抗LAG-3抗体制造技术

本发明专利技术公开了抗LAG‑3抗体。还公开了包含这种抗体的组合物，以及使用该组合物的用途和方法。

Anti-LAG-3 antibody

The invention discloses an anti-LAG_3 antibody. Compositions containing such antibodies and the use and method of using the composition are also disclosed.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗LAG-3抗体专利
本专利技术涉及结合至淋巴细胞活化基因3(LAG-3)的抗体。
技术介绍
T细胞耗竭是许多慢性感染和癌症中出现的T细胞功能障碍的状态。它定义为T细胞效应子功能不良，抑制性受体的持续表达和与功能性效应子或记忆性T细胞的转录状态不同的转录状态。耗尽可以防止感染和肿瘤的最佳控制。(EJohnWherry，NatureImmunology12,492-499(2011))。T细胞耗竭的特征在于T细胞功能的逐步和渐进性丧失。在慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)感染期间，耗竭是明确的，并且通常在许多慢性感染(包括乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒感染)后的抗原持久性的条件下以及肿瘤转移期间发生。耗竭不是一致的无能力情况，因为表型和功能缺陷的分级可以显化，这些细胞与原型效应细胞，记忆和无能T细胞不同。耗竭的T细胞在高等级慢性感染期间最常出现，抗原刺激的水平和持续时间是该过程的关键决定因素。(Yi等，ImmunologyApr2010；129(4)：474-481)。循环人肿瘤特异性CD8+T细胞可能是细胞毒性的并且在体内产生细胞因子，表明自身和肿瘤特异性人CD8+T细胞在有效的免疫治疗，如用肽，不完全弗氏佐剂(IFA)和CpG接种或过继转移后，能够达到功能的能力。与外周血相比，浸润肿瘤位置的T细胞通常功能缺陷，细胞因子产生异常低，并且抑制性受体PD-1，CTLA-4，TIM-3和LAG-3上调。功能缺陷是可逆的，因为从黑素瘤组织分离的T细胞在短期体外培养后可以恢复IFN-γ产生。然而，仍然要确定这种功能障碍是否涉及进一步的分子途径，可能类似于动物模型中定义的T细胞耗尽或无反应性。(Baitsch等，JClinInvest.2011；121(6)：2350-2360)。淋巴细胞活化基因3(LAG-3)，也称为CD223，是由LAG3基因在人类中编码的I型跨膜蛋白。本文描述的LAG-3的分子特性和生物学功能在Sierro等人，ExpertOpinTherTargets(2011)15(1)：91-101中综述。LAG-3是CD4样蛋白，在T细胞(特别是活化的T细胞)自然杀伤细胞、B细胞和浆细胞样树突细胞的表面表达。LAG-3是负性共刺激受体，即抑制性受体。LAG-3与II类MHC分子结合，在抗原呈递细胞(APC)表面以高水平组成型表达的分子家族，如树突细胞、巨噬细胞和B细胞。LAG-3功能取决于与II类MHC的结合和通过其细胞质结构域的信号传导。LAG-3是T细胞反应的负调节因子；LAG-3的抑制导T细胞增殖改善，而LAG-3的过表达损害抗原驱动的T细胞增殖。LAG-3在T细胞上的交联削弱TCR介导的CD4+T细胞活化，导致增殖减少、IL-2的产生减少和TH1型细胞因子(即IFNγ、TNFα)的产生减少。LAG-3表达也是CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞(Tregs)的特征。在抗原刺激后，LAG-3在CD8+T细胞上以高水平表达，CD8+T细胞上的LAG-3表达类似地与增强的调节活性和降低的增殖潜力相关。研究表明，慢性病毒感染后耗尽的CD8+T细胞表达多种抑制性受体(如PD-1、CD160和2B4)。在LCMV感染后，LAG-3以高水平表达，阻断PD-1/PD-L1途径结合阻断LAG-3已显示出可显著降低慢性感染小鼠的病毒载量(Blackburn等，NatImmunol(2009)10：29-37)。PD-1/PD-L1途径和LAG-3阻断的组合抑制也已显示出提供了抗肿瘤功效(Jing等，JournalforImmunoTherapyofCancer(2015)3：2)。专利技术概述本专利技术涉及与LAG-3结合的抗体或抗原结合片段。还公开了重链和轻链多肽。所述抗体、抗原结合片段和多肽可以分离和/或纯化形式提供，并且可以配制成适用于研究，治疗和诊断的组合物。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段或多肽可对表现出T细胞耗竭或T细胞无反应性的T细胞(例如，CD4+或CD8+T细胞)进行T细胞功能重建。