腐败梭菌α毒素突变体、表达其的基因、制备方法和腐败梭菌疫苗技术

本发明专利技术提供了一种腐败梭菌α毒素突变体、表达其的基因、制备方法和腐败梭菌疫苗，涉及生物技术领域。该腐败梭菌α毒素突变体包括(a1)‑(a3)中的任意一种。其中，(a1)为将具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的腐败梭菌α毒素第86位氨基酸残基由半胱氨酸突变为亮氨酸，和第189位氨基酸残基由丝氨酸突变为半胱氨酸得到的蛋白质；(a2)为切除(a1)的信号肽得到的蛋白质；(a3)为在(a1)或(a2)所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白中的任意一种，具有毒副作用低，免疫原性好的优点。该腐败梭菌疫苗包含腐败梭菌α毒素突变体或编码其的基因，具有良好的安全性和良好的免疫原性。

Clostridium putrefaciens alpha toxin mutant, gene expression, preparation method and Clostridium putrefaciens vaccine

The invention provides a Clostridium putrefaciens alpha toxin mutant, a gene expressing the mutant, a preparation method and a Clostridium putrefaciens vaccine, which relates to the field of biotechnology. The Clostridium putrefaciens alpha toxin mutant includes any of (a1)(a3). Among them, (a1) the 86 th amino acid residue of Clostridium putrefaciens alpha toxin with amino acid sequence as shown in SEQ ID NO.1 was mutated from cysteine to leucine, and the 189th amino acid residue was mutated from serine to cysteine; (a2) the protein obtained by excision of (a1) signal peptide; (a3) the N and/or C terminal ligation label of the protein shown in (a1) or (a2) Any of the fusion proteins has the advantages of low toxicity and good immunogenicity. The Clostridium putrefaciens vaccine contains a mutant of Clostridium putrefaciens alpha toxin or a gene encoding it. It has good safety and immunogenicity.

【技术实现步骤摘要】
腐败梭菌α毒素突变体、表达其的基因、制备方法和腐败梭菌疫苗
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及腐败梭菌α毒素突变体、表达其的基因、制备方法和腐败梭菌疫苗。
技术介绍
腐败梭菌(Clostridiumseptium)是一种革兰氏阳性厌氧杆菌，可引起动物和人的恶性水肿病、肌肉坏死、气性坏疽及坏死性肠炎等疾病，也是引发羊快疫的病原菌。该菌可分泌α、β和γ等多种外毒素，其中α毒素是其主要致病性毒力因子和免疫保护性抗原。腐败梭菌α毒素是气溶素家族穿孔毒素的一种，是腐败梭菌的主要致死性毒力因子，具有溶血、致死和坏死的作用，此外该毒素还具有良好的免疫原性，由其制备的类毒素可有效抵抗腐败梭菌的感染。腐败梭菌广泛分布于土壤、粪便、灰尘、沼泽及动物的消化道中，易通过被芽孢污染的饲料、饮水和周围环境等途径，经伤口或消化道引起羊、马、牛、猪、犬、猫、鸡和鹿等动物以及人的恶性水肿病、肌肉坏死、气性坏疽以及坏死性肠炎等疾病，发病与动物的年龄、性别及品种无关。其传染途径一般有两种，一种是由于外伤如去势、断尾、分娩、外科手术或注射的过程中没有严格消毒，致使腐败梭菌芽孢污染而引起感染；另外一种经消化道感染，此时多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种腐败梭菌α毒素突变体，其特征在于，包括如下(a1)‑(a3)中的任意一种：(a1)将具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的腐败梭菌α毒素第86位氨基酸残基由半胱氨酸突变为亮氨酸，和第189位氨基酸残基由丝氨酸突变为半胱氨酸得到的蛋白质；(a2)切除(a1)的信号肽得到的蛋白质；(a3)在(a1)或(a2)所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种腐败梭菌α毒素突变体，其特征在于，包括如下(a1)-(a3)中的任意一种：(a1)将具有如SEQIDNO.1所示氨基酸序列的腐败梭菌α毒素第86位氨基酸残基由半胱氨酸突变为亮氨酸，和第189位氨基酸残基由丝氨酸突变为半胱氨酸得到的蛋白质；(a2)切除(a1)的信号肽得到的蛋白质；(a3)在(a1)或(a2)所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白。2.根据权利要求1所述的腐败梭菌α毒素突变体，其特征在于，所述腐败梭菌α毒素突变体具有如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。3.编码权利要求1或2所述腐败梭菌α毒素突变体的基因。4.根据权利要求3所述的腐败梭菌α毒素突变体的基因，其特征在于，具有如SEQIDNO.4所示核苷酸序列。5.一种权利要求1或2所述的腐败梭菌α毒素突变体的制备方法，其特征在于，包括：将编码所述腐败梭菌α毒素突变体的基因在宿主细胞表达。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，包括：使用哺乳动物表达系统表达编码所述腐败梭菌α毒素突变体的基因；优选地，使用CHO细胞表达系统表达所述腐败梭菌α毒素突变体的基因；CHO细胞优选CHO-S细胞系。7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，将所述编码所述腐败梭菌α毒素突变体的基因克隆至表达载体，然后导入宿主细胞，再筛选和培养表达所述腐败梭菌α毒素突变体的宿主细胞，将宿主细胞表达的蛋白经纯化后得到所述腐败梭...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，王钢，唐慧芬，刘强德，李延涛，
申请(专利权)人：天康生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆,65