一种酒醅中酵母菌分离培养基及其制备方法技术

本发明专利技术涉及微生物发酵工程技术领域的一种酵母菌分离培养基，尤其涉及一种酒醅中酵母菌分离培养基及其制备方法。公开了一种酒醅中酵母菌分离培养基，所述培养基的配方包括如下组分：酵母粉5‑10g/L、蛋白胨10‑20g/L、葡萄糖5‑20g/L、琼脂15‑22g/L、大曲‑酒醅浸提液100‑800mL/L，余量为水。针对不同时期酒醅发酵特性，适当调节培养基pH，有利于系统分离酿造过程中的各类酵母菌。本发明专利技术培养基具有组成丰富，针对性强，筛选范围广的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种酒醅中酵母菌分离培养基及其制备方法
本专利技术涉及微生物发酵工程
的一种酵母菌分离培养基，尤其涉及一种酒醅中酵母菌分离培养基及其制备方法。
技术介绍
酵母菌广泛存在于制曲、堆积、窖内、空气、晾堂中，是白酒生产过程中的重要微生物。按功能分为产酒功能菌与产香功能菌，其生长代谢情况对白酒的产量与风味具有重要影响。为研究不同酵母菌在白酒生产中的作用机理，首先需对酵母菌进行全面分离筛选。现有分离酵母菌的培养基包括酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD培养基)、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)、WL营养琼脂培养基(WL培养基)、孟加拉红培养基等，其中YPD培养基与WL培养基使用频率较高，分离效果较突出。迄今为止，关于酒醅中酵母菌的分离，尚未有在培养基中添加大曲-酒醅浸提液的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种酵母菌分离培养基。本专利技术的进一步目的在于提供一种针对性强的酵母菌分离培养基。本专利技术的进一步目的在于提供一种能够分离不同时期酒醅中酵母菌的培养基。本专利技术的进一步目的在于提供一种上述培养基中所含大曲-酒醅浸提液的制备方法。本专利技术的进一步目的在于提供一种上述培养基的制备方法。在培养基中添加大曲-酒醅浸提液，能更好的模拟酿造微生物生长环境，促进酒醅微生物的分离。据报道，在对浓香型酒醅中细菌进行分离时，研究者曾尝试将出窖酒醅与煮沸过的蒸馏水振荡制备成大曲-酒醅浸提液，添加在不同的细菌培养基中，但是分离效果不突出。该大曲-酒醅浸提液未添加生产用大曲，且未进行高温煮沸。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案内容具体如下：一种用于分离酒醅中酵母菌的培养基，所述培养基的配方包括如下组分：酵母膏5-10g/L、蛋白胨10-20g/L、葡萄糖5-20g/L、琼脂15-22g/L、大曲-酒醅浸提液100-800mL/L，余量为水。作为优选的实施方式，所述培养基的配方包括如下组分：酵母膏5-10g/L、蛋白胨10-15g/L、葡萄糖10-20g/L、琼脂18-20g/L、大曲-酒醅浸提液200-700mL/L，余量为水。作为一种更为优选的实施方式，所述所述培养基的配方包括如下组分：酵母膏5-7g/L，蛋白胨10-15g/L，葡萄糖15-20g/L，琼脂18-20g/L，大曲-酒醅浸提液500-700mL/L。本专利技术中，大曲-酒醅浸提液的添加对于筛选尤为重要，一般用于酵母菌分离的培养基，常为通用型培养基，未添加特殊物质，无法更好的模拟酵母菌原有生长环境，增加分离难度。为了进一步优化培养基成分，在普通酵母菌分离培养基中，添加适量大曲-酒醅浸提液，有利于酒醅中微生物的分离。作为优选实施方式，专利技术人还根据酒醅发酵特点，有针对性的调节培养基pH，有利于分离不同时期酒醅中的酵母菌。作为一种可选的实施方式，所述培养基的pH为3.0-6.0。本专利技术中，作为一种可选的实施方式，所述培养基用于分离酒醅样品中的酵母菌。对于酒醅样品选自什么时期和或者哪个批次并无特别限定，如酒醅样品可为堆积酒醅、入窖酒醅，也可以为窖内酒醅。作为优选实施方式，培养基配方中，还含有氯霉素0.1-1.0g/L。通过向酵母菌分离培养基中加入氯霉素，抑制细菌的生长，提高酵母菌分离效果。作为可选的方案，上述大曲-酒醅浸提液的制备方法为:(1)称取酒醅与大曲，混合；(2)向酒醅-大曲混合物中加入纯水煮沸；(3)冷却后过滤得滤液备用。作为优选的实施方式，步骤(2)中，煮沸时间为5-30min。作为更为优选的实施方式，步骤(2)中，煮沸时间为10-15min。在一些实施例中，添加煮沸处理的大曲-酒醅浸提液的培养基，与加入未煮沸处理的大曲-酒醅浸提液的培养基相比，更能够促进酵母菌的生长。作为可选的实施方式，步骤(1)中，大曲与酒醅的质量比为1:1-1:20。作为一种更为优选的实施方式，步骤(1)中，大曲与酒醅的质量比为1:3-1:10。作为一种可选的实施方式，步骤(2)中，所述混合物与水的质量比为1:2-1:20。作为一种优选的实施方式，所述混合物与水的质量比为1:4-1:10。作为优选的实施方式，步骤(3)中，煮沸后采用纱布进行过滤。另一方面，本专利技术还提供了一种上述酵母菌分离培养基的制备方法，步骤如下：(1)按照配方称取各组分，将酵母粉，蛋白胨，葡萄糖，琼脂粉，大曲-酒醅浸提液加入容器中，用酸溶液调节pH，余量用水补齐，灭菌；(2)将氯霉素溶于乙醇，摇匀，制备氯霉素母液；(3)将步骤(1)灭菌后的混合物冷却至50-60℃，与步骤(2)的氯霉素母液混匀。