炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，提供了一种用于炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测的特异性引物和探针，包括炭疽杆菌BA5345基因的正向引物BA5345‑F、反向引物BA5345‑R和探针BA5345‑P；和炭疽杆菌PA基因的正向引物PA‑F、反向引物PA‑R和探针PA‑P。本发明专利技术还提供了包含所述引物和探针的检测试剂盒，以及利用双重荧光定量PCR检测炭疽杆菌的方法。本发明专利技术的试剂盒和方法可以准确、简便、高效、快速地检测炭疽杆菌。

【技术实现步骤摘要】
炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于基因检测领域，更具体而言涉及炭疽杆菌的荧光定量PCR检测。
技术介绍
炭疽杆菌(Bacillusanthracis)是一种革兰氏阳性芽孢杆菌，可引起人畜共患的炭疽病，是世界动物卫生组织(OIE)确立的必须通报的动物疫病。炭疽杆菌抵抗力强，形成芽孢后可在动物皮毛和土壤等环境中长期存在。炭疽杆菌具有高致病性，对人和动物的健康和生命构成极大威胁，常被用作生物恐怖战剂，其快速而精确的诊断一直备受重视。炭疽杆菌诊断的金标准是分离到炭疽杆菌，但传统的检测方法耗时较长，难以适应疫情控制的需要。炭疽杆菌与蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、蕈状芽孢杆菌(B.mycoides)和魏氏芽孢杆菌(B.pseudomycoides)等具有相同的形态及生化特征，均属于蜡样芽孢杆菌群。细菌的高度相似性导致了在适当的温度、湿度和pH值条件下物种之间基因水平转移的可能性，基因转移导致了诊断困难。大多数诊断方法，包括OIE推荐的炭疽杆菌PCR方法，都以毒力因子pXO1和pXO2质粒上的基因片段为检本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测的特异性引物和探针，其特征在于，包括炭疽杆菌BA5345基因的正向引物BA5345‑F、反向引物BA5345‑R和探针BA5345‑P；和炭疽杆菌PA基因的正向引物PA‑F、反向引物PA‑R和探针PA‑P，所述的引物和探针的核苷酸序列如下所示：引物BA5345‑F：5'‑ATGGGGATACCAGGATGGGT‑3'；引物BA5345‑R：5'‑GCATTACATACCCCAAAGGT‑3'；探针BA5345‑P：5'‑FAM‑TCCAAACCCCAATGACCAGAG‑TAMRA‑3'；和引物PA‑F：5'‑TGGTGGGAGTGTATCTGCAGGA‑...

【技术特征摘要】
1.用于炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测的特异性引物和探针，其特征在于，包括炭疽杆菌BA5345基因的正向引物BA5345-F、反向引物BA5345-R和探针BA5345-P；和炭疽杆菌PA基因的正向引物PA-F、反向引物PA-R和探针PA-P，所述的引物和探针的核苷酸序列如下所示：引物BA5345-F：5'-ATGGGGATACCAGGATGGGT-3'；引物BA5345-R：5'-GCATTACATACCCCAAAGGT-3'；探针BA5345-P：5'-FAM-TCCAAACCCCAATGACCAGAG-TAMRA-3'；和引物PA-F：5'-TGGTGGGAGTGTATCTGCAGGA-3'；引物PA-R：5'-GTAGATTGGAGCCGTCCCAG-3'；探针PA-P：5'-VIC-TCTTGAACCCGACTTTGTTACC-TAMRA-3'。2.一种炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于包括：荧光定量PCR反应液；权利要求1所述的引物BA5345-F、引物BA5345-R、探针BA5345-P和引物PA-F、引物PA-R、探针PA-P；阳性对照：所述阳性对照为含有炭疽杆菌BA5345基因或其片段的重组质粒pUC57-BA5345和含有炭疽杆菌PA基因或其片段的重组质粒pUC57-PA；和阴性对照。3.如权利要求2所述的炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR反应液为2×TaqManUniversalMasterMix。4.如权利要求2所述的炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为含有510bp的BA5345基因片段的pUC57-BA5345重组质粒和含有1406bp的PA基因片段的pUC57-PA重组质粒。5.如权利要求2所述的炭疽杆菌双重荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：王素华，帅江冰，袁淑辉，张晓峰，蔡军，吴绍强，吕继洲，王建昌，孙涛，
申请(专利权)人：王素华，
类型：发明
国别省市：浙江,33