一种热启动Taq DNA聚合酶的制备方法技术

本发明专利技术公开一种热启动TaqDNA聚合酶的制备方法，包括以下步骤：(1)将纯化的TaqDNA聚合酶作为底物包被，利用噬菌体展示技术进行三轮的淘选流程，得到富集的同底物具有高亲和力的阳性备选配体；(2)分析富集的阳性备选配体序列组成，同底物结构比对后，选择若干可以与之结合的阳性克隆，利用大肠杆菌体外表达系统表达得到系列阳性配体；(3)将体外表达得到的配体、TaqDNA和多克隆抗体按照3：3：1的比例混合后得到热启动TaqDNA聚合酶。本发明专利技术制备的热启动TaqDNA聚合酶，能够在最大限度保持酶活性的基础上常温更好的封闭酶的活性，在分子诊断多个平台上验证其使用效果优于传统的热启动TaqDNA聚合酶。

【技术实现步骤摘要】
一种热启动TaqDNA聚合酶的制备方法
本专利技术涉及生物学
具体涉及一种热启动TaqDNA聚合酶及其制备方法。
技术介绍
聚合酶链式反应技术(PCR反应)是现代生物技术的核心技术之一，该技术的原理为利用TaqDNA聚合酶在体外利用与目的模板特异结合的上下游引物，通过95℃变性、60℃退火、72℃延伸三个步骤经过25-40个循环达到对目的基因片段的大量扩增。该技术经过近40年的发展，已经广泛的应用于生物科学科研和医学检测中。随着检测技术的发展和需求的提高，PCR技术已经由之前的定性分析发展到了定量分析。通过实时荧光定量技术，检测人员可以实现对样品中的较低的病毒数量进行检测分析，为医生提供更为早期的诊断依据。而传统的TaqDNA聚合酶由于其在常温下具备一定的活性，从而容易造成引物二聚体和非特异扩增，进而造成检测结果的偏离甚至产生假阳性的结果。针对这一应用需求开发出了热启动技术，其核心机制在于抑制TaqDNA聚合酶常温下的活性反应。目前常见的热启动技术分为：1石蜡包埋法；2抗体抑制法；3化学修饰法等：1、石蜡包埋法的原理是将TaqDNA聚合酶包埋于石蜡小球中，常温下酶同反应体系隔绝本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种热启动TaqDNA聚合酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将纯化的TaqDNA聚合酶作为底物包被，利用噬菌体展示技术进行三轮的淘选流程，得到富集的同底物具有高亲和力的阳性备选配体；(2)分析富集的阳性备选配体序列组成，同底物结构比对后，选择若干可以与之结合的阳性克隆，利用大肠杆菌体外表达系统表达得到系列阳性配体；(3)将体外表达得到的配体、TaqDNA和多克隆抗体按照3：3：1的比例混合后得到热启动TaqDNA聚合酶。

【技术特征摘要】
1.一种热启动TaqDNA聚合酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将纯化的TaqDNA聚合酶作为底物包被，利用噬菌体展示技术进行三轮的淘选流程，得到富集的同底物具有高亲和力的阳性备选配体；(2)分析富集的阳性备选配体序列组成，同底物结构比对后，选择若干可以与之结合的...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑春杨，刘金朝，申奥，张国林，
申请(专利权)人：青岛中科爱博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37