作为优选的方案，步骤(1)中，使用的酸溶液为盐酸溶液、冰醋酸溶液或是乳酸溶液。进一步优选的，在步骤(1)中，121℃对培养基进行灭菌15-20min。此外，本专利技术同时还提供了一种分离酵母菌的方法，其中该方法包括采用平板稀释法将酒醅制成一系列稀释菌液涂布于上述培养基中进行培养，从而达到酵母菌分离的作用。其余的培养条件和方法，则与现有技术中酵母菌的培养条件或方法相同。还有一方面，本专利技术提供了上述培养基在分离酒醅中的酵母菌的应用。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术首次在酵母菌的分离培养基中添加大曲-酒醅浸提液，该培养基能更好的模拟酿造微生物生长环境，促进酒醅微生物的分离。专利技术人在实验过程中，曾尝试将酒醅与煮沸过的蒸馏水振荡制备成大曲-酒醅浸提液，用于分离酵母菌，但分离效果不突出。此外，专利技术人还尝试将未经高温煮沸的大曲-酒醅浸出液用于酵母菌的分离，分离效果也不突出，因此，在本专利技术中，高温煮沸以及大曲和酒赔共同的大曲-酒醅浸提液是必须的。(2)本专利技术的培养基相对于常规的酵母菌分离培养基，解决了酒醅酵母菌分离效果不好的问题，更好地模拟了酵母菌生长环境，更有利于酒醅样品中酵母菌的系统分离，其对酵母菌分离的针对性强，且对于酿酒过程不同阶段的酒醅均适用，具有筛选范围广的优点。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本专利技术的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举较佳实施例，详细说明如下。附图说明图1为培养基中大曲-酒醅浸提液含量不同对酵母菌的生长分离的影响。图2为培养基pH不同对堆积酒醅样品中酵母菌生长分离的影响。具体实施方式以下通过具体的实施例进一步说明本专利技术的技术方案，具体实施例不代表对本专利技术保护范围的限制。其他人根据本专利技术理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本专利技术的保护范围。本专利技术所使用的术语“不同时期的酒醅”指的是整个酿酒过程中任意阶段的酒醅样品。本专利技术中“pH自然”指的是培养基pH未调节。本专利技术中“pH已调”指的是培养基pH添加酸溶液进行调节。本专利技术中“堆积酒醅”为晾堂上进行堆积发酵的酒醅样品。其中“入窖酒醅”指堆积发酵结束准备转入窖池内的酒醅样品。“窖内酒醅”为窖池内进行厌氧发酵的酒醅样品。其中“出窖酒醅”指窖内发酵结束准备开窖进行蒸煮的酒醅样品。本专利技术实施例中的大曲-酒醅浸提液中使用的大曲是白酒生产的发酵剂，也是糖化剂，还能为白酒提供一定的风味物质，包括低温大曲、中温大曲、高温大曲。使用的大曲来源于白酒生产过程中使用的由小麦发酵而成的大曲，具体为酱香型白酒生产过程中使用的高温大曲。本专利技术专利技术中大曲-酒醅浸提液中使用的酒醅是白酒生产过程中蒸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酵母菌分离培养基，其特征在于，包括以下组分：酵母膏5‑10g/L，蛋白胨10‑20g/L，葡萄糖5‑20g/L，琼脂15‑22g/L，大曲‑酒醅浸提液100‑800mL/L，余量为水。

【技术特征摘要】
1.一种酵母菌分离培养基，其特征在于，包括以下组分：酵母膏5-10g/L，蛋白胨10-20g/L，葡萄糖5-20g/L，琼脂15-22g/L，大曲-酒醅浸提液100-800mL/L，余量为水。2.根据权利要求1所述的酵母菌分离培养基，其特征在于，所述的酵母菌分离培养基包含以下组分：酵母膏5-10g/L，蛋白胨10-15g/L，葡萄糖10-20g/L，琼脂18-20g/L，大曲-酒醅浸提液200-700mL/L，余量为水；优选地，所述酵母菌分离培养基包含以下组分：酵母膏5-7g/L，蛋白胨10-15g/L，葡萄糖15-20g/L，琼脂18-20g/L大曲-酒醅浸提液500-700mL/L；或优选地，所述酵母菌分离培养基还含有氯霉素0.1-1.0g/L；或优选地，所述所述大曲-酒醅浸提液中大曲选自白酒生产过程中使用的由小麦发酵而成的大曲；更为优选地，所述大曲-酒醅浸提液中大曲选自酱香型白酒生产过程中使用的高温大曲；或优选地，所述大曲-酒醅浸提液中酒醅选自白酒生产过程中经蒸煮后的粮食发酵而成；更为优选地，所述大曲-酒醅浸提液中酒醅选自酱香型白酒生产过程中经蒸煮后的高粱发酵而成；进一步优选地，所述大曲-酒醅浸提液中酒醅选自酱香型白酒生产过程中不同轮次的窖内发酵酒醅；进一步优选地，所述大曲-酒醅浸提液中酒醅选自酱香型白酒生产过程中第1-3轮次的窖内发酵酒醅；最为优选地，所述大曲-酒醅浸提液中酒醅选自酱香型白酒生产过程中第3轮次的窖内发酵酒醅。3.根据权利要求1所述的酵母菌分离培养基，其特征在于，所述培养基用于分离酒醅样品中的酵母菌；优选地，所述的酒醅样...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁颉，杨帆，杨玉波，曾祥炼，王和玉，王莉，白逢彦，尉洪涛，
申请(专利权)人：贵州茅台酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52