一种NK细胞无血清培养基制造技术

本发明专利技术涉及细胞培养的技术领域，公开了一种NK细胞无血清培养基，包括基础培养基和添加物，所述添加物包括白蛋白、氨基酸、缓冲剂、油酸、亚油酸和胰岛素；本发明专利技术提供了一种NK细胞无血清培养基，具有如下优点：(1)、培养基成分明确，稳定性高，且市场来源基本不受限制，容易购得。(2)、采用本发明专利技术制备的培养基，提升细胞的扩增效率和保证NK细胞的专一性，可以在简化细胞分离和培养步骤的情况下，得到高品质的细胞。(3)、本发明专利技术制备的无血清培养基，无成分不明的异源蛋白，避免细胞污染和减少细胞制剂的安全隐患，有利于临床应用。

【技术实现步骤摘要】
一种NK细胞无血清培养基
本专利技术涉及细胞培养的
，尤其是一种NK细胞无血清培养基。
技术介绍
NK细胞(Naturalkillercells，NKcells)即自然杀伤细胞，是机体天然免疫系统的重要组成部分，也是抗病毒、抗肿瘤的重要组成细胞。研究表明，大多数肿瘤患者体内NK细胞数量下降和或NK细胞的清除癌细胞的能力下降，NK细胞表面活化受体和抑制受体的表达决定其抗肿瘤能力的强弱。肿瘤患者及肿瘤术后患者体内NK细胞的数量及活性都发生了一定的改变。肿瘤的发生、发展及转移与NK细胞的抗肿瘤免疫功能被抑制有密切的联系。正常人体内NK细胞主要存在于外周血循环中，占NK细胞总数的90％。但NK细胞在外周血中的中的比例含量少(只约占淋巴细胞的5％-7％)，因此不管在实验研究还是临床治疗应用，NK细胞都必须进行体外培养和扩增，以达到理想的研究和治疗所需的状态。目前，常见的NK细胞体外扩增和活化的方案中，为了提高扩增效果，使用添加了动物血清(如FBS)的培养基。但是动物血清成分复杂，且不同批次的动物血清难以做到一致性和稳定性，还可能会带来支原体、细菌、病毒或蛋白传染性疾病等污染。另外动物血清带来的异种蛋白，也会增加NK细胞在临床应用中的风险，异种蛋白会引起免疫反应、过敏反应和炎性反应等免疫排斥反应。因此含血清的细胞培养基限制了NK细胞在临床上的应用。为适应临床应用的需要，利用无血清培养基(或者在基础培养基中添加血清替代物)培养NK细胞的方法被使用。但是目前市场上使用的无血清培养基往往不能达到有血清培养基的效果，同时大多数无血清培养基是培养免疫细胞的通用培养基，而没有特别有效的专门培养NK细胞的无血清培养基。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种NK细胞无血清培养基，旨在解决现有技术中缺乏一种特别有效的专门培养NK细胞的无血清培养基的问题。本专利技术是这样实现的，一种NK细胞无血清培养基，包括基础培养基和添加物，所述添加物包括白蛋白、氨基酸、缓冲剂、油酸、亚油酸和胰岛素。进一步地，所述添加物中的组分的浓度为：白蛋白(1g/L)、油酸(0.05-0.2mg/L)、亚油酸(0.2-0.5mg/L)、胰岛素(5-10mg/L)。进一步地，所述添加物中的氨基酸包括L-酪氨酸(30mg/L)、L-胱氨酸(70mg/L)、L-谷氨酰胺酸(50mg/L)、L-谷氨酰胺(350mg/L)、甘氨酸(20mg/L)、L-缬氨酸(60mg/L)、L-色氨酸(20mg/L)、L-苯丙氨酸(30mg/L)、L-丝氨酸(20mg/L)和L-苏氨酸(60mg/L)。进一步地，所述缓冲剂包括L-磷酸甘油二钠盐水合物(1g/L)和4-羟乙基哌嗪乙磺酸(1g/L)。进一步地，所述添加物中的组分的浓度为：白蛋白(1g/L)、油酸(0.12mg/L)、亚油酸(0.35mg/L)、胰岛素(7.5mg/L)。进一步地，所述白蛋白为人血白蛋白。进一步地，所述基础培养基为RPMI1640无血清培养基。进一步地，所述添加物还包括D葡萄糖。进一步地，所述D葡萄糖的浓度为：1-5g/L。与现有技术相比，本专利技术提供了一种NK细胞无血清培养基，具有如下优点：(1)、培养基成分明确，稳定性高，且市场来源基本不受限制，容易购得。(2)、采用本专利技术制备的培养基，提升细胞的扩增效率和保证NK细胞的专一性，可以在简化细胞分离和培养步骤的情况下，得到高品质的细胞。(3)、本专利技术制备的无血清培养基，无成分不明的异源蛋白，避免细胞污染和减少细胞制剂的安全隐患，有利于临床应用。