在本专利技术的一个方面，提供了一种抗体或抗原结合片段，所述抗体的氨基酸序列可以包含氨基酸序列i)至iii)或氨基酸序列iv)至vi)，或优选地氨基酸序列i)至vi)：i)LC-CDR1：X1X2SQSX3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13(SEQIDNO：53)；ii)LC-CDR2：X14X15SX16RAX17(SEQIDNO：54)；iii)LC-CDR3：X18QX19X20X21X22X23X24X25X26X27(SEQIDNO：55)；iv)HC-CDR1：X28X29X30X31X32(SEQIDNO：56)；v)HC-CDR2：X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42YAX43X44X45X46G(SEQIDNO：57)；vi)HC-CDR3：PFGDFDY(SEQIDNO：30)，LPGWGAYAFDI(SEQIDNO：33)，DPDAANWGFLLYYGMDV(SEQIDNO：35)，ALADFWSGYYYYYYMDV(SEQIDNO：38)，或TWFGELYY(SEQIDNO：41)中之一；或其变体，所述的变体中(i)至(vi)中的一个或多个序列的一个、两个或三个氨基酸被另一氨基酸所替代，其中X1＝R或T；X2＝S、A或T；X3＝L或V；X4＝L或S；X5＝H或S；X6＝S、G或T；X7＝N、F、Y、D或S；X8＝G或L；X9＝Y、A或D；X10＝无或N；X11＝无或Y；X12＝无、L或F；X13＝无(即，无氨基酸)或D；X14＝L、G或D；X15＝G或A；X16＝N或S；X17＝S、T或A；X18＝M或Q；X19＝A、Y或G；X20＝L、G或T；X21＝Q、P、S或H；X22＝T、S或W；X23＝P、I、R或L；X24＝Y、T、P或L；X25＝无、T、I或G；X26＝无、T或L；X27＝无或T；X28＝S或E；X29＝Y或L；X30＝Y、G、A或S；X31＝M或I；X32＝H或S；X33＝I、G或V；X34＝I或F；X35＝N、S、I或D；X36＝P或Y；X37＝S、D、I或E；X38＝G、F或D；X39＝G或S；X40＝S、N、T或E；X41＝T、K或A；X42＝S、Y、N或I；X43＝Q或D；X44＝K或S；X45＝F或V；X46是Q或K。在一些实施方案中，LC-CDR1是RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQIDNO：12)，RASQSVSSSFLA(SEQIDNO：15)，RASQSVSSSYLA(SEQIDNO：18)，RSSQSLLHSDGYNYFD(SEQIDNO：20)，RASQSVSSGYLA(SEQIDNO：23)或TTSQSVSSTSLD(SEQIDNO：26)之一。在一些实施方案中，LC-CDR2是LGSNRAS(SEQIDNO：13)，GASSRAT(SEQIDNO：16)，LGSNRAA(SEQIDNO：21)或DASSRAT(SEQIDNO：24)之一。在一些实施方案中，LC-CDR3是MQALQTPYT(SEQIDNO：14)，QQYGPSIT(SEQIDNO：17)，QQYGSSPPI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种任选分离的能够结合至LAG‑3的抗体或抗原结合片段，所述的抗体或抗原结合片段具有i)至vi)所示的氨基酸序列：i)LC‑CDR1：X1X2SQSX3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13(SEQ ID NO:53)ii)LC‑CDR2：X14X15SX16RAX17(SEQ ID NO:54)iii)LC‑CDR3：X18QX19X20X21X22X23X24X25X26X27(SEQ ID NO:55)iv)HC‑CDR1：X28X29X30X31X32(SEQ ID NO:56)v)HC‑CDR2：X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42YAX43X44X45X46G(SEQ ID NO:57)vi)HC‑CDR3：TWFGELYY(SEQ ID NO：41)、PFGDFDY(SEQ ID NO：30)、LPGWGAYAFDI(SEQ ID NO：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(SEQ ID NO：35)或ALADFWSGYYYYYYMDV(SEQ ID