在ADSCs为基础的组织工程胆管单元构建中诱导胆管上皮细胞分化的方法技术

本发明专利技术公开了一种在ADSCs为基础的组织工程胆管单元构建中诱导胆管上皮细胞分化的方法，包括以下步骤：A、从目标哺乳动物获取脂肪组织；B、获取原代细胞并进行传代培养，获得第三代ADSCs；对第三代ADSCs的表面标志物进行鉴定；C、制备聚乳酸块状支架，将第三代ADSCs制成细胞悬液后缓慢滴加覆盖在聚乳酸块状支架材料上共培养；D、将被覆ADSCs的聚乳酸块状支架移植到所述目标哺乳动物腹腔大网膜内；E、注射EGF和HGF诱导培养分化；F、诱导培养分化1～10周后将支架取出，获得所述目标哺乳动物的胆管上皮细胞。本发明专利技术的优点是：成功实现了胆管上皮细胞体外和体内联合培养，该方法具有稳定性强，细胞培育周期短，培育成本低，降低胆管损伤处炎症等优点。

Differentiation of bile duct epithelial cells in ADSCs-based tissue engineering bile duct cell construction

The invention discloses a method for inducing the differentiation of bile duct epithelial cells in the construction of tissue engineering bile duct unit based on ADSCs, which includes the following steps: A. Obtaining adipose tissue from target mammals; B. Obtaining primary cells and subculturing them to obtain the third generation ADSCs; identifying the surface markers of the third generation ADSCs; C. Preparing polylactic acid block scaffolds, and the third generation ADSCs. After ADSCs were made into cell suspension, the ADSCs were slowly dripped and covered with polylactic acid massive scaffolds for co-culture; D. The ADSCs covered polylactic acid massive scaffolds were transplanted into the peritoneal omentum of the target mammals; E. EGF and HGF were injected to induce culture and differentiation; F. After 1-10 weeks of induction, the scaffolds were removed and the target mammalian bile duct epithelial cells were obtained. The method has the advantages of high stability, short cell culture cycle, low cost and low inflammation at bile duct injury site.

【技术实现步骤摘要】
在ADSCs为基础的组织工程胆管单元构建中诱导胆管上皮细胞分化的方法
本专利技术涉及一种组织工程技术，尤其是一种肝外胆管单元组织工程造模技术。
技术介绍
与骨髓相似，脂肪组织也存在多能干细胞，称为脂肪来源的干细胞(adipose-derivedstemcells，ADSCs)。ADSCs能够分化成软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞和神经细胞等多种细胞，并且在组织工程中应用广泛。相对于其它干细胞，ADSCs作为组织工程的细胞来源有很多优势，如自体治疗时，从病人获取ADSCs创伤小，且自体ADSCs通常不存在明显的移植排斥问题。此外，由于ADSCs易大量获得，且体外扩增迅速，因而很容易达到临床需要的细胞数量。肝外胆管是肝脏产生的胆汁流向肠道的唯一通道，肝外胆管如果受损伤就会不同程度的引起肝脏产生的胆汁流向肠道受阻，进而引起胆管炎、肝功能障碍，重者甚至危及生命。针对胆道损伤的研究很多，用于修复的方法也较多，现如今胆管损伤修复的常用方法有局部修补、自体组织修补、端端吻合、胆肠吻合、介入治疗等，对于严重胆道损伤修复效果仍不十分满意、术后并发症也较多。修复材料在胆道损伤中的作用也至关重要，组本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.在ADSCs为基础的组织工程胆管单元构建中诱导胆管上皮细胞分化的方法，包括以下步骤：A、从目标哺乳动物获取脂肪组织；B、获取原代细胞并进行传代培养，获得第三代ADSCs；对第三代ADSCs的表面标志物进行鉴定；C、制备多个大小不同的聚乳酸块状支架，多个聚乳酸块状支架的尺寸分布范围根据目标哺乳动物腹腔大网膜尺寸范围进行设计，将第三代ADSCs制成细胞悬液后缓慢滴加覆盖在聚乳酸块状支架材料上，得到被覆ADSCs的聚乳酸块状支架，将所述被覆ADSCs的聚乳酸块状支架共培养3～4天；D、根据所述目标哺乳动物腹腔大网膜尺寸从共培养后的被覆ADSCs的聚乳酸块状支架中选择大小合适的支架移植到所述目标哺...

【技术特征摘要】
1.在ADSCs为基础的组织工程胆管单元构建中诱导胆管上皮细胞分化的方法，包括以下步骤：A、从目标哺乳动物获取脂肪组织；B、获取原代细胞并进行传代培养，获得第三代ADSCs；对第三代ADSCs的表面标志物进行鉴定；C、制备多个大小不同的聚乳酸块状支架，多个聚乳酸块状支架的尺寸分布范围根据目标哺乳动物腹腔大网膜尺寸范围进行设计，将第三代ADSCs制成细胞悬液后缓慢滴加覆盖在聚乳酸块状支架材料上，得到被覆ADSCs的聚乳酸块状支架，将所述被覆ADSCs的聚乳酸块状支架共培养3～4天；D、根据所述目标哺乳动物腹腔大网膜尺寸从共培养后的被覆ADSCs的聚乳酸块状支架中选择大小合适的支架移植到所述目标哺乳动物腹腔大网膜内；E、定期给予所述目标哺乳动物腹腔内注射EGF和HGF诱导培养分化；F、诱导培养分化1～10周后将支架取出，获得所述目标哺乳动物的胆管上皮细胞。2.根据权利要求1所述的在ADSCs为基础的组织工程胆管单元构建中诱导胆管上皮细胞分化的方法，其特征在于：所述ADSCs的表面标志物为CK19和/或CK7。3.根据权利要求1所述的在ADSCs为基础的组织工程胆管单元构建中诱导胆管上皮细胞分化的方法，其特征在于：所述聚乳酸块状支架由聚乳酸粉通过3D打印机制备。4.根据权利要求1所述的在ADSCs为基础的组织工程胆管单元构建中诱导胆管上皮细胞分化的方法，其特征在于：步骤B中通过酶原消化并差速贴壁法获取原代细胞。5.根据权利要求1所述的在ADSCs为基础的组织工程胆管单元构建中诱导胆管上皮细胞分化的方法，其特征在于：步骤B中采用流式细胞仪对ADSCs的表面标志物进行鉴定。6.根据权利要求1所述的在ADSCs为基础的组...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏松，李波，胡小东，方程，淦宇，
申请(专利权)人：西南医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：四川,51