重组Taq直扩酶及其制备方法、重组质粒和工程菌技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及一种重组Taq直扩酶及其制备方法、重组质粒和工程菌。所述重组Taq直扩酶的基因序列如SEQ ID NO.1所示。该改进后的重组Taq直扩酶加强了抗干扰能力，特别是可抵抗反应体系中各种抑制因子的作用，从而提高了扩增效率。因此，本发明专利技术的重组Taq直扩酶能够在较少核酸纯化步骤或无需核酸纯化步骤条件下，可以直接进行复杂模板的扩增，即可进行直接PCR反应。

【技术实现步骤摘要】
重组Taq直扩酶及其制备方法、重组质粒和工程菌
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种重组Taq直扩酶及其制备方法。
技术介绍
早在1969年，人们从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离出一种嗜热的水生真菌Thermusaquaticus，该菌能在70～75℃生长，从该菌分离纯化得到一种耐热的、依赖DNA的DNA聚合酶，简称TaqDNA聚合酶。随后，也发现了各种其他的耐热DNA聚合酶，这些酶通常被用于科学实验中的多重核酸扩增(PCR)。目前，应用的耐热DNA聚合酶主要分为普通型和高保真型。普通型：1.TaqDNA聚合酶，由一种水生栖热菌yT1株分离提取出，是发现的耐热DNA聚合酶中活性最高的一种，达200,000单位/mg。具有5'-3'外切酶活性，但不具有3'-5'外切酶活性，因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。TaqDNA聚合酶还要具有非模板依赖性活性，可将PCR双链产物的每一条链3'加入单核苷酸尾，故可使PCR产物具有3'突出的单A核苷酸尾；另一方面，在仅有dTTP存在时，它可将平端的质粒的3'端加入单T核苷酸尾，产生3'端突出的单T核苷酸尾。应用这一特性，可实现P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组Taq直扩酶，其特征在于，所述重组Taq直扩酶的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种重组Taq直扩酶，其特征在于，所述重组Taq直扩酶的基因序列如SEQIDNO.1所示。2.如权利要求1所述的重组Taq直扩酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：构建含有SEQIDNO.1所示序列的重组质粒；将所述重组质粒转入大肠杆菌中，得到表达所述重组Taq直扩酶的工程菌；将所述工程菌进行诱导表达后，进行提取纯化，得到所述重组Taq直扩酶。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述构建含有SEQIDNO.1所示序列的重组质粒的步骤包括：将SEQIDNO.1所示序列两端分别加上限制性内切酶EcoRI和NotI的保护碱基，然后连接到经限制性内切酶EcoRI和NotI酶切过的pET-32A载体上，得到所述重组质粒。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，扩增SEQIDNO.1所示序列的引物如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，将所述工程菌进行诱导表达的步骤包括：将所述工程菌转接于含有浓度为50-100μg/ml的氨苄青霉素的LB液体培养基进行活化培养；将所述活化培养后的培养液转入含有浓度为100-200μg/ml的氨苄青霉素的LB液体培养基，进行振荡培养，使最终的OD600为0.4-1.0。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述活化培养的条件为：温度36-37℃，转速...

【专利技术属性】
技术研发人员：李立家，黄健鹏，肖承荣，胡焰，岳梦霞，
申请(专利权)人：深圳市华中生物药械有限公司，武汉大学，
类型：发明
国别省市：广东,44