一种重组FAD合成酶、编码基因、工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种过量表达FAD合成酶的基因工程菌其应用。所述的工程菌是将FAD合成酶的编码基因导入大肠埃希氏杆菌构建获得的。利用重组大肠杆菌表达FAD合成酶，经蛋白纯化后，可进行体外FAD合成；该FAD合成酶温度适用性较广，在20℃到50℃都能起作用；运用FAD合成酶体外合成FAD，初步研究发现每毫克FAD合成酶每分钟最高可转化合成3.271μM的FAD。与现有方法相比，本发明专利技术合成FAD的方法具有产物浓度高、杂质少，容易纯化及其工艺要求简单、环境友好等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种重组FAD合成酶、编码基因、工程菌及其应用
本专利技术涉及一种黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)的合成方法，特别涉及FAD合成酶基因fads、编码蛋白、载体、工程菌及其应用。
技术介绍
核黄素，即维生素B2，在生物体内主要以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)和黄素单核苷酸(FMN)的形式存在，并作为黄素酶类的辅酶参与细胞中传递氢的相关代谢，是生命活动过程中必不可少的一种维生素。FAD为核黄素在体内磷酸化后的活性物质，在体内作为黄素辅酶参与体内生物氧化过程，也可参与碳水化合物、蛋白质和脂肪的代谢，维持正常的视觉功能。FAD的溶解度比核黄素更高，故利用率更高，给药量仅为核黄素的1/100～1/10，并可供肌肉注射。此外，FAD还可激活维生素B6，维持红细胞的完整性。哺乳动物不能从头合成FAD，需要从外源摄取核黄素。当体内FAD缺乏时，机体的生物氧化过程受到影响，正常的代谢发生障碍，即可出现典型的维生素B2缺乏症状，不仅影响糖代谢，也会影响脂肪代谢，改变血浆与组织中磷脂的浓度，并且能阻断摄入的维生素B6与叶酸转变为它们的辅酶衍生物。目前，FAD可以通过化学法合成。化学合成法形式多样，方法的不同主要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组FAD合成酶，其特征在于所述重组FAD合成酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种重组FAD合成酶，其特征在于所述重组FAD合成酶氨基酸序列为SEQIDNO.2所示。2.一种权利要求1所述重组FAD合成酶的编码基因，其特征在于所述编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.1所示。3.一种由权利要求2所述重组FAD合成酶的编码基因构建的重组载体。4.一种由权利要求3所述重组载体转化制备的重组基因工程菌。5.如权利要求4所述的重组基因工程菌，其特征在于所述重组基因工程菌按如下方法制备：(1)将重组FAD合成酶的编码基因克隆至外源基因表达质粒上，获得重组质粒；所述外源基因表达质粒为下列之一：①pET系列，②pUC系列，③pGEM系列，④pBluescript系列；(2)将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞，接种至LB液体培养基，20～37℃、50～250r/min振荡培养0.5～2h，获得转化产物；(3)将转化产物涂布于含10～100μg/mL卡那霉素的平板，20～37℃培养，筛选获得含重组FAD合成酶编码基因的工程菌。6.如权利要求4-5之一所述重组基因工程菌，其特征在于所述重组基因工程菌为大肠杆菌(Escherchiacoli)BL21(DE3)/pET28b(+)-fads，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO:M2017731，保藏日期2017年11月27日，地址：中国武汉，武汉大学，邮编430072。7.一种权利要求1所述重组FAD合成酶在生产黄素腺嘌呤二核苷酸中的应用。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述的应用为：将含重组FAD合成酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的发酵液提取的重组FAD合成酶与pH5-10缓冲液混合，加入底物黄素单核苷酸、ATP和二价金属阳离子构成反应体系，在...

【专利技术属性】
技术研发人员：余志良，音建华，裘娟萍，潘俏俏，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33