300L的anti-tumor抗体中加入适量的10mMSulfo-NHS-LC-Biotin(根据EZ-LinkNHS-BiotinReagents说明书计算出)，放置冰上反应2小时；4)将反应后的液体转入2.5mL超滤离心管(使用前先加入预冷的超纯水润洗)中，枪头不能触碰到超滤膜，12000rpm，4℃离心20min，弃去收集管中液体；5)加入500LPBS于超滤管中，再次用1000rpm离心，重复4步骤2至3次；6)用枪头小心混匀超滤管中蛋白液后吸出，储存在-20℃；EpCAM抗体与MagpearlStreptavidin偶联按照5：1(bio-EpCAM抗体与MagpearlStreptavidin)的浓度比例将bio-anti-salmonella抗体和MagpearlStreptavidin混合20分钟，中间间隔几分钟上下颠倒晃动离心管使之充分结合；反应完时间后，将离心管靠近磁架，小心的吸去上清液，加入原体积的PBS溶液重悬；重复此步骤3次，以洗去游离的bio-anti-tumor抗体分子；最终用等体积的PBS重悬，放4℃保存。用血清培养基培养肿瘤细胞，收集，离心然后梯度稀释加入到PBS中，形成不同细胞数量：10个/ml，50个/ml，100个/ml，500个/ml，1000个/ml。各加入EpCAM-磁珠，颠倒混匀10min。EpCAM抗体-磁珠将肿瘤细胞富集后。加入bio-anti-tumor抗体和HRP-SA，37oC孵育20min，用磁架富集HRP-cell-磁珠三明治复合物，并用PBS清洗三次。后加入显色剂A和B，避光反应10min,加入终止液终止反应，后用分光光度计在450nm和630nm处比色检测。以上所述的仅为本专利技术的较佳实施例，凡在本专利技术的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：在磁性微球表面标记能够识别靶标物的抗体或核酸适配体；步骤2：在步骤1得到的磁性微球表面通过抗体或核酸适配体富集靶标物；步骤3：将能够特异性识别靶标物的连接有辣根过氧化物酶的抗体标记物与步骤2得到的磁性微球的靶标物结合；步骤4：将磁性微球表面的带有抗体或核酸适配体‑靶标物‑抗体标记物的三明治结构分离；步骤5：将步骤4得到的三明治结构物质分离，加入显色剂，通过分离后的溶液吸光度计算靶标物的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种基于比色方法和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：在磁性微球表面标记能够识别靶标物的抗体或核酸适配体；步骤2：在步骤1得到的磁性微球表面通过抗体或核酸适配体富集靶标物；步骤3：将能够特异性识别靶标物的连接有辣根过氧化物酶的抗体标记物与步骤2得到的磁性微球的靶标物结合；步骤4：将磁性微球表面的带有抗体或核酸适配体-靶标物-抗体标记物的三明治结构分离；步骤5：将步骤4得到的三明治结构物质分离，加入显色剂，通过分离后的溶液吸光度计算靶标物的浓度。2.根据权利要求1所述的基...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔惠，
申请(专利权)人：广州弗赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44