源于草酸青霉的黑麦酮酸I及抗人子宫颈癌药物的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种源于草酸青霉的黑麦酮酸I及抗人子宫颈癌药物的应用。该化合物具有抑制人子宫颈癌细胞增殖作用。其结构式为：

Rye Ketone I from Penicillium Oxalate and the Application of Anti-cervical Cancer Drugs

The invention relates to a ryeglutonic acid I derived from Penicillium oxalate and the application of an anti-human cervical cancer drug. The compound can inhibit the proliferation of human cervical cancer cells. Its structure is as follows:

【技术实现步骤摘要】
源于草酸青霉的黑麦酮酸I及抗人子宫颈癌药物的应用
本专利技术涉及源于草酸青霉的黑麦酮酸I及抗人子宫颈癌药物的应用，属于医药生物领域。
技术介绍
黑麦酮酸类化合物（Secalonicacids）属于麦角色素类（Ergochrome）次生代谢产物，为氧杂蒽酮二聚物。自从Stoll等在1952年从真菌中分离得到黑麦酮酸A（SecalonicacidA）之后，该系列的化合物黑麦酮酸（A,B,C,D,E,F,G）就不断地被发现及研究。黑麦酮酸类化合物具有各种不同的生理活性，以黑麦酮酸D（SecalonicacidD,SAD）为例，5mg/ml的SAD加入到生理盐水中,在5-20mg范围内，即可以治疗早期膀胱癌，50-100mg范围内，对更严重的膀胱癌有疗效并且没有副作用发生。经研究发现，一些海洋真菌能够在次级代谢过程中产生结构新颖、活性好的黑麦酮酸类化合物，具有很好的药用和产业化前景。本专利技术人研究得知，草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，(已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址:武汉武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013714)的发酵产物的粗提取物有很好的细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行研究。研究发现所示黑麦酮酸类化合物具有抗人子宫颈癌活性，目前尚未见该化合物对人子宫颈癌细胞的增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供源于草酸青霉的黑麦酮酸I及抗人子宫颈癌药物的应用。该化合物具有抑制子宫颈癌细胞增殖作用，具有抗人子宫颈癌活性。其结构式为：。该化合物的制备方法，是通过发酵培养草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物。具体步骤如下：1发酵生产培养微生物的常规方法，取草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6接种到PDA固体斜面培养基上在28℃培养箱中培养2至3天，然后接种到培养液中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液；所述培养液组成：每升水含甘露醇20.0g、酵母膏3.0g、麦芽糖20.0g、味精10.0g、葡萄糖10.0g、KH2PO40.5g、MgSO4·7H2O0.3g、NaCl15.0g；2浸膏的获得用纱布将菌丝体和发酵液分离。菌丝体用丙酮溶液（含20%~30%水）连续超声破壁3次，过滤去除残渣，得到菌丝体的含丙酮和水的粗提物。减压浓缩去除丙酮，得到粗体物的水溶液，再以体积比1:2加入乙酸乙酯萃取3次，得乙酸乙酯粗提液，减压浓缩至近干得菌丝体浸膏36.5g。3化合物的分离精制菌丝体浸膏通过100-200目硅胶拌样，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为梯度洗脱液，进行减压硅胶色谱柱层析。经过简单的薄层色谱分析，合并，分离成组分A-E。组分D(5.9g)(二氯甲烷：甲醇v/v=100:1的洗脱物)以二氯甲烷：甲醇为梯度洗脱剂，进行加压柱硅胶色谱层析，经过薄层色谱分析后合并得到五个亚组分D1-D5。组分D2(1.2g)以三氯甲烷：甲醇=1:2为梯度洗脱剂，进行凝胶柱层析（SephadexLH-20），经过薄层色谱分析后合并得到四个亚组分D2-1~D2-4。D2的亚组分D2-3(212mg)通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250mm，5μm)：分离流速为5mL/min，流动相为55%乙腈含0.1%TFA，得到所示化合物(2.7mg，tR13.8min)。所述草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址:武汉武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013714。本专利技术还保护了所述的化合物在制备抑制人子宫颈癌细胞增殖药物中的应用，及该化合物在制备抗人子宫颈癌药物中的应用。本专利技术的显著优点：研究所示该黑麦酮酸化合物未见报道且具有显著的抑制人子宫颈癌细胞增殖活性，目前尚未见该化合物对人子宫颈癌细胞增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。附图说明图1SecalonicacidI主要的COSY，HMBC和NOE信号。具体实施方式在如下的实施例中所指的化合物的化学结构：实施例1该化合物的发酵生产及分离精制1发酵生产生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6(已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址:武汉武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013714)适量，接种到PDA固体斜面培养基上在28℃培养箱中培养2至3天。取斜面培养2至3天的草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6适量，接种到装有400mL培养液[培养液组成(克/升)：甘露醇20.0，酵母膏3.0，麦芽糖20.0，味精10.0，葡萄糖10.0，KH2PO40.5，MgSO4·7H2O0.3，NaCl15.0定容]的1000mL锥形瓶中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液。2浸膏的获得用纱布将菌丝体和发酵液分离。菌丝体用丙酮溶液（含20%~30%水）连续超声破壁3次，过滤去除残渣，得到菌丝体的含丙酮和水的粗提物。减压浓缩去除丙酮，得到粗体物的水溶液，再以体积比1:2加入乙酸乙酯萃取3次，得乙酸乙酯粗提液，减压浓缩至近干得菌丝体浸膏36.5g。3化合物的分离精制菌丝体浸膏通过100-200目硅胶拌样，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为梯度洗脱液，进行减压硅胶色谱柱层析。经过简单的薄层色谱分析，合并，分离成组分A-E。组分D(5.9g)(二氯甲烷：甲醇v/v=100:1的洗脱物)以二氯甲烷：甲醇为梯度洗脱剂，进行加压柱硅胶色谱层析，经过薄层色谱分析后合并得到五个亚组分D1-D5。组分D2(1.2g)以三氯甲烷：甲醇=1:2为梯度洗脱剂，进行凝胶柱层析（SephadexLH-20），经过薄层色谱分析后合并得到四个亚组分D2-1~D2-4。D2的亚组分D2-3(212mg)通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250mm，5μm)：分离流速为5mL/min，流动相为55%乙腈含0.1%TFA，得到所示化合物(2.7mg，tR13.8min)。化合物常温下为黄色油状物，高分辨电喷雾质谱HRESI-MS在m/z：659.1377处给出分子离子峰[M+Na]+（calcdforC32H28NaO14，659.1377），提示分子量为636，结合波谱信息推测分子式为C32H28O14。1H和13C-NMR数据见表1，主要的COSY，HMBC和NOE信号见图1。表1化合物的1H和13C-NMR数据(500MHz1Hand126MHz13C,inDMSO-d6)实施例2体外抗肿瘤活性的测试1实验样品及实验方法被测样品溶液的配制测试样品为上述实施1中分离精制的化合物纯品。精密称取适量样品，用甲醇配制成所需浓度的溶液，供测活性。细胞系及细胞的继代培养采用肿瘤细胞系，肿瘤细胞用含10%FBS的DMEM培养基，在37℃于通入5%CO2的培养箱中继代培养。细胞增殖抑制活性测试方法四氮唑盐（MTT）法取对数生长期的肿瘤细胞，将细胞密度调至每毫升1×105个细胞，按每孔2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.化合物

【技术特征摘要】
1.化合物。2.如权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于：发酵培养草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物，所述草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈立，王思远，夏其文，刘沁颖，毕延雪，伍久林，张其清，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：福建,35