本发明专利技术公开了一种噬菌体，其DNA序列为SEQ ID No.1所示的序列。本发明专利技术中的噬菌体裂解谱广，可以裂解多种副溶血弧菌。热稳定性强，可以耐受环境中的较高温度。使用本发明专利技术中的噬菌体处理副溶血弧菌污染的鱼肉样品后，在短时间内样品中的细菌数目显著减少，说明噬菌体能够杀灭样品中的副溶血弧菌，能够起到食品安全保护剂的作用，具有广泛的应用前景。
A Vibrio parahaemolyticus Phage and its application
The present invention discloses a bacteriophage whose DNA sequence is the sequence shown in SEQ ID No.1. The bacteriophage in the invention has a wide splitting spectrum, and can crack various Vibrio parahaemolyticus. It has strong thermal stability and can tolerate high temperature in the environment. After using the bacteriophage of the present invention to treat the fish meat sample contaminated by Vibrio parahaemolyticus, the number of bacteria in the sample decreases significantly in a short time, which shows that the bacteriophage can kill Vibrio parahaemolyticus in the sample, can play the role of food safety protector, and has broad application prospects.
【技术实现步骤摘要】
一种副溶血弧菌噬菌体及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种副溶血弧菌噬菌体及其应用。
技术介绍
近年来，我国养殖业迅猛发展，收益颇丰，但是抗细菌药物在养殖业上的长期大量使用，带来了诸如环境污染、耐药性产生以及食品安全等问题。并且抗生素的研发周期长，研发成本高，所以亟待寻求一种能够有效控制动物疾病又环境友好型的新技术、新产品，用以部分或完全替代抗细菌药物。目前，人们关注最多的还是微生物防治，包括拮抗菌防治法、蛭弧菌防治法和噬菌体防治法，这些方法对环境没有污染，且不会破坏生态环境，越来越受到人们的重视。其中，噬菌体为侵染细菌的病毒，在自然界中广泛存在，被认为是地球上丰度和多样性最高的生物，在大多数已经被研究过的生态系统中，细菌和噬菌体是共生关系，它们的丰度比是1:10，研究表明，环境中的噬菌体数量为1031。而且具有宿主专一性强的特点，不感染哺乳动物细胞，只能侵染特定的一类或一种宿主菌。在侵染宿主菌后，只感染宿主菌不裂解其他菌，不会破坏微生态环境。噬菌体颗粒感染一个细菌细胞后可迅速生成几百个子代噬菌体颗粒，每个子代颗粒又可感染细菌细胞，再生成几百个子代噬菌体颗粒。如此重复只需4次，一个噬菌体颗粒便可使几十亿个细菌感染而死亡。水产养殖中使用噬菌体作为抗菌剂已有文献报道(荣蓉.副溶血弧菌噬菌体VPp1在牡蛎净化中的应用及其规模化制备和保存[D].中国海洋大学,2014.)，但是根据其试验结果，噬菌体VPp1裂解副溶血弧菌的效果并不理想。另外，由于噬菌体具有宿主特异性，只能够裂解一种或者一类细菌，因而使噬菌体治疗在实际应用中存在宿主谱窄的问题，不能有效控制多发性细菌疾病。因此筛选高效广谱的噬菌体是研究噬菌体制剂的关键。已报道的分离的副溶血弧菌噬菌体的裂解谱比较窄，只能够裂解一种或者几种副溶血弧菌。因此，提供一种裂解副溶血弧菌效果较好，且具有广谱灭菌效果的噬菌体是非常有必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种副溶血弧菌噬菌体及其应用。本专利技术所采取的技术方案是：一种噬菌体，其DNA序列为SEQIDNo.1所示的序列。上述噬菌体在制备抗副溶血弧菌制剂中的应用。上述噬菌体在制备治疗副溶血弧菌感染药物中的应用。上述噬菌体在防治副溶血弧菌污染中的应用。进一步地，副溶血弧菌污染为水产品养殖、运输及保存过程中的细菌污染。一种抗菌剂，包括上述噬菌体。一种食品添加剂，包括上述噬菌体。一种清洁剂或消毒剂，包括上述噬菌体。本专利技术的有益效果是：本专利技术中的噬菌体裂解谱广，可以裂解多种副溶血弧菌。热稳定性强，可以耐受环境中的较高温度。使用本专利技术中的噬菌体处理副溶血弧菌污染的鱼肉样品后，在短时间内样品中的细菌数目显著减少，说明噬菌体能够杀灭样品中的副溶血弧菌，能够起到食品安全保护剂的作用，具有广泛的应用前景。