NO：38)中之一；或其变体，所述的变体中(i)至(vi)中的一个或多个序列的一个、两个或三个氨基酸被另一氨基酸所替代，其中X1＝R或T；X2＝S、A或T；X3＝L或V；X4＝L或S；X5＝H或S；X6＝S、G或T；X7＝N、F、Y、D或S；X8＝G或L；X9＝Y、A或D；X10＝无或N；X11＝无或Y；X12＝无、L或F；X13＝无或D；X14＝L、G或D；X15＝G或A；X16＝N或S；X17＝S、T或A；X18＝M或Q；X19＝A、Y或G；X20＝L、G或T；X21＝Q、P、S或H；X22＝T、S或W；X23＝P、I、R或L；X24＝Y、T、P或L；X25＝无、T、I或G；X26＝无、T或L；X27＝无或T；X28＝S或E；X29＝Y或L；X30＝Y、G、A或S；X31＝M或I；X32＝H或S；X33＝I、G或V；X34＝I或F；X35＝N、S、I或D；X36＝P或Y；X37＝S、D、I或E；X38＝G、F或D；X39＝G或S；X40＝S、N、T或E；X41＝T、K或A；X42＝S、Y、N或I；X43＝Q或D；X44＝K或S；X45＝F或V；X46是Q或K。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.04 SG 10201601719R1.一种任选分离的能够结合至LAG-3的抗体或抗原结合片段，所述的抗体或抗原结合片段具有i)至vi)所示的氨基酸序列：i)LC-CDR1：X1X2SQSX3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13(SEQIDNO:53)ii)LC-CDR2：X14X15SX16RAX17(SEQIDNO:54)iii)LC-CDR3：X18QX19X20X21X22X23X24X25X26X27(SEQIDNO:55)iv)HC-CDR1：X28X29X30X31X32(SEQIDNO:56)v)HC-CDR2：X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42YAX43X44X45X46G(SEQIDNO:57)vi)HC-CDR3：TWFGELYY(SEQIDNO：41)、PFGDFDY(SEQIDNO：30)、LPGWGAYAFDI(SEQIDNO：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(SEQIDNO：35)或ALADFWSGYYYYYYMDV(SEQIDNO：38)中之一；或其变体，所述的变体中(i)至(vi)中的一个或多个序列的一个、两个或三个氨基酸被另一氨基酸所替代，其中X1＝R或T；X2＝S、A或T；X3＝L或V；X4＝L或S；X5＝H或S；X6＝S、G或T；X7＝N、F、Y、D或S；X8＝G或L；X9＝Y、A或D；X10＝无或N；X11＝无或Y；X12＝无、L或F；X13＝无或D；X14＝L、G或D；X15＝G或A；X16＝N或S；X17＝S、T或A；X18＝M或Q；X19＝A、Y或G；X20＝L、G或T；X21＝Q、P、S或H；X22＝T、S或W；X23＝P、I、R或L；X24＝Y、T、P或L；X25＝无、T、I或G；X26＝无、T或L；X27＝无或T；X28＝S或E；X29＝Y或L；X30＝Y、G、A或S；X31＝M或I；X32＝H或S；X33＝I、G或V；X34＝I或F；X35＝N、S、I或D；X36＝P或Y；X37＝S、D、I或E；X38＝G、F或D；X39＝G或S；X40＝S、N、T或E；X41＝T、K或A；X42＝S、Y、N或I；X43＝Q或D；X44＝K或S；X45＝F或V；X46是Q或K。2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中LC-CDR1是下组之一：RASQSVSSGYLA(SEQIDNO：23)、RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQIDNO：12)、RASQSVSSSFLA(SEQIDNO：15)、RASQSVSSSYLA(SEQIDNO：18)、RSSQSLLHSDGYNYFD(SEQIDNO：20)、或TTSQSVSSTSLD(SEQIDNO：26)。3.如权利要求1或2所述的抗体或抗原结合片段，其中LC-CDR2是下组之一：DASSRAT(SEQIDNO：24)、LGSNRAS(SEQIDNO：13)、GASSRAT(SEQIDNO：16)或LGSNRAA(SEQIDNO：21)。4.如权利要求1-3所述的抗体或抗原结合片段，其中LC-CDR3是下组之一：QQYGSSRPGLT(SEQIDNO：25)、MQALQTPYT(SEQIDNO：14)、QQYGPSIT(SEQIDNO：17)、QQYGSSPPIT(SEQIDNO：19)、MQGTHWPPT(SEQIDNO：22)或QQYGSSLLT(SEQIDNO：27)。5.