一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法技术

本发明专利技术涉及一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法，属于细胞生物学技术和再生医学领域，取外周血多潜能间充质基质细胞进行原代培养，得到第三代细胞；将第三代传代外周血多潜能间充质基质细胞与人关节软骨细胞按共在诱导培养基中培养，本发明专利技术采用的一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法，外周血多潜能干细胞和软骨细胞共培养，两种细胞相互促进增殖和分化，可减少软骨细胞增殖传代次数并节省软骨细胞数量，提高了分化率，对建立种子细胞源是提供一种高效的方法，也为扩大软骨组织工程的细胞源提供了一种新的医学实验根据。

A Culture Method for Increasing the Differentiation of Peripheral Blood Multipotent Cells into Chondrocytes

The present invention relates to a culture method for improving the differentiation of peripheral blood multipotential cells into chondrocyte, which belongs to the field of cell biology and regenerative medicine. Peripheral blood multipotential mesenchymal stromal cells are cultured in primary culture and the third generation cells are obtained. The third generation of peripheral blood multipotential mesenchymal stromal cells and human articular chondrocyte are cultured in co-induction medium. The invention adopts a culture method to improve the differentiation of peripheral blood pluripotent cells into chondrocyte. The co-culture of peripheral blood pluripotent stem cells and chondrocyte promotes the proliferation and differentiation of the two kinds of cells, which can reduce the number of chondrocyte proliferation and passage, save the number of chondrocyte, and improve the differentiation rate. It is an efficient method for establishing seed cell source and also for expanding soft tissue. The cell source of bone tissue engineering provides a new basis for medical experiments.

【技术实现步骤摘要】
一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法
本专利技术涉及一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法，属于细胞生物学技术和再生医学领域。
技术介绍
软骨组织(Cartilagetissue)是一种富含蛋白多糖、胶原和透明质酸等物质的组织，由软骨细胞和软骨基质构成，在体内主要起支撑和减少摩擦的作用。但软骨组织缺乏血管，因此，软骨组织一旦受到损伤便很难修复，即便是微小的软骨组织损伤，也很难自然修复。目前，临床上用于软骨组织损伤修复的方法主要有软骨和软骨下骨去除、微骨折和软骨下骨钻孔、自体骨软骨移植和同种异体骨软骨移植、软骨或骨膜移植等。这些方法在一定程度上均能够对软骨组织损伤进行修复，但均存在明显缺点，如微骨折和软骨下骨钻孔方法能够使干细胞到达损伤部位，但因局部环境和机械应力不同，干细胞很难向软骨细胞分化；自体骨软骨移植安全、有效，但会给患者带来新的创伤；异体骨软骨移植避免了自体骨软骨移植给患者带来的新的创伤，但存在供体来源限制、免疫排斥反应和疾病传播风险等。目前研究发现采用外周血多潜能细胞诱导培养软骨细胞是一种非常具有潜力的技术，但是研发发现，外周血多潜能细胞的分离培养条件本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取外周血多潜能间充质基质细胞进行原代培养，原代培养采用的培养基，包括，人类间充质干细胞无血清培养基、胎牛血清、氨苄青霉素、链霉素、成纤维细胞生长因子、阿米卡星，待细胞贴壁后，用胰蛋白酶消化离心，得到原代外周血多潜能间充质基质细胞；(2)外周血多潜能间充质基质细胞用胰蛋白酶消化处理后，得到的原代细胞置于新的培养基中进行传代培养，待细胞长至80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化处理，然后离心分离，得到第二代细胞；(3)第二代细胞置于新的培养基中进行传代培养，待细胞长至80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化处理，然后离...

【技术特征摘要】
1.一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取外周血多潜能间充质基质细胞进行原代培养，原代培养采用的培养基，包括，人类间充质干细胞无血清培养基、胎牛血清、氨苄青霉素、链霉素、成纤维细胞生长因子、阿米卡星，待细胞贴壁后，用胰蛋白酶消化离心，得到原代外周血多潜能间充质基质细胞；(2)外周血多潜能间充质基质细胞用胰蛋白酶消化处理后，得到的原代细胞置于新的培养基中进行传代培养，待细胞长至80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化处理，然后离心分离，得到第二代细胞；(3)第二代细胞置于新的培养基中进行传代培养，待细胞长至80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化处理，然后离心分离得到第三代传代外周血多潜能间充质基质细胞；(4)将所述的第三代传代外周血多潜能间充质基质细胞与人关节软骨细胞共在诱导培养基中培养，诱导分化为软骨细胞。2.根据权利要求1所述的一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述外周血多潜能间充质基质细胞，通过以下方法获得，外周血加入枸橼酸钠抗凝液，然后将外周血加入到质量浓度0.9％氯化钠注射液中，再加入质量浓度6％羟乙基淀粉，摇匀后静置；待分层后吸取上层细胞液，分离得到浓缩液，浓缩液用生理盐水稀释，然后铺在由聚蔗糖和泛影葡胺配制成的...

【专利技术属性】
技术研发人员：马亚东，黄宗堂，曹娜，
申请(专利权)人：丰泽康生物医药深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44