一种用于湿疹治疗的外用药物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及干细胞制剂技术领域，特别涉及一种用于湿疹治疗的外用药物及其制备方法和应用，每10ml中包括以下物质成分：间充质干细胞裂解液5‑10×10

An external drug for eczema treatment and its preparation and Application

The invention relates to the technical field of stem cell preparation, in particular to an external drug for eczema treatment, a preparation method and application thereof, each 10ml of which includes the following substance components: mesenchymal stem cell lysate 5 \u2011 10 \u00d7 10

【技术实现步骤摘要】
一种用于湿疹治疗的外用药物及其制备方法和应用
本专利技术涉及干细胞制剂
，特别涉及一种用于湿疹治疗的外用药物及其制备方法和应用。
技术介绍
湿疹是皮肤科最常见的由多种内外因素引起的具明显渗出倾向的皮肤炎症反应，在急性阶段以丘疱疹为主，慢性阶段以表皮肥厚和苔藓样变为主，瘙痒剧烈，易复发，外在物理性、化学性刺激以及精神因素均可能与本病的发生有关。湿疹发病过程中免疫机制起着很重要的作用，常伴有细胞因子、嗜酸性粒细胞和肥大细胞的参与；湿疹的发生可能与I型速发型和IV型迟发型变态反应有关，湿疹患者的细胞免疫功能失调，体液免疫也有显著异常；湿疹的发生还与组胺等介质的参与有关。根据皮损状况不同应用不同外用药物进行治疗，口服药物常用抗组胺药、糖皮质激素及非特异性抗过敏药物，但长期使用会出现一系列的副作用，所以目前临床上尚缺乏安全有效、针对性强的湿疹治疗措施。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术提供一种生物制剂，用于湿疹治疗，使用安全，并不会产生副作用。为解决上述的技术问题，具体技术方案：一种用于湿疹治疗的外用药物，每10ml中包括以下物质成分：其中，所述溶媒为生理盐水、复方电解质注射液或葡萄糖注射液中的一种。该用于湿疹治疗的外用药物的制备方法，包括以下步骤：将间充质干细胞裂解液用溶媒重悬后形成细胞悬液，在细胞悬液中再依次加入胸腺素beta4和转化生长因子-β，混合均匀。具体的，所述的间充质干细胞裂解液的制备方法，包括以下步骤：(1)从哺乳动物的脂肪组织、骨髓组织、皮肤组织中分别分离提纯出脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、皮肤间充质干细胞；将脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、皮肤间充质干细胞按1～2∶2～3∶1～2的比例混合，组成第一代混合细胞；(2)将第一代混合细胞以密度为10000-12000个/cm2接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO2浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第二代混合细胞；(2)将第二代混合细胞以密度为10000-12000个/cm2接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO2浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第三代混合细胞；(3)将第三代混合细胞以密度为10000-12000个/cm2接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO2浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第四代混合细胞，收集细胞的同时收集培养第四代上清液，将第四代上清液通过0.22μm过滤，并置于4℃的温度环境中保存备用；(5)将第四代混合细胞以密度为10000-12000个/cm2接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO2浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第五代混合细胞，并将第五代混合细胞以1×108个/mL收集冻存，收集细胞的同时收集培养第五代上清液，将第五代上清液通过0.22μm过滤，并置于4℃的温度环境中保存备用；(6)将第五代混合细胞复苏，加完全培养基制成细胞悬液，细胞浓度调整为2～5×107个/mL，将细胞悬液置于超声破碎容器中，放入0℃低温槽中进行超声破碎，超声破碎细胞后通过0.22μm过滤，去掉细胞碎片和未破碎的细胞，得到干细胞裂解因子，将干细胞裂解因子、第四代上清液、第五代上清液液按1∶1∶1混合，将混合液回温至常温，用碳酸氢钠调节PH值至7.5，再通过0.22μm过滤得到间充质干细胞裂解液，并置于4℃的温度环境中保存。其中，所述的完全培养基为用于间充质干细胞培养的无血清培养基；所述血清按照以下方法获得，将皮肤血放入离心管于4-8℃的环境中静置3小时后离心，取淡黄色上清液于4℃的条件保存备用。进一步的步骤(6)中的超声破碎的条件为，超声功率在300w以下，破碎时每次超声时间不超过3s，每次超声时间间隔不低于8s，超声次数不超过60次；该用于湿疹治疗的外用药物，用于治疗湿疹治。本专利技术提供的一种用于湿疹治疗的外用药物及其制备方法和应用，采用生物技术，利用多种间充质干细胞的配伍，共同完成制剂对皮肤湿疹产生的伤口进行再生修复，可明显改善皮肤愈合并缩短湿疹伤口愈合时间，为湿疹开辟新的途径。具体实施方式为了使本领域相关技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面将结合本专利技术实施方式，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。用于湿疹治疗的外用药物的制备方法，包括以下步骤：将间充质干细胞裂解液用溶媒重悬后形成细胞悬液，在细胞悬液中再依次加入胸腺素beta4和转化生长因子-β，混合均匀。所述的间充质干细胞裂解液的制备方法，包括以下步骤：(1)从哺乳动物的脂肪组织、骨髓组织、皮肤组织中分别分离提纯出脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、皮肤间充质干细胞；本实施例以实验室的哺乳动物为实验对象。从哺乳动物的骨髓组织中分离提纯出脂肪间充质干细胞将实验动物麻醉后取腹股沟皮下脂肪，用酒精浸泡皮下脂肪3min，去除皮下脂肪的毛细血管，然后用PBS清洗3遍，再把脂肪块剪碎，成为0.5-1mm3的碎粒，碎粒放入培养皿中加入I型胶原酶，全面浸泡脂肪碎粒，在37℃的温度环境消化60min，消化后取出放入离心管，离心条件为100g离心10min，去掉上层脂肪和中层液体，留下底部沉淀物。沉淀物加入10mL完全培养基，摇匀再离心，离心条件为每100g离心10min，去上清后再加入完全培养基摇匀，得到细胞悬液；细胞悬液移入培养容器，放入培养箱，培养条件为CO2浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃；24小时后观察细胞情况，待有长梭型细胞贴壁融合度达到20％-30％的时候，进行清洗换液，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次；待细胞融合度达到70％～80％时收集进行传代；按密度8000-10000个/cm2传代培养，待细胞融合度达到80％-90％时收集得到第一代脂肪间充质干细胞。从哺乳动物的骨髓组织中分离提纯出间骨髓充质干细胞的方法为：将实验动物麻醉后取骨髓，放入培养容器中，取1/3量的完全培养基汲取，混合均匀后移入培养容器，放入培养箱预培养30min，再加入2/3量的完全培养基，放入培养箱，培养的条件为，CO2浓度为5％、湿度为90％、温度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于湿疹治疗的外用药物，其特征在于，每10ml中包括以下物质成分：/n间充质干细胞裂解液 5-10×10

