一种检测BRAF基因突变的方法及其试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种检测BRAF基因突变的方法及其试剂盒，具体地本发明专利技术提供了一种基于数字PCR技术检测BRAF基因突变的方法及其试剂盒，该试剂盒包括用于配制数字PCR反应液的酶和适用于数字PCR的引物探针组合。与传统PCR技术相比，本发明专利技术采用数字PCR克服了传统PCR技术检测限高、准确度低的缺点，本发明专利技术中使用的引物探针可同时检测BRAF的多个位点突变，大大提高了通用性。使用本发明专利技术的检测方法和试剂盒，样品需求量少，灵敏度和特异性高，检测效率大大提高。

A Method for Detecting BRAF Gene Mutation and Its Kit

The invention provides a method for detecting BRAF gene mutation and a kit thereof. In particular, the invention provides a method for detecting BRAF gene mutation based on digital PCR technology and a kit thereof. The kit comprises an enzyme for preparing a digital PCR reaction solution and a combination of primer probes suitable for digital PCR. Compared with the traditional PCR technology, the digital PCR overcomes the shortcomings of high detection limit and low accuracy of the traditional PCR technology. The primer probe used in the invention can simultaneously detect multiple site mutations of BRAF, and greatly improves the versatility. By using the detection method and kit of the invention, the sample requirement is small, the sensitivity and specificity are high, and the detection efficiency is greatly improved.

【技术实现步骤摘要】
一种检测BRAF基因突变的方法及其试剂盒
本专利技术属于生物技术和基因检测领域，具体涉及一种检测BRAF基因V600阳性突变的引物、探针及其试剂盒。
技术介绍
位于染色体7q34的BRAF基因编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，与ARAF、CRAF同属于RAF家族。BRAF基因的突变可发生在原发性和转移性肿瘤中。研究表明，7-8％的肿瘤发生BRAF基因点突变，包括约40-68％恶性黑色素瘤、5-20％甲状腺乳头状癌、5-15％结肠癌以及3％肺癌等。目前已发现的BRAF基因突变类型达40余种，主要位于CR3激酶结构域的第15外显子及第11外显子，其中BRAF最常见突变形式(大约95％)为第15外显子的第1799位核苷酸上缬氨酸(T)突变为谷氨酸(A)，即V600E，其他已被报道的有V600D，V600K。BRAF是RAS-RAF-MEK-ERKMAPK信号通路重要的转导因子，BRAF突变可直接导致丝裂原活化的细胞外信号调节蛋白激酶(mitogen-activatedextracellularsignal-regulatedkinase,MEK)活化并继续活化ERK，致使MAPK通路被持续激活，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于数字PCR检测BRAF基因V600突变的通用引物对，其特征在于，所述通用引物对包括通用上游引物F和通用下游引物R；其中，所述通用上游引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示，所述通用下游引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.:2所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于数字PCR检测BRAF基因V600突变的通用引物对，其特征在于，所述通用引物对包括通用上游引物F和通用下游引物R；其中，所述通用上游引物F的核苷酸序列如SEQIDNO.:1所示，所述通用下游引物R的核苷酸序列如SEQIDNO.:2所示。2.一种用于数字PCR检测BRAF基因V600突变的探针组，其特征在于，所述探针组包括选自下组的一种或多种探针：探针T1、探针T2、探针T3、和探针T4；其中，所述探针T1核苷酸序列如SEQIDNO.:3所示，所述探针T2核苷酸序列如SEQIDNO.:4所示，所述探针T3核苷酸序列如SEQIDNO.:5所示，所述探针T4核苷酸序列如SEQIDNO.:6所示。3.如权利要求2所述的探针组，其特征在于，所述探针组包括：探针T1、探针T2、探针T3、和探针T4。4.如权利要求2所述的探针组，其特征在于，所述探针T1的5’端包含有荧光报告基团VIC；和/或，所述探针T1的3’端包含有淬灭基团MGB。5.如权利要求2所述的探针组，其特征在于，所述探针T2、所述探针T3、或所述探针T4的5’端包含有荧光报告基团FAM；和/或，所述探针T2、所述探针T3、或所述探针T4的3’端包含有淬灭基团MGB。6.一种用于数字PCR检测BRAF基因V600突变的试剂盒，其特征在于，所述试...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，朱小亚，颜尔聪，
申请(专利权)人：中山大学达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44