一种生物碱在增强CIK细胞增殖能力和杀瘤活性方面的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种生物碱在增强CIK细胞增殖能力和杀瘤活性方面的应用。CIK细胞介导的免疫治疗在提高患者治愈率、减少肿瘤复发、改善患者生活质量、延长生存时间方面可起重要的作用，具有良好的应用前景。提高CIK细胞培养效率、增强CIK细胞杀瘤活性成为当前研究所急需解决的问题。本发明专利技术可以促进CIK细胞增殖、提高其对肿瘤细胞的杀伤活性。

【技术实现步骤摘要】
一种生物碱在增强CIK细胞增殖能力和杀瘤活性方面的应用
本专利技术涉及细胞免疫，尤其涉及CIK细胞。
技术介绍
CIK细胞介导的免疫治疗在提高患者治愈率、减少肿瘤复发、改善患者生活质量、延长生存时间方面可起重要的作用，具有良好的应用前景。提高CIK细胞培养效率、增强CIK细胞杀瘤活性成为当前研究所急需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种生物碱在增强CIK细胞增殖能力和杀瘤活性方面的应用。为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：2-硫代鹰爪豆碱在制备增强CIK细胞增殖能力的试剂或培养基方面的应用。2-硫代鹰爪豆碱在增强CIK细胞杀瘤活性方面的应用。鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱、罗默碱对CIK细胞体外培养的影响总结如下：鹰爪豆碱：对CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性均无明显增强；白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；13α-羟基白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；17-氧代白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；2-硫代鹰爪豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；罗默碱：对CIK细胞的增殖能力无明显增强，但可以显著增强CIK细胞的杀瘤活性。结合鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱的化学结构可以推测这类生物碱的2位氧杂化或硫杂化对活性至关重要。附图说明图1是化合物结构式。图2是培养12天CIK细胞体外增殖倍数。图3是培养12天CD3+CD56+表型细胞占比。图4是培养12天CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤活性测定结果。具体实施方式一、实验材料鹰爪豆碱(spartein)、白羽扇豆碱(lupanine)、13α-羟基白羽扇豆碱(13α-hydroxy-lupanine)、17-氧代白羽扇豆碱(17-oxo-lupanine)、2-硫代鹰爪豆碱(2-thionosparteine)、罗默碱(roemerine)自制或购买，纯度不低于98％，化学结构式如图1所示。在无菌条件下，收集健康成年人外周血(肝素抗凝)50ml。淋巴细胞分离液购自北京索莱宝科技有限公司。RPMI-1640培养基和胎牛血清购自Gibco。二、实验方法1、核细胞的分离、分组和CIK细胞诱导培养取肝素抗凝的健康成年人外周血50ml，加入淋巴细胞分离液15ml，2000r/min离心30min，分离单个核细胞。用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基调整细胞浓度为1×106/ml，接种于24孔板，每孔930μl。然后按下述进行实验分组：细胞因子组：γ干扰素、白细胞介素1α、白细胞介素2、CD3单抗；细胞因子+生物碱组：用生物碱、γ干扰素、白细胞介素1α、白细胞介素2、CD3单抗；对照组：只用培养液；实验组与对照组均设4个复孔。按分组情况，第1天，细胞因子组、细胞因子+生物碱组加入γ干扰素1000U/ml，细胞因子+生物碱组加入生物碱5μM；培养24h后，细胞因子组、细胞因子+生物碱组加入白细胞介素1α100U/ml、白细胞介素2250U/ml、CD3单抗40ng/ml，细胞因子+生物碱组加入生物碱5μM，继续培养；第4天更换培养基，调整细胞浓度为1×106/ml，细胞因子组、细胞因子+生物碱组补加白细胞介素2250U/ml、CD3单抗40ng/ml，细胞因子+生物碱组补加生物碱5μM；第8天，细胞因子组、细胞因子+生物碱组补加白细胞介素2250U/ml、CD3单抗40ng/ml，细胞因子+生物碱组补加生物碱5μM，继续培养至第12天。2、细胞表型分析及细胞增殖测定各组于培养第12天，用台盼蓝拒染法计数细胞，用流式细胞仪检测CIK细胞的比例及细胞表型，并计数CIK细胞总数，每组每次各查4个复孔，计算平均值。3、肿瘤杀伤力测定用MTT显色法测定CIK细胞杀瘤活性，各组以培养12天的CIK细胞为效应细胞，以对数生长期K562细胞为靶细胞，效靶比为15:1。杀瘤活性(％)＝(1－效靶细胞组OD值－单独效应细胞组OD值)/单独靶细胞组OD值×100％4、统计学方法用SPSS17.0统计软件进行数据统计，计量资料以均值±标准差表示，进行多组数据计量资料单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计意义。三、实验结果1、CIK细胞体外增殖及细胞表型分析各组培养至第12天时CIK细胞相对于第0天的增殖倍数如表1和图2所示；各组0天和培养至第12天时CD3+CD56+表型细胞的百分比如表1和图3所示。表1CIK细胞体外增殖倍数和CD3+CD56+表型细胞占比2、肿瘤杀伤力测定结果各组培养至第12天的CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤活性测定结果如表2和图4所示。表2CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤活性测定结果杀伤活性/％对照组25.97±5.12细胞因子组48.25±5.71细胞因子+鹰爪豆碱组49.18±5.24细胞因子+白羽扇豆碱组72.38±5.68细胞因子+13α-羟基白羽扇豆碱组70.67±5.53细胞因子+17-氧代白羽扇豆碱组68.85±5.19细胞因子+2-硫代鹰爪豆碱组72.19±5.87细胞因子+罗默碱组81.95±5.62鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱、罗默碱对CIK细胞体外培养的影响总结如下：鹰爪豆碱：对CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性均无明显增强；白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；13α-羟基白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；17-氧代白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；2-硫代鹰爪豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；罗默碱：对CIK细胞的增殖能力无明显增强，但可以显著增强CIK细胞的杀瘤活性。结合鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱的化学结构可以推测这类生物碱的2位氧杂化或硫杂化对活性至关重要。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.2‑硫代鹰爪豆碱在制备增强CIK细胞增殖能力的试剂或培养基方面的应用。

【技术特征摘要】
1.2-硫代鹰爪豆碱在制备增强CIK细胞增殖能力的试剂或培养基方...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢珊珊，何丹，
申请(专利权)人：青海七彩花生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：青海,63