The present invention relates to a method for suspension culture of neuron-like cells derived from human skull mesenchymal stem cells, including the following steps: extracting bone marrow mesenchymal stem cells from human skull fragments or debris as tissue source, culturing and incubating them with 10% after incubation.
【技术实现步骤摘要】
一种人颅骨间充质干细胞来源的神经元样细胞的悬浮培养方法
本专利技术涉及细胞培养
，具体涉及一种人颅骨间充质干细胞来源的神经元样细胞的悬浮培养方法。
技术介绍
颅脑外伤、脑血管意外和脊髓损伤是世界范围内的常见病和多发病，也是导致伤病后残疾的首要因素。尽管目前在颅脑外伤和脑血管意外的急救和早期康复方面取得了很大进展，但对于颅脑外伤和脑血管意外后期的神经功能缺失仍缺乏有效的治疗方法。细胞移植治疗为上述疾病治疗提供了新方向，但由于用于细胞移植治疗的神经细胞无法获取而外源性神经细胞又难于培养扩增，因此，寻找一种能在体外条件下为神经干细胞构建较完美的立体组织载体以维持细胞的分化增殖，同时又能够在移植缺损的组织中促进组织再生并发挥功能的培养方法已成为治疗的关键。结冷胶(gellangum)是一种由革兰阴性好氧杆菌(少动鞘氨醇单胞菌)产生的阴离子型线型胞外多糖，随着悬浮凝胶技术的发展，结冷胶因其卓越的胶凝性能和离子敏感特性，使它在医药领域受到了很大关注，尤其在药剂学和组织工程方面，主要是作为细胞移植的载体。常规条件下，神经干细胞的培养或移植往往由于重力作用的缘故使细胞无法分...
【技术保护点】
1.一种人颅骨间充质干细胞来源的神经元样细胞的悬浮培养方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、人体颅骨碎块或碎屑作为组织来源提取骨髓间充质干细胞，培养孵化后以104～106个/cm2的密度接种至诱导液，诱导液的组成：1×N2、1×B27、30～50ng/ml b‑FGF，溶剂为DMEM/F12基础培养液，在37℃/5％CO2培养箱中分化诱导培养21天，获得神经元样细胞；步骤二、选用成品结冷胶加热至90℃以上配制成1％～3％质量分数比的溶液备用，溶剂为PBS，根据细胞培养接种的密度和诱导分化的要求，在DMEM培养基中添加配制的结冷胶溶液并加入浓度为10mmol/dm3的氯化钙...
【技术特征摘要】
1.一种人颅骨间充质干细胞来源的神经元样细胞的悬浮培养方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、人体颅骨碎块或碎屑作为组织来源提取骨髓间充质干细胞，培养孵化后以104～106个/cm2的密度接种至诱导液，诱导液的组成：1×N2、1×B27、30～50ng/mlb-FGF，溶剂为DMEM/F12基础培养液，在37℃/5％CO2培养箱中分化诱导培养21天，获得神经元样细胞；步骤二、选用成品结冷胶加热至90℃以上配制成1％～3％质量分数比的溶液备用，溶剂为PBS，根据细胞培养接种的密度和诱导分化的要求，在DMEM培养基中添加配制的结冷胶溶液并加入浓度为10mmol/dm3的氯化钙，冷却至30-35℃即成悬浮凝胶；步骤三、采用电子显微镜或激光共聚焦显微镜观察不同浓度结冷胶溶液配制的悬浮凝胶中网络结构的致密度和孔径的大小，筛选出适合神经元样细胞培养...
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