附图说明图1是本专利技术实施例提供的使用本专利技术提供的无血清培养基培养的NK细胞扩增效率结果图；图2是本专利技术实施例提供的使用本专利技术提供的无血清培养基培养的NK细胞流式细胞仪检测结果图；图3是本专利技术实施例提供的使用本专利技术提供的无血清培养基培养的NK细胞杀伤检测结果图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本实施例的附图中相同或相似的标号对应相同或相似的部件；在本专利技术的描述中，需要理解的是，若有术语“上”、“下”、“左”、“右”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此附图中描述位置关系的用语仅用于示例性说明，不能理解为对本专利的限制，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语的具体含义。以下结合具体实施例对本专利技术的实现进行详细的描述。参照图1-3所示，为本专利技术提供较佳实施例。一种NK细胞无血清培养基，包括基础培养基和添加物，添加物包括白蛋白、氨基酸、缓冲剂、油酸、亚油酸和胰岛素。本专利技术提供了一种NK细胞无血清培养基，的NK细胞无血清培养基包括成分明确的替代血清的添加物，添加物包括白蛋白、氨基酸、缓冲剂、油酸、亚油酸和胰岛素。白蛋白是对NK细胞在体外存活和扩增影响最大的营养物质，是构建细胞膜和其他重要物质的基础。白蛋白中所携带的脂肪酸影响NK细胞的生长增殖、细胞功能等各个方面。培养基中油酸和亚油酸的浓度也是影响NK细胞增殖和杀伤活性的重要因素。胰岛素可刺激细胞对尿苷和葡萄糖的吸收，以此合成RNA、蛋白质和脂质，胰岛素还能与细胞膜上的胰岛素受体结合而调控细胞内的多种代谢途径，增加脂肪酸和葡萄糖的合成，对细胞生长起重要作用。上述提供的一种NK细胞无血清培养基，具有如下优点：(1)、培养基成分明确，稳定性高，且市场来源基本不受限制，容易购得。(2)、采用本专利技术制备的培养基，提升细胞的扩增效率和保证NK细胞的专一性，可以在简化细胞分离和培养步骤的情况下，得到高品质的细胞。(3)、本专利技术制备的无血清培养基，无成分不明的异源蛋白，避免细胞污染和减少细胞制剂的安全隐患，有利于临床应用。优选地，添加物中的组分的浓度为：白蛋白(1g/L)、油酸(0.05-0.2mg/L)、亚油酸(0.2-0.5mg/L)、胰岛素(5-10mg/L)。进一步优选地，添加物各组分的浓度为：白蛋白(1g/L)、油酸(0.12mg/L)、亚油酸(0.35mg/L)、胰岛素(7.5mg/L)。再者，添加物中的氨基酸包括L-酪氨酸(30mg/L)、L-胱氨酸(70mg/L)、L-谷氨酰胺酸(50mg/L)、L-谷氨酰胺(350mg/L)、甘氨酸(20mg/L)、L-缬氨酸(60mg/L)、L-色氨酸(20mg/L)、L-苯丙氨酸(30mg/L)、L-丝氨酸(20mg/L)和L-苏氨酸(60mg/L)。缓冲剂包括L-磷酸甘油二钠盐水合物(1g/L)和4-羟乙基哌嗪乙磺酸(1g/L)。具体地，白蛋白为人血白蛋白。再者，基础培养基为RPMI1640无血清培养基。本实施例中，添加物还包括D葡萄糖。具体地，D葡萄糖的浓度为：1-5g/L。以下为本专利技术提供的具体实施例：NK细胞无血清培养基包括基础培养基和其他成分明确的替代血清的添加物，该培养基的基础培养基为RPMI1640无血清培养基，添加物包括白蛋白、氨基酸、缓冲剂、油酸、亚油酸和胰岛素。添加物的浓度为白蛋白1g/L、油酸0.12mg/L、亚本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NK细胞无血清培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加物，所述添加物包括白蛋白、氨基酸、缓冲剂、油酸、亚油酸和胰岛素。

【技术特征摘要】
1.一种NK细胞无血清培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加物，所述添加物包括白蛋白、氨基酸、缓冲剂、油酸、亚油酸和胰岛素。2.如权利要求1所述的一种NK细胞无血清培养基，其特征在于，所述添加物中的组分的浓度为：白蛋白(1g/L)、油酸(0.05-0.2mg/L)、亚油酸(0.2-0.5mg/L)、胰岛素(5-10mg/L)。3.如权利要求2所述的一种NK细胞无血清培养基，其特征在于，所述添加物中的氨基酸包括L-酪氨酸(30mg/L)、L-胱氨酸(70mg/L)、L-谷氨酰胺酸(50mg/L)、L-谷氨酰胺(350mg/L)、甘氨酸(20mg/L)、L-缬氨酸(60mg/L)、L-色氨酸(20mg/L)、L-苯丙氨酸(30mg/L)、L-丝氨酸(20mg/L)和L-苏氨酸(60mg/L)。4.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔兴日，吴俊昌，苏城昌，张捷，
申请(专利权)人：深圳市一五零生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44