如权利要求1-4所述的抗体或抗原结合片段，其中HC-CDR1是下组之一：ELSMH(SEQIDNO：39)、SYYMH(SEQIDNO：28)、SYGMH(SEQIDNO：31)、SYAMH(SEQIDNO：34)或SYAIS(SEQIDNO：36)。6.如权利要求1-5所述的抗体或抗原结合片段，其中HC-CDR2是下组之一：GFDPEDGETIYAQKFQG(SEQIDNO：40)，IINPSGGSTSYAQKFQG(SEQIDNO：29)VISYDGSNKYYADSVKG(SEQIDNO：32)或GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQIDNO：37)。7.如权利要求1-6中任一所述的抗体或抗原结合片段,具有至少一个包含以下CDR的轻链可变区：LC-CDR1：X1X2SQSX3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13(SEQIDNO：53)LC-CDR2：X14X15SX16RAX17(SEQIDNO：54)LC-CDR3：X18QX19X20X21X22X23X24X25X26X27(SEQIDNO：55)；其中X1＝R或T；X2＝S、A或T；X3＝L或V；X4＝L或S；X5＝H或S；X6＝S、G或T；X7＝N、F、Y、D或S；X8＝G或L；X9＝Y、A或D；X10＝无或N；X11＝无或Y；X12＝无、L或F；X13＝无或D；X14＝L、G或D；X15＝G或A；X16＝N或S；X17＝S、T或A；X18＝M或Q；X19＝A、Y或G；X20＝L、G或T；X21＝Q、P、S或H；X22＝T、S或W；X23＝P、I、R或L；X24＝Y、T、P或L；X25＝无、T、I或G；X26＝无、T或L；和X27＝无或T。8.如权利要求1-7中任一所述的抗体或抗原结合片段，具有至少一个包含以下CDR的轻链可变区：LC-CDR1：RASQSVSSGYLA(SEQIDNO：23)LC-CDR2：DASSRAT(SEQIDNO：24)LC-CDR3：QQYGSSRPGLT(SEQIDNO：25)。9.如权利要求1-7中任一所述的抗体或抗原结合片段,具有至少一个包含以下CDR的轻链可变区：LC-CDR1：RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQIDNO：12)LC-CDR2：LGSNRAS(SEQIDNO：13)LC-CDR3：MQALQTPYT(SEQIDNO：14)。10.如权利要求1-7中任一所述的抗体或抗原结合片段,具有至少一个包含以下CDR的轻链可变区：LC-CDR1：RASQSVSSSFLA(SEQIDNO：15)LC-CDR2：GASSRAT(SEQIDNO：16)LC-CDR3：QQYGPSIT(SEQIDNO：17)。11.如权利要求1-7中任一所述的抗体或抗原结合片段,具有至少一个包含以下CDR的轻链可变区：LC-CDR1：RASQSVSSSYLA(SEQIDNO：18)LC-CDR2：GASSRAT(SEQIDNO：16)LC-CDR3：QQYGSSPPIT(SEQIDNO：19)。12.如权利要求1-7中任一所述的抗体或抗原结合片段,具有至少一个包含以下CDR的轻链可变区：LC-CDR1：RSSQSLLHSDGYNYFD(SEQIDNO：20)LC-CDR2：LGSNRAA(SEQIDNO：21)LC-CDR3：MQGTHWPPT(SEQIDNO：22)。13.如权利要求1-7中任一所述的抗体或抗原结合片段,具有至少一个包含以下CDR的轻链可变区：LC-CDR1：TTSQSVSSTSLD(SEQIDNO：26)LC-CDR2：GASSRAT(SEQIDNO：16)LC-CDR3：QQYGSSLLT(SEQIDNO：27)。14.如权利要求1-13中任一所述的抗体或抗原结合片段,具有至少一个包含以下CDR的重链可变区：HC-CDR1：X28X29X30X31X32(SEQIDNO：56)；HC-CDR2：X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42YAX43X44X45X46G(SEQIDNO：57)；HC-CDR3：TWFGELYY(SEQIDNO：41)、PFGDFDY(SEQIDNO：30)、LPGWGAYAFDI(SEQIDNO：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(SEQIDNO：35)或ALADFWSGYYYYYYMDV(SEQIDNO：38)中之一；其中X28＝S或E；X29＝Y或L；X30＝Y、G、A或S；X31＝M或I；X32＝H或S；X33＝I、G或V；X34＝I或F；X35＝N、S、I或D；X36＝P或Y；X37＝S、D、I或E；X38＝G、F或D；X39＝G或S；X40＝S、N、T或E；X41＝T、K或A；X42＝S、Y、N或I；X43＝Q或D；X44＝K或S；X45＝F或V；X46isQ或K。