瑞士乳杆菌素及其表达载体的构建与应用制造技术

本发明专利技术公开了瑞士乳杆菌素及其表达载体的构建与应用。它是以嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus NX2‑6）基因组测序数据为基础，通过生物信息学的方法得到瑞士乳杆菌素的基因，并且在大肠杆菌中异源表达。本发明专利技术通过对瑞士乳杆菌素复性的缓冲液及参数的选择，实现了瑞士乳杆菌素NX267和NX371的高效表达和复性。本发明专利技术还利用复性后的瑞士乳杆菌素控制人工污染牛奶中的微生物的数量，在25℃条件下，可显著降低牛奶中微生物的数量，为瑞士乳杆菌素作为绿色食品添加剂奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
瑞士乳杆菌素及其表达载体的构建与应用
本专利技术属于生物技术及食品防腐领域，具体涉及瑞士乳杆菌素表达载体的构建及其应用。
技术介绍
乳酸杆菌是一种广泛存在于食品工业的革兰氏阳性菌。乳酸杆菌通过发酵碳水化合物、脂质、蛋白质等原料代谢产生多种具有抑菌活性的物质，如有机酸(乳酸)、过氧化氢、双乙酰、细菌素等。乳酸杆菌产生的细菌素在体内可以被蛋白酶降解，因此具有无毒、耐酸、耐高温、无残留、无抗药性等优点。但是其仅对近缘的乳酸菌及革兰氏阳性菌具有抑制作用，对革兰氏阴性菌几乎没有抑制效果。乳酸杆菌产生的细菌素主要有：lactacin，sakacin，plantaricin，helveticin等。嗜酸乳杆菌是乳酸杆菌的一种，是公认安全的(GRAS)的微生物。它是人体和动物肠道菌群中的优势种类，具有调节肠道菌群平衡，降低乳糖不耐受症状，抑制肠道有害菌生长，降低胆固醇的作用。其中瑞士乳杆菌素是由嗜酸乳杆菌和瑞士乳杆菌等分泌的蛋白类的细菌素，可以作为一种安全、无毒、天然的食品防腐剂和抗菌添加剂，在食品行业中有巨大的应用前景。目前，对瑞士乳杆菌的研究主要集中在利用其发酵特性开发乳制品及生产功能性多肽，而本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.瑞士乳杆菌素，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.瑞士乳杆菌素，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示。2.瑞士乳杆菌素，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.3或SEQIDNO.4所示。3.瑞士乳杆菌素表达载体，其特征在于，包括整合了权利要求1所述的SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所述序列的自主复制型表达质粒。4.根据权利要求3所述的瑞士乳杆菌素表达载体，其特征在于，所述自主复制型表达质粒包括pQE3、pQE4、pQE5、pQE6、pQE30、pQE32、pQE51、pQE70、pGEX-2T、pGEX-4T、pGEX-5X、pGEX-6P、pET3a、pET9a、pET21a、pET23a、pET24a、pET28a、pET30a、pET32a、pET42a、pET44a中的任意一种。5.权利要求3所述的瑞士乳杆菌素表达载体的构建方法，其特征在于，包括通过引物扩增SEQIDNO.1或SEQIDNO.2序列，回收扩增产物，连接到T载体，转化大肠杆菌感受态细胞，氨苄青霉素抗性平板筛选后利用限制性内切酶酶切T载体和自主复制型表达质粒，通过DNA连接酶连接，然后转化大肠杆菌感受态细胞得到。6.权利要求4所述的瑞士乳杆菌素表达载体的构建方法，其特征在于，通过引物NX267-F：ggatccATGACTTGCACGAGACTCAGGATA和引物NX267-R：ctcgagCTAGCACCACGCGTTAATAATA扩增SEQIDNO.1序列，通过引物NX371-F：ggatccATGGTTAAAAGTATTACACCTC和引物NX37...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆兆新，李金良，孟凡强，吕凤霞，别小妹，
申请(专利权)人：南京福斯弗瑞生物科技有限公司，南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32