一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法技术

本发明专利技术提供一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法,包括：(1)将孔板于37℃下预热；(2)将10代以前的猪乳腺上皮细胞用胰蛋白酶消化成单细胞后离心，弃去上清，保留沉淀；(3)将沉淀用Matrigel与Advanced DMEM/F12完全培养基按照体积比1:1于0～10℃配制的混合溶液重悬，并调整猪乳腺上皮细胞浓度为1×10

A method for 3D culture of porcine mammary epithelial cells

The invention provides a method for culturing porcine mammary epithelial cells by 3D, including: (1) preheating the orifice plate at 37 degrees; (2) digesting the 10 generation of porcine mammary epithelial cells with trypsin to digest into single cells, then centrifugation, abandoning the supernatant and preserving the precipitation; (3) suspending the Matrigel and Advanced DMEM/F12 complete medium with the mixture solution of volume ratio 1:1 at 0~10 degrees Celsius and adjusting the pig. The concentration of mammary epithelial cells was 1 x 10

【技术实现步骤摘要】
一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法
本专利技术涉及细胞培养
，具体涉及一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法。
技术介绍
3D培养技术能更好地模拟体内的微环境，更好的体现细胞的极化形态，以及细胞间、细胞与基质间的相互作用。3D培养是将细胞培植在一定的细胞外基质(ECM)中，ECM蛋白充当生长支架，使得细胞能够分化产生一定的三维组织特异性结构，所创建的细胞生长环境，则最大程度地模拟体内环境。3D培养技术主要有五种方法：(a)悬滴法；(b)旋转式系统；(c)搅拌基准方法；(d)基质和支架；(e)微流控系统[1]。国内外研究者主要运用的是基质蛋白(Matrigel)作为支架进行3D培养。Matrigel是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出的基底膜基质，其主要成分有层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等，在4℃以下呈液态，能轻松地与细胞混合，而在10℃以上，Matrigel则形成胶状。Matrigel与细胞聚合形成三维结构，能模拟体内细胞基底膜的结构、生物学特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，广泛用于对细胞之间的联系、细胞形态、迁移、侵染和基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将孔板于37℃下预热；(2)将10代以前的猪乳腺上皮细胞用胰蛋白酶消化成单细胞后离心，弃去上清，保留沉淀；(3)将沉淀用Matrigel与Advanced DMEM/F12完全培养基按照体积比1:1于0～10℃配制的混合溶液重悬，并调整猪乳腺上皮细胞浓度为1×104～5×104cell/ml；(4)按照30‑40ul每滴的量将重悬液滴入孔板，将孔板倒置后于37℃孵育30～40min使其形成凝胶；(5)在孔板中加入Advanced DMEM/F12完全培养基继续培养2‑3天，每隔一天更换一次Advanced DMEM/F12完...

【技术特征摘要】
1.一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将孔板于37℃下预热；(2)将10代以前的猪乳腺上皮细胞用胰蛋白酶消化成单细胞后离心，弃去上清，保留沉淀；(3)将沉淀用Matrigel与AdvancedDMEM/F12完全培养基按照体积比1:1于0～10℃配制的混合溶液重悬，并调整猪乳腺上皮细胞浓度为1×104～5×104cell/ml；(4)按照30-40ul每滴的量将重悬液滴入孔板，将孔板倒置后于37℃孵育30～40min使其形成凝胶；(5)在孔板中加入AdvancedDMEM/F12完全培养基继续培养2-3天，每隔一天更换一次AdvancedDMEM/F12完全培养基。2.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖昊，胡胜兰，王丽，杨雪芬，高开国，蒋宗勇，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物科学研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44