附图说明图1～3为裂解谱实验结果；图4为噬菌体热稳定性测定结果；图5为噬菌体对鱼肉样品杀菌效果测定结果。具体实施方式下面将结合实施例进一步阐述本专利技术，应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的保护范围。实施例1噬菌体裂解谱的确定将不同的细菌单菌落活化至对数生长期，分别取菌液200μL滴到2216E固体培养基平板中，然后用无菌涂布棒将菌液涂布均匀至吸收，取10μL噬菌体原液分别滴到2216E固体培养基平板表面，在超净台内放置30min后置于37℃培养箱中培养8～12h。观察平板表面是否有噬菌体空斑出现。透明的空斑表明宿主对噬菌体敏感，没有空斑表明宿主对噬菌体不敏感。裂解谱实验结果如图1～3所示，其中图1为噬菌体对VP-DYW29的裂解效果，图2噬菌体对VP-ZH3-4的裂解效果，图3为噬菌体对ATCC17802的裂解效果，可见，噬菌体能够同时裂解副溶血弧菌ATCC17802、VP-ZH3-4、VP-DYW29等多株菌。实施例2噬菌体热稳定性测定取效价约108pfu/mL的噬菌体液1.0mL于无菌EP管中，分别于27、37、47、57、67℃的恒温水浴锅中作用1h，待作用时间结束后取出，进行系列10倍稀释后用双层平板法进行计数，重复三次取平均值，观察噬菌体效价的变化。实验结果如图4所示，有结果可知噬菌体可以耐受27℃至57℃的温度环境，在27℃至57℃作用1h，噬菌体效价变化不大，在67℃作用1h，噬菌体效价降为0，说明分离到的噬菌体可以耐受环境中的较高温度。实施例3噬菌体对鱼肉样品的副溶血弧菌杀菌效果的评价噬菌体效价：107pfu/mL，100μL；副溶血弧菌计数：107cfu/mL，100μL。试验分为试验组和对照组，具体检测步骤如下：1)将去除鱼皮的鱼肉切成面积为2*2cm的小块(约1g)，将肉块过火焰然后放在一次性平皿中备用；2)将100μL副溶血弧菌菌液均匀涂布在肉块表面；3)15min后，试验组鱼肉表面滴加100μL噬菌体，对照组不滴加噬菌体，加入100μLPBS；4)将制备好的样品分布置于25℃，于1h，2h，3h，6h，12h对副溶血弧菌计数。试验结果如图5所示，由结果可知：应用噬菌体处理副溶血弧菌污染的鱼肉样品后，在短时间内样品中的细菌数目显著减少，说明噬菌体能够杀灭样品中的副溶血弧菌，能够起到食品安全保护剂的作用。SEQUENCELISTING<110>广东海大畜牧兽医研究院有限公司<120>一种副溶血弧菌噬菌体及其应用<130>2018.8.16<160>1<170>PatentInversion3.5<210>1<211>91638<212>DNA<213>噬菌体<400>1gctggtaccctgctatatcaaacagcaaaacacgtagctgtataggggattgaggattaa60atttcttaccttcctgcttttcgaactcgataactgctgggtgtgagtaaagctcttctt120cagcctcaaagattgcttcatgcagtaatttttgcgctgcacgtaatctcttcttagaga180ccggaactcctcggtcttccatacgcttaaggaatcgcatacctggaatcattaagttct240cgtaaagctccttcagacgagggtttttcattacgattgggtagaacttgttgtgtagac300gtatggtagcgtccgtatctttcgcagcgtaagctgcgaggattgggaaaggaatcaggt360catatgtgaactgctctttcttaatcttatgcaccttacagtactcagacttgaactcgt420ctagctttttatcatagttacccatatcggtgtacttgattgctagaggttttaagccgt480gtcctttacgttcgtccagaacgtagtgctgaatcatggaatcgtgtaggcgtttctctt540tgaaacacttc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种噬菌体，其特征在于：噬菌体的DNA序列为SEQ ID No.1所示的序列。
【技术特征摘要】
1.一种噬菌体，其特征在于：噬菌体的DNA序列为SEQIDNo.1所示的序列。2.权利要求1所述的噬菌体在制备抗副溶血弧菌制剂中的应用。3.权利要求1所述的噬菌体在制备治疗副溶血弧菌感染药物中的应用。4.权利要求1所述的噬菌体在防治副溶血弧菌污染中的应用。5.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘小琴，胡丽媛，王贵平，钱雪桥，
申请(专利权)人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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