一种青霉素酰化酶的固定化方法及固定化酶技术

本发明专利技术提供了一种青霉素酰化酶的固定化方法，属于酶的固定化技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将桥接体溶液滴加到载体溶液中，进行第一缩合反应2～5h后，进行第一固液分离，收集固相组分，获得带桥接体的载体；2)将步骤1)获得的带桥接体的载体与青霉素酰化酶水溶液混合搅拌得到混合料液，向所述混合料液中滴加三乙氨进行第二缩合反应20～40h后，进行第二固液分离，收集固相组分为固定化的青霉素酰化酶；所述桥接体为主链包含2～8个碳原子的卤酰卤；所述载体为氨基树脂。本发明专利技术所述方法制备获得的青霉素酰化酶酶活性高，稳定性好。

Immobilization of Penicillin Acylase and Immobilized Enzyme

The invention provides an immobilization method of penicillin acylase, which belongs to the field of enzyme immobilization technology. The method comprises the following steps: 1) adding bridging body solution to carrier solution, carrying out the first condensation reaction for 2 to 5 hours, carrying out the first solid-liquid separation, collecting solid components, and obtaining the carrier with bridging body; 2) adding bridging body carrier and penicillin obtained by step 1). The mixture liquid is obtained by mixing and stirring the acylase aqueous solution, and the second solid-liquid separation is carried out after the second condensation reaction of adding triethylammonia to the mixture liquid for 20-40 hours, and the solid component is collected as immobilized penicillin acylase; the bridge body is a halogenated halogen containing 2-8 carbon atoms in the main chain; and the carrier is an amino resin. The penicillin acylase activity obtained by the method has high activity and good stability.

【技术实现步骤摘要】
一种青霉素酰化酶的固定化方法及固定化酶
本专利技术属于酶的固定化
，尤其涉及一种青霉素酰化酶的固定化方法及固定化酶。
技术介绍
固定化酶是20世纪60年代发展起来的一种新技术，所谓固定化酶，是指在一定的空间范围内起催化作用，并能反复和连续使用的酶。酶法生产6-氨基青霉烷酸(6-Aminopenicillanicacid,6-APA)工艺的核心问题是高效固定化青霉素酰化酶(PenicillinGacylase,PGA)的制备技术，而载体与PGA能否特异、高效、牢固链接是固定化技术的关键所在。现有的固定化酶的方法主要有吸附法、包埋法、交联法和共价结合法。吸附法是最早出现的固定化方法，吸附法又可以分为两种，分别是离子交换吸附和物理吸附。吸附法条件比较温和，不会很大程度地改变酶的构象，因此对酶的催化性能不会产生大的影响；但是酶和载体之间的结合力较弱，在一些特殊的条件下，比如高盐浓度、高温等条件下，酶就很容易从载体上脱落并且污染催化反应产物。包埋法是将酶包埋于聚合物的孔隙中的固定化方法。根据包埋形态类型可将包埋法分为网格型和微囊型两种。利用聚丙烯酰胺、聚乙妇醇、淀粉、明胶、海藻酸等载体的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种青霉素酰化酶的固定化方法，包括以下步骤：1)将桥接体溶液滴加到载体溶液中，进行第一缩合反应2～5h后，进行第一固液分离，收集固相组分，获得带桥接体的载体；2)将步骤1)获得的带桥接体的载体与青霉素酰化酶水溶液混合搅拌得到混合料液，向所述混合料液中滴加三乙氨进行第二缩合反应20～40h后，进行第二固液分离，收集固相组分为固定化的青霉素酰化酶；所述桥接体为主链包含2～8个碳原子的卤酰卤；所述载体为氨基树脂。

【技术特征摘要】
1.一种青霉素酰化酶的固定化方法，包括以下步骤：1)将桥接体溶液滴加到载体溶液中，进行第一缩合反应2～5h后，进行第一固液分离，收集固相组分，获得带桥接体的载体；2)将步骤1)获得的带桥接体的载体与青霉素酰化酶水溶液混合搅拌得到混合料液，向所述混合料液中滴加三乙氨进行第二缩合反应20～40h后，进行第二固液分离，收集固相组分为固定化的青霉素酰化酶；所述桥接体为主链包含2～8个碳原子的卤酰卤；所述载体为氨基树脂。2.根据权利要求1所述的青霉素酰化酶的固定化方法，其特征在于，所述桥接体为卤乙酰卤、卤丙酰卤、卤丁酰卤或卤戊酰卤。3.根据权利要求1或2所述的青霉素酰化酶的固定化方法，其特征在于，步骤1)中所述滴加的时间为20～60min，所述滴加和第一缩合反应的温度独立为-10～40℃。4.根据权利要求1所述的青霉素酰化酶的固定化方法，其特征在于，所述桥接体与载体的质量比为(0.05～0.2)：1。5.根据权利要求1所述的青霉素酰化酶的固定化方法，其特征在于，步骤2)中所述带桥接体的载体与青霉素酰化酶水溶液的质量比为...

【专利技术属性】
技术研发人员：高占文，郑长春，张冬梅，刘霄，张宪生，
申请(专利权)人：山东鲁抗医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37