The invention relates to a method for reducing protein formation in protein L gel chromatography, comprising: (1) cysteine (Cys) is added into the protein L elution system, and NaOH solution is used to neutralize the elution system; (2) the sample purified by protein protein L gel chromatography is treated with G25 dextran gel chromatography to remove Cys. The invention effectively inhibits the formation of polymer caused by low pH elution, and the purified protein does not degrade. The process has simple operation and obvious effect, and provides reference for laboratory research and protein L gel chromatography in industrial production. It also provides a new idea for further research on removing other similar proteins in the process of purifying and forming polymers.
【技术实现步骤摘要】
一种减少蛋白在proteinL凝胶层析中形成多聚体的方法
本专利技术涉及一种减少蛋白在proteinL凝胶层析中形成多聚体的方法，属于生物技术
技术介绍
ProteinL是一种适用于抗体和抗体片段捕获的亲和层析介质(树脂)，可在不影响抗原结合的情况下与免疫球蛋白及免疫球蛋白的Kappa(κ)轻链结合，具有更广阔的抗体片段选择范围，更高的纯度和产量。但是其目蛋白的最佳洗脱条件pH值较低，一般pH值为3甚至更低的条件，高浓度蛋白在较低pH环境下极不稳定，容易形成多聚体，影响层析后蛋白的分子排布和活性回收效率。重组蛋白是一种以人表皮成长因子受体(HER2)为识别靶点的高活性重组融合蛋白，是一种新型靶向抗乳腺癌蛋白药物。具有生产工艺简单，生物活性高，产物杂质少等优点，有很好的应用价值和市场前景。在使用proteinL层析柱纯化过程中，因洗脱条件制约而形成一定量的多聚体。多聚体的形成及含量的多少直接影响了制品的质量、临床用药的安全和产品的合格率。从医药安全性出发，尽可能降低或去除多聚体的含量是非常重要的工艺环节之一。目前研究表明该方法可在提高融合蛋白纯度的基础上，...
【技术保护点】
1.一种减少蛋白在protein L凝胶层析中形成多聚体的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)在protein L洗脱体系中加入半胱氨酸(Cys)，利用NaOH溶液中和洗脱体系；(2)蛋白protein L凝胶层析纯化后的样品利用G25葡聚糖凝胶层析处理，用于去除Cys；所述步骤(1)中洗脱体系的pH为2.0‑7.0。
【技术特征摘要】
1.一种减少蛋白在proteinL凝胶层析中形成多聚体的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)在proteinL洗脱体系中加入半胱氨酸(Cys)，利用NaOH溶液中和洗脱体系；(2)蛋白proteinL凝胶层析纯化后的样品利用G25葡聚糖凝胶层析处理，用于去除Cys；所述步骤(1)中洗脱体系的pH为2.0-7.0。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱体系选自柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液中的任意一种。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在洗脱体系中加入0.1M的Cys，利用0.5M的NaOH溶液中和洗脱体系至pH为8.5±0.3。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，减少融合蛋白4D5Fv-PE25在proteinL凝胶层析中形成多聚体的方法。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)用5倍柱体积的PBS平...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭延杰，展波，曹强庚，庞广礼，林童俊，丁艳，李锋，梁邦领，
申请(专利权)人：山东省生物制品研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37
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