一种大规模制备银杏叶来源的聚酮类化合物的方法技术

本发明专利技术涉及一种大规模制备银杏叶来源的聚酮类化合物的方法，包括如下步骤：(1)将干燥的银杏叶粉碎与绿色木霉混合均匀，加入体积分数为20％的乙醇溶液，调pH至5.0‑5.5，于37℃下，摇床培养48小时，摇床转速60r/min，过滤得发酵液、经减压浓缩得发酵物；(2)将步骤(1)得到的发酵物先经减压硅胶柱层析，采用石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，将洗脱梯度为70:30～60:40的洗脱液合并，浓缩得组分A；(3)将步骤(2)得到的组分A先经正相硅胶柱层析，再经Sephadex LH‑20凝胶柱层析，再经反相硅胶柱层析，洗脱剂为MeOH∶H2O＝60∶40，得式I化合物。

【技术实现步骤摘要】
一种大规模制备银杏叶来源的聚酮类化合物的方法
本专利技术属于药用植物提取领域，具体涉及一种大规模制备银杏叶来源的聚酮类化合物的方法。
技术介绍
银杏树又称白果树，目前主要分布于山东、江苏、广西、安徽、浙江、湖北等地，银杏的根、果、叶均可作为药用，也可食用。其中银杏叶在药用方面应用广泛，表现出多种药理活性，如抗氧化、扩张血管、改善记忆等，临床则被应用于质量肾病、冠心病、心绞痛、糖尿病等。银杏叶中主要的活性成分为银杏黄酮和萜类内脂。专利技术人首次从银杏叶中分离得到一种聚酮类化合物，但是由于得到的聚酮化合物的量少，极大地限制了其药理活性的进一步研究，因此，本专利技术提供一种利用绿色木霉与银杏叶发酵后，能够大量获得该聚酮类化合物的方法。
技术实现思路
本专利技术提供一种银杏叶来源的聚酮类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述聚酮类化合物具有式I所示结构：本专利技术提供一种制备上述银杏叶来源的聚酮类化合物的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将干燥的银杏叶粉碎后，用体积分数为60％的乙醇溶液加热至回流温度提取5h后，过滤、滤液经减压浓缩得粗提物；(2)将步骤(1)得到的粗提物先经减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集三个柱体积，将洗脱梯度为70:30～60:40的洗脱液合并，浓缩得组分A；(3)将步骤(2)得到的组分A先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝2.5:1的混合溶剂，洗脱5个柱体积，合并第3-5柱体积的洗脱液，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH＝1:1的混合溶剂，洗脱4个柱体积，合并第3-4个柱体积的洗脱液，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备得式I化合物。上述制备方法，步骤(1)中银杏叶粉碎后的粒度优选为20-80目，所述乙醇溶液的用量为每千克银杏叶(干重)使用3L乙醇溶液；步骤(2)所述减压正相硅胶柱层析使用的硅胶优选100-200目硅胶；步骤(3)中所述正相硅胶柱层析使用的硅胶优选200-300目硅胶；所述高效液相色谱HPLC制备的色谱条件为：色谱柱为AgilentC18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝60∶40。本专利技术提供一种大规模制备上述银杏叶来源的聚酮类化合物的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将干燥的银杏叶粉碎与绿色木霉混合均匀，加入体积分数为20％的乙醇溶液，调pH至5.0-5.5，于37℃下，摇床培养48小时，摇床转速60r/min，过滤得发酵液、经减压浓缩得发酵物；(2)将步骤(1)得到的发酵物先经减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集三个柱体积，将洗脱梯度为70:30～60:40的洗脱液合并，浓缩得组分A；(3)将步骤(2)得到的组分A先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝2.5:1的混合溶剂，洗脱5个柱体积，合并第3-5柱体积的洗脱液，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH＝1:1的混合溶剂，洗脱4个柱体积，合并第3-4个柱体积的洗脱液，减压浓缩后再经反相硅胶柱层析，洗脱剂为MeOH∶H2O＝60∶40，得式I化合物。上述制备方法，步骤(1)中银杏叶粉碎后的粒度优选为20-80目，所述乙醇溶液的用量为每千克银杏叶(干重)使用3L乙醇溶液，银杏叶(干重)与绿色木霉的质量比为8：1；步骤(2)所述减压正相硅胶柱层析使用的硅胶优选100-200目硅胶；步骤(3)中所述正相硅胶柱层析使用的硅胶优选200-300目硅胶。本专利技术色谱分离中所有涉及洗脱剂或流动相比例均为体积比。