15.如权利要求1-14中任一所述的抗体或抗原结合片段,具有至少一个包含以下CDR的重链可变区：HC-CDR1：ELSMH(SEQIDNO：39)HC-CDR2：GFDPEDGETIYAQKFQG(SEQIDNO：40)HC-CDR3：TWFGELYY(SEQIDNO：41)。16.如权利要求1-14中任一所述的抗体或抗原结合片段，具有至少一个包含以下CDR的重链可变区：HC-CDR1：SYYMH(SEQIDNO：28)HC-CDR2：IINPSGGSTSYAQKFQG(SEQIDNO：29)HC-CDR3：PFGDFDY(SEQIDNO：30)。17.如权利要求1-14中任一所述的抗体或抗原结合片段，具有至少一个包含以下CDR的重链可变区：HC-CDR1：SYGMH(SEQIDNO：31)HC-CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG(SEQIDNO：32)HC-CDR3：LPGWGAYAFDI(SEQIDNO：33)。18.如权利要求1-14中任一所述的抗体或抗原结合片段，具有至少一个包含以下CDR的重链可变区：HC-CDR1：SYAMH(SEQIDNO：34)HC-CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG(SEQIDNO：32)HC-CDR3：DPDAANWGFLLYYGMDV(SEQIDNO：35)。19.如权利要求1-14中任一所述的抗体或抗原结合片段，具有至少一个包含以下CDR的重链可变区：HC-CDR1：SYAIS(SEQIDNO：36)HC-CDR2：GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQIDNO：37)HC-CDR3：ALADFWSGYYYYYYMDV(SEQIDNO：38)。20.如权利要求1-19中任一所述的抗体或抗原结合片段，特别地结合于人、恒河猴或鼠LAG-3。21.如权利要求1-20中任一所述的抗体或抗原结合片段，抑制LAG-3和II类MHC，任选地人LAG-3和人II类MHC之间的相互作用。22.如权利要求1-21中任一所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体有效地恢复表现出T细胞衰竭或T细胞无反应性的T细胞中的T细胞功能。23.一种分离的轻链可变区多肽，所述多肽包含以下CDR：LC-CDR1：X1X2SQSX3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13(SEQIDNO：53)LC-CDR2：X14X15SX16RAX17(SEQIDNO：54)LC-CDR3：X18QX19X20X21X22X23X24X25X26X27(SEQIDNO：55)；其中X1＝R或T；X2＝S、A或T；X3＝L或V；X4＝L或S；X5＝H或S；X6＝S、G或T；X7＝N、F、Y、D或S；X8＝G或L；X9＝Y、A或D；X10＝无或N；X11＝无或Y；X12＝无、L或F；X13＝无或D；X14＝L、G或D；X15＝G或A；X16＝N或S；X17＝S、T或A；X18＝M或Q；X19＝A、Y或G；X20＝L、G或T；X21＝Q、P、S或H；X22＝T、S或W；X23＝P、I、R或L；X24＝Y、T、P或L；X25＝无、T、I或G；X26＝无、T或L；X27＝无或T。24.如权利要求23所述的分离的轻链可变区多肽，其中LC-CDR1是下组之一：RASQSVSSGYLA(SEQIDNO：23)、RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQIDNO：12)、RASQSVSSSFLA(SEQIDNO：15)、RASQSVSSSYLA(SEQIDNO：18)、RSSQSLLHSDGYNYFD(SEQIDNO：20)或TTSQSVSSTSLD(SEQIDNO：26)。25.如权利要求23或24任一所述的分离的轻链可变区多肽，其中LC-CDR2是下组之一：DASSRAT(SEQIDNO：24)、LGSNRAS(SEQIDNO：13)、GASSRAT(SEQIDNO：16)或LGSNRAA(SEQIDNO：21)。26.如权利要求23-25任一所述的分离的轻链可变区多肽，其中LC-CDR3是下组之一：QQYGSSRPGLT(SEQIDNO：25)、MQALQTPYT(SEQIDNO：14)、QQYGPSIT(SEQIDNO：17)...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪正一，胡雪玲，杨淑斌，李嘉韵，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡,SG