【技术特征摘要】
1.一种用于湿疹治疗的外用药物，其特征在于，每10ml中包括以下物质成分：
间充质干细胞裂解液5-10×106个细胞的裂解成分；
胸腺素beta40.1-1.5μg；
转化生长因子-β0.05-1.0μg；
溶媒补足至10ml。


2.根据权利要求1所述的一种用于湿疹治疗的外用药物，其特征在于，所述溶媒为生理盐水、复方电解质注射液或葡萄糖注射液中的一种。


3.根据权利要求1或2所述的一种用于湿疹治疗的外用药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将间充质干细胞裂解液用溶媒重悬后形成细胞悬液，在细胞悬液中再依次加入胸腺素beta4和转化生长因子-β，混合均匀。


4.根据权利要求3所述的一种用于湿疹治疗的外用药物的制备方法，其特征在于，所述的间充质干细胞裂解液的制备方法，包括以下步骤：
(1)从哺乳动物的脂肪组织、骨髓组织、皮肤组织中分别分离提纯出脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、皮肤间充质干细胞；将脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、皮肤间充质干细胞按1～2∶2～3∶1～2的比例混合，组成第一代混合细胞；
(2)将第一代混合细胞以密度为10000-12000个/cm2接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO2浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第二代混合细胞；
(2)将第二代混合细胞以密度为10000-12000个/cm2接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO2浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第三代混合细胞；
(3)将第三代混合细胞以密度为10000-12000个/cm2接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇...

【专利技术属性】
技术研发人员：马亚东，黄宗堂，曹娜，
申请(专利权)人：丰泽康生物医药深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44