鉴定和分析蛋白的氨基酸序列的方法技术

本公开内容提供用于测定受试蛋白相对于靶标生物制品的生物相似性的方法，其中受试蛋白被两种不同的蛋白酶消化，得到的消化肽片段用柱色谱‑串联质谱分析，以达到受试蛋白的100%的氨基酸序列覆盖度和100%的氨基酸序列精确性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】鉴定和分析蛋白的氨基酸序列的方法相关申请本申请要求2016年2月4日提交的美国专利申请号62/291,216的优先权，其内容通过引用以其整体并入本文。序列表的结合命名为“ONBI-008001WO_SeqList.txt”的文本文件(创建于2017年2月2日且大小为81.7KB)的内容通过引用以其整体并入本文。公开内容的领域本公开内容主要涉及：改进的蛋白测序方法，其使用减少的孵育时间用于变性蛋白的蛋白酶消化，并包括在柱色谱和串联质谱(LC-MS/MS)分析期间增加的含水流动相，以提高序列覆盖度和精确性至100%；以及改进的蛋白测序方法，其用于治疗性重组蛋白的开发和经批准的生物制品生产的质量控制分析。背景包括重组单克隆抗体(mAb)和天然蛋白的重组版本在内的重组蛋白已被用作生物医学研究的试剂，以及用于人的诊断剂和治疗剂。重组蛋白的一个实例包括生物相似分子(也称为“生物制品”)。为了被批准用作人的治疗剂，必须证明生物相似分子具有相同的氨基酸序列，并且在翻译后的修饰方面与亲本创新生物产品是非常密切地相似的，例如，具有“一致性(sameness)”。评估生物相似分子的一致性是至关重要的，因为重本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定受试蛋白相对于靶标生物制品的生物相似性的方法，所述方法包括以下步骤：(a) 使用第一蛋白酶消化受试蛋白的第一样本第一孵育时间，和使用第二蛋白酶消化所述受试蛋白的第二样本第二孵育时间，其中所述第一样本和所述第二样本是物理上分开的；(b) 在足以增强小肽与柱的结合的条件下，将柱色谱和串联质谱应用于所述第一样本，并产生所述第一样本中的所述受试蛋白的序列；(c) 在足以增强小肽与柱的结合的条件下，将柱色谱和串联质谱应用于所述第二样本，并产生所述第二样本中的所述受试蛋白的所述序列，其中所述第一样本和所述第二样本是物理上分开的；(d) 当所述受试蛋白包含与所述靶标生物制品的100%序列同一性时...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.04 US 62/2912161.一种测定受试蛋白相对于靶标生物制品的生物相似性的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使用第一蛋白酶消化受试蛋白的第一样本第一孵育时间，和使用第二蛋白酶消化所述受试蛋白的第二样本第二孵育时间，其中所述第一样本和所述第二样本是物理上分开的；(b)在足以增强小肽与柱的结合的条件下，将柱色谱和串联质谱应用于所述第一样本，并产生所述第一样本中的所述受试蛋白的序列；(c)在足以增强小肽与柱的结合的条件下，将柱色谱和串联质谱应用于所述第二样本，并产生所述第二样本中的所述受试蛋白的所述序列，其中所述第一样本和所述第二样本是物理上分开的；(d)当所述受试蛋白包含与所述靶标生物制品的100%序列同一性时，鉴定所述受试蛋白与所述靶标生物制品为生物相似的；和(e)当所述受试蛋白不包含与靶标生物制品的100%序列同一性时...

【专利技术属性】
技术研发人员：X肖，L李，
申请(专利权)人：安口生物公司，
类型：发明
国别省市：美国,US