一种利用流式细胞仪检测腹腔吞噬细胞活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用流式细胞仪检测腹腔吞噬细胞活性的方法，旨在提供一种能够消除未吞噬荧光酵母细胞对分析结果的影响，对吞噬细胞吞噬酵母的个数进行定量分析，快速、准确、简单易行的检测吞噬细胞活性的方法。包括下述步骤：制备啤酒酵母细胞冻干粉；利用ＦＩＴＣ标记啤酒酵母细胞；将荧光标记啤酒酵母细胞的悬液与小鼠血清室温孵育；将腹腔吞噬细胞悬液加入培养板的一个孔中；将与小鼠血清孵育后的荧光标记啤酒酵母细胞的悬液与同样的腹腔吞噬细胞悬液加入到细胞培养板中其余的孔中，将细胞培养板贴壁孵育；利用流式细胞仪获取数据并对数据进行分析。本发明专利技术方法较为准确的测定了吞噬率和吞噬指数，重复性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞生物实验
，更具体的说，是涉及一种利用流式细胞仪的 快速、准确的特点来检测腹腔吞噬细胞活性的方法。
技术介绍
腹腔吞噬细胞对于机体抵御病原体的入侵起着重要的作用。吞噬细胞属于非特 异性免疫细胞，能够非特异性的吞噬进入人体内的病原体，衰老病变细胞，参与抗原识别与 递呈，生成多种细胞因子，在机体的固有免疫中发挥重要作用。因此，检测吞噬细胞活性对 于药物的筛选和功能性食品的开发具有极其重要的意义。而传统的检测吞噬细胞的活性主 要有吞噬鸡红细胞和酵母的方法，由于这些方法费时、工作量大，受人的主观因素影响比较 大，观察的数量较少，一般只计数100个吞噬细胞，所以存在一定误差。目前，用流式细胞仪来检测吞噬细胞活性已经越来越受到人们的关注。由于流式 细胞仪检测速度可达每秒10，000个左右的细胞，共计数20，000个细胞，极大的提高了检测 的准确性，并为样本数量较多的实验设计提供了一个快速、准确、可行的实验方法。自1982 年Steinkamp首创荧光微球流式细胞术定量检测吞噬细胞吞噬功能以来，到目前为止，发 展起来的技术方法也很多，如吞噬荧光微球的方法以及吞噬荧光标记大本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用流式细胞仪检测腹腔吞噬细胞活性的方法，其特征在于，包括下述步骤：（１）制备啤酒酵母细胞冻干粉：利用土豆培养基培养啤酒酵母细胞，并将获得的啤酒酵母细胞溶液通过冷冻干燥制成啤酒酵母细胞冻干粉；（２）利用ＦＩＴＣ标记啤酒酵母细胞：将ＦＩＴＣ与二甲亚砜按照１ｍｇ∶２００μｌ的比例溶解，然后与ｐＨ值为９．５、浓度为０．５Ｍ的碳酸缓冲液混合配制成浓度为０．１ｍｇ／ｍｌ的ＦＩＴＣ溶液备用；将步骤（１）中得到的啤酒酵母细胞冻干粉与ｐＨ值为７．２、浓度为０．０１Ｍ的ＰＢＳ缓冲液按２０ｍ测得步骤（２）中备用的荧光标记的啤酒酵母细胞的平均荧光强度，并以此荧光强度作为标准；③取步骤（４）中获得的吞噬荧光啤酒酵...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈庆森，李伟，阎亚丽，
申请(专利权)人：天津商业大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]