牙龈卟啉单胞菌诱导巨噬细胞外泌体RNA表达研究方法技术

本发明专利技术的牙龈卟啉单胞菌诱导巨噬细胞外泌体RNA表达研究方法，步骤包括：1)将人单核细胞U937依次进行复苏、培养及诱导，获得巨噬细胞；2)将细菌P.gingivalis W83复苏；3)构建P.gingivalis W83感染巨噬细胞的体外炎症模型；4)分别提取P.gingivalis W83感染巨噬细胞前后释放的外泌体并进行鉴定；5)分别提取P.gingivalis W83感染巨噬细胞前后释放的外泌体总RNA，进行全转录组的高通量测序，筛选差异表达的mRNA、lncRNA、circRNA，进行整合分析。本发明专利技术首次研究了巨噬细胞在被牙龈卟啉单胞菌感染的模拟炎症过程中分泌的外泌体内RNA表达的变化，根据实验结果可为外泌体在牙周致病和免疫过程的进一步研究奠定良好的基础。

Study on RNA expression in macrophage exosomes induced by Porphyromonas gingivalis

The research method of Porphyromonas gingivalis inducing macrophage exosome RNA expression comprises the following steps: 1) resuscitating, culturing and inducing human monocyte U937 in turn to obtain macrophages; 2) resuscitating bacteria P. gingivalis W83; 3) constructing an in vitro inflammatory model of macrophages infected by P. gingivalis W83; 4) extracting P. gingivalis W83 and releasing it before and after infection with macrophages respectively. The exosomes were identified and identified. 5) Total RNA of exosomes released before and after P. gingivalis W83 infection of macrophages was extracted, and high-throughput sequencing of full transcription group was carried out. Differentially expressed RNA, lncRNA and circRNA were screened for integrated analysis. The present invention is the first to study the changes of RNA expression in the exosome secreted by macrophages during simulated inflammation caused by Porphyromonas gingivalis infection. The experimental results can lay a good foundation for the further study of the periodontal pathogenesis and immune process of exosomes.

【技术实现步骤摘要】
牙龈卟啉单胞菌诱导巨噬细胞外泌体RNA表达研究方法
本专利技术属于细胞生物学
，具体涉及一种牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis)诱导巨噬细胞外泌体RNA表达研究方法。
技术介绍
牙周炎(periodontitis)是一种以牙菌斑为始发因子、P.gingivalis为主要致病菌的发生在牙周支持组织的慢性破坏性、炎症性疾病[1]。其中P.gingivalis是一种革兰式阴性短杆菌，产黑色素并且专性厌氧，属于红色复合体的一员。P.gingivalis对牙周支持组织的破坏与其外膜结构密切相关，菌毛(fimbriae)、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、外膜蛋白(outermembraneprotein，OMP)、红细胞凝集素(hemagglutinin，HA)、蛋白酶(牙龈素，gingipains)是P.gingivalis表面最重要的致病因子[2]，均可被巨噬细胞识别，刺激巨噬细胞后使其合成并分泌多种促炎性细胞因子，细胞受损导致牙周组织损伤和破坏。有学者在研究心血管疾病时发现，革兰氏阴性菌表面的LPS刺激巨噬本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.牙龈卟啉单胞菌诱导巨噬细胞外泌体RNA表达研究方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将人单核细胞U937依次进行复苏、培养及诱导，获得巨噬细胞；(2)将细菌P.gingivalis W83复苏；(3)构建P.gingivalis W83感染巨噬细胞的体外炎症模型；(4)分别提取P.gingivalis W83感染巨噬细胞前后释放的外泌体并进行鉴定；(5)分别提取P.gingivalis W83感染巨噬细胞前后释放的外泌体总RNA，进行全转录组的高通量测序，筛选差异表达的mRNA、lncRNA、circRNA，并结合GO和KEGG进行整合分析。

【技术特征摘要】
1.牙龈卟啉单胞菌诱导巨噬细胞外泌体RNA表达研究方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将人单核细胞U937依次进行复苏、培养及诱导，获得巨噬细胞；(2)将细菌P.gingivalisW83复苏；(3)构建P.gingivalisW83感染巨噬细胞的体外炎症模型；(4)分...

【专利技术属性】
技术研发人员：林莉，李琛，张冬梅，王宏岩，潘亚萍，
申请(专利权)人：中国医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21