一种人工毛乳头样细胞的获取方法技术

本发明专利技术公开了一种人工毛乳头(dermal papilla,DP)样细胞的获取方法，包括以下步骤：1)配制海藻酸钠和D‑甘露醇混合溶液，过滤除菌；2)提取人真皮成纤维细胞并体外大量培养；3)经静电喷雾法得到包裹人真皮成纤维细胞的海藻酸钠微球；4)对海藻酸钠微球处理得到APA微球；5)APA微球体外培养将人真皮成纤维细胞诱导为人毛乳头样细胞。本发明专利技术采用海藻酸钠微球包裹人真皮成纤维细胞以模拟DP细胞在人体内聚集生长的特性，通过该方法使人真皮成纤维细胞向人毛乳头细胞方向发生转分化，得到大量具有诱导毛发生成能力的人毛乳头样细胞，有效解决了人毛乳头细胞难获取并且在体外培养易丢失生物活性的问题。

A method for obtaining artificial dermal papilla-like cells

The invention discloses a method for obtaining dermal papilla (DP) like cells, which comprises the following steps: 1) preparing a mixed solution of sodium alginate and D mannitol to filter and sterilize; 2) extracting human dermal fibroblasts and culturing them in large quantities in vitro; 3) obtaining sodium alginate microspheres encapsulating human dermal fibroblasts by electrostatic spray method; 4) treating sodium alginate microspheres to obtain APA; APA microspheres were cultured in vitro to induce human dermal fibroblasts into human dermal papilla-like cells. The present invention uses sodium alginate microspheres to encapsulate human dermal fibroblasts to simulate the aggregation and growth characteristics of DP cells in human body. By this method, human dermal fibroblasts are transdifferentiated into human dermal papilla cells, and a large number of human dermal papilla-like cells with the ability to induce hair formation are obtained, which effectively solves the problem that human dermal papilla cells are difficult to obtain and easy to lose in vitro culture. The question of the activity of the substance.

【技术实现步骤摘要】
一种人工毛乳头样细胞的获取方法
本专利技术属于生物材料和再生医学领域，具体涉及一种人工毛乳头样细胞的获取方法。
技术介绍
毛发作为皮肤的附属器官，在控制体温和保护皮肤等方面起着重要作用。疾病和药物治疗都会导致脱发，虽然脱发不会直接威胁人类的生命，但会使患者的心理和生活质量造成一定的困扰。目前，最常见的脱发原因是雄激素源性脱发，这类患者的毛囊干细胞早期并未受到伤害，而真皮毛乳头(dermalpapilla，DP)细胞的信号传导却受到了干扰，从而无法维持毛发的生长。因此，DP细胞是治疗脱发的关键性靶标点。目前对于脱发的治疗目前主要采用药物治疗和自体毛囊移植两种方法。市场上获得治疗脱发的药物虽然具有一定的效果，但是并不能促进新的毛囊的形成，故治标不治本。自体毛囊移植往往需要大量具有毛囊再生功能的DP细胞。一方面在一些严重的脱发患者中供移植的自体人头皮毛乳头细胞来源十分有限，另一方面这些移植的细胞不能扩增，故临床上从患者处获得足够量的进行手术移植的DP细胞的可行性不大，亟需找到快速获取大量具有毛囊再生功能的DP细胞的方法。毛囊的形成源于表皮和真皮的相互作用，其中，DP细胞在诱导毛囊再生和毛发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人工毛乳头样细胞的获取方法，包括以下步骤：1)提取并体外培养人真皮成纤维细胞，选取10代内的人真皮成纤维细胞；2)按质量体积比分别配制0.8％‑2％g/ml的海藻酸钠溶液和5％‑15％g/ml的D‑甘露醇溶液，在室温下充分混合溶解，然后过滤除菌，得到无菌的海藻酸钠‑甘露醇水溶液，以下简称海藻酸钠溶液；3)将人真皮成纤维细胞悬浮于2)配置好的海藻酸钠溶液中，形成细胞悬浮液，使每毫升悬浮液中至少含有2×106个人真皮成纤维细胞；4)采用静电喷雾的方法将3)中的细胞悬浮液打散形成微滴，滴入质量体积浓度为1‑2％g/ml的氯化钙溶液中获得稳定包裹人真皮成纤维细胞的海藻酸钠水凝胶微球；控制细胞悬...

【技术特征摘要】
1.一种人工毛乳头样细胞的获取方法，包括以下步骤：1)提取并体外培养人真皮成纤维细胞，选取10代内的人真皮成纤维细胞；2)按质量体积比分别配制0.8％-2％g/ml的海藻酸钠溶液和5％-15％g/ml的D-甘露醇溶液，在室温下充分混合溶解，然后过滤除菌，得到无菌的海藻酸钠-甘露醇水溶液，以下简称海藻酸钠溶液；3)将人真皮成纤维细胞悬浮于2)配置好的海藻酸钠溶液中，形成细胞悬浮液，使每毫升悬浮液中至少含有2×106个人真皮成纤维细胞；4)采用静电喷雾的方法将3)中的细胞悬浮液打散形成微滴，滴入质量体积浓度为1-2％g/ml的氯化钙溶液中获得稳定包裹人真皮成纤维细胞的海藻酸钠水凝胶微球；控制细胞悬浮液推进泵的流速为1-3ml/h，控制静电发生装置的电压为5-6kV，控制静电喷雾的时长在20min以内；5)将4)所述的海藻酸钠微球依次用0.4-0.6mg/ml多聚赖氨酸在25-37℃的条件下处理10-15min，0.08％-0.2％g/ml海藻酸钠溶液处理4-10min，5-6mM柠檬酸钠溶液处理3-5min，最终得到海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠复合微球，以下简称APA微球；6)将APA微球在DMEM培养基中培养5-16天，人成纤维细胞逐渐被诱导为人工毛乳头样细胞。2.根据权利要求1所述人工人毛乳头样细胞的获取方法，其特征是，步骤2)中使用0.22μm孔径的除菌过滤器和无菌注射器进行过滤除菌。3.根据权利要求1所述人工人毛乳头样细胞的获取方法，其特征是，步骤2)中按质量体积比配置0.8％-2％g/ml的海藻酸钠溶液和5％-15％g/ml的D-甘露醇溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂和民，谢贝，雷蕾，丁平慧，
申请(专利权)人：湖南大学，湖南中南大学湘雅口腔医院，
类型：发明
国别省市：湖南,43