本专利技术的另一实施方案提供上述银杏叶来源的聚酮类化合物(式I化合物)或其药学上可接受的盐在制备抗病毒药物中的应用。本专利技术的另一实施方案提供上述银杏叶来源的聚酮类化合物(式I化合物)或其药学上可接受的盐在制备抗EV71药物中的应用。本专利技术的另一实施方案提供上述银杏叶来源的聚酮类化合物(式I化合物)或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗由EV71感染引起的疾病的药物中的应用。本专利技术所述的绿色木霉可以是绿色木霉粉或绿色木霉孢子粉，孢子数≥20亿/克；可用过商业购买获得。具体实施方式为了便于对本专利技术的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好地理解专利技术而并非用来限定本专利技术的范围或实施原则，本专利技术的实施方式不限于以下内容。实施例1(1)将干燥的银杏叶(2.0kg)粉碎后(20-80目)，用体积分数为60％的乙醇溶液(6.0L)加热至回流温度提取5h后，过滤、滤液经减压浓缩得粗提物(约220g)；(2)将步骤(1)得到的粗提物先经减压硅胶柱层析(100-200目硅胶)，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集三个柱体积，将洗脱梯度为70:30～60:40的洗脱液合并，浓缩得组分A(6.25g)；(3)将步骤(2)得到的组分A先经正相硅胶柱层析(200-300目硅胶)，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝2.5:1的混合溶剂，洗脱5个柱体积，合并第3-5柱体积的洗脱液，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH＝1:1的混合溶剂，洗脱4个柱体积，合并第3-4个柱体积的洗脱液，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备(色谱柱为AgilentC18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝60∶40)即得式I化合物(18mg)。式I化合物：淡黄色粉末，1HNMR(500MHz,acetone-d6)δ:13.77(1H,brs,8-OH),12.07(1H,brs,1′-OH),11.67(1H,brs,1-OH),7.50(1H,d,J＝8.5Hz,H-3),7.48(1H,d,J＝8.5Hz,H-3′),6.57(2H,d,J＝8.5Hz,H-4,4′),4.08(1H,d,J＝1.5Hz,H-5′),3.96(1H,d,J＝10.5Hz,H-5),3.69(3H,s,H-13),3.65(6H,d,H-13′,14′),3.48(1H,d,J＝17.5Hz,H1-8a′),3.18(1H,d,J＝17.5Hz,H2-8a′),2.73(1H,m,H-6),2.59(1H,m,H-6′),2.47(2H,m,H-7),2.36(2H,m,H-7′),1.15(3H,d,J＝5.5Hz,H-11),1.07(3H,d,J＝6.5Hz,H-11′)；13CNMR(125MHz,acetone-d6)δ:197.9(C,C-9′),188.6(C,C-9),178.8本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种银杏叶来源的聚酮类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述聚酮类化合物具有式I所示结构：

【技术特征摘要】
1.一种银杏叶来源的聚酮类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述聚酮类化合物具有式I所示结构：2.一种大规模制备权利要求1所述的银杏叶来源的聚酮类化合物的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将干燥的银杏叶粉碎与绿色木霉混合均匀，加入体积分数为20％的乙醇溶液，调pH至5.0-5.5，于37℃下，摇床培养48小时，摇床转速60r/min，过滤得发酵液、经减压浓缩得发酵物；(2)将步骤(1)得到的发酵物先经减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集三个柱体积，将洗脱梯度为70:30～60:40的洗脱液合并，浓缩得组分A；(3)将步骤(2)得到的组分A先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝2.5:1的混合溶剂，洗脱5个柱体积，合并第3-5柱体积的洗脱液，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3...

【专利技术属性】
技术研发人员：范圣露，陈秀清，
申请(专利权)人：扬州工业职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32