抗肿瘤的组合多肽链及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种抗肿瘤的组合多肽链及其制备方法和应用，该抗肿瘤的组合多肽链包括依次连接的依次连接的TERT抗原表位肽P572、第一连接片段、TERT抗原表位肽P672、第二连接片段、TERT抗原表位肽P540以及TERT的C‑末端多肽TERT‑C27，第一连接片段和第二连接片段均包括至少三个连接氨基酸，连接氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸中的一种。该组合多肽链能够有效的抑制肿瘤的生长，体内抗肿瘤效果好。

Anti-Tumor Composite Polypeptide Chains and Their Preparation and Application

The invention discloses an anti-tumor composite polypeptide chain and its preparation method and application. The anti-tumor composite polypeptide chain includes sequentially connected TERT epitope peptide P572, first ligation fragment, TERT epitope peptide P672, second ligation fragment, TERT epitope peptide P540 and TERT C-terminal polypeptide TERT. C27, the first and second ligation fragments consist of at least three ligation amino acids, which are selected from one of glycine, serine and alanine. The combined polypeptide chain can effectively inhibit the growth of tumors and has good anti-tumor effect in vivo.

【技术实现步骤摘要】
抗肿瘤的组合多肽链及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种抗肿瘤的组合多肽链及其制备方法和应用。
技术介绍
肿瘤极大地危害人类的健康，是全球性的公共卫生问题之一。肿瘤的免疫治疗可以刺激机体免疫系统对肿瘤的攻击，端粒酶逆转录酶(telomerasereversetranscriptase，TERT)是端粒酶的催化肽亚基，它在超过85％的人类肿瘤细胞内高表达，但在正常体细胞中却表达极低或完全不表达，这使得它成为了肿瘤免疫治疗的理想靶标。用TERT特异性细胞毒T淋细胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)免疫小鼠可以触发抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞反应，并且能够杀死TERT阳性的多种组织内的肿瘤细胞。通过计算机程序筛选TERT氨基酸序列中能够结合人类白细胞抗原Ⅰ类或Ⅱ类蛋白质，并引发TERT特异性免疫应答的表位，发现了许多TERT肽，包括P540、P572、P672和P973等等，单个的抗原表位肽在体外能够使得TERT特异性CTL或辅助T细胞应答，但这些TERT肽在体内抗肿瘤效果不够理想。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种体内抗肿瘤效果较好的抗肿瘤的组合多肽链及其制备方法和应用。一种抗肿瘤的组合多肽链，包括依次连接的TERT抗原表位肽P572、第一连接片段、TERT抗原表位肽P672、第二连接片段、TERT抗原表位肽P540以及TERT的C-末端多肽TERT-C27，所述第一连接片段和所述第二连接片段均包括至少三个连接氨基酸，每个所述连接氨基酸独立地选自甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸中的一种。在一个实施方式中，所述TERT抗原表位肽P572的N-末端、所述TERT抗原表位肽P672的N-末端和所述TERT抗原表位肽P540的N-末端分别设有起始密码子。在一个实施方式中，所述TERT-C27的N-末端设有起始密码子，所述TERT抗原表位肽P540直接与所述TERT-C27的起始密码子连接。在一个实施方式中，所述TERT-C27的为：(a)、由SEQIDNo.1所示的氨基酸序列组成的多肽；(b)、与SEQIDNo.1所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少98％同源性的多肽，或(c)、由SEQIDNo.1所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或多个氨基酸被缺失、替代或增加得到的多肽。在一个实施方式中，所述TERT-C27的为：(a)、由SEQIDNo.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸编码得到的多肽；(b)、与SEQIDNo.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸具有至少98％同源性的多核苷酸编码得到的多肽；或(c)、由SEQIDNo.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸，其中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的多核苷酸编码得到的多肽。在一个实施方式中，所述组合多肽链为：(a)、由SEQIDNo.3所示的氨基酸序列组成的多肽；(b)、与SEQIDNo.3所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少98％同源性的多肽，或(c)、由SEQIDNo.3所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或多个氨基酸被缺失、替代或增加得到的多肽。在一个实施方式中，所述组合多肽链为：(a)、由SEQIDNo.4所示的核苷酸序列组成的多核苷酸编码得到的多肽；(b)、与SEQIDNo.4所示的核苷酸序列组成的多核苷酸具有至少98％同源性的多核苷酸编码得到的多肽；或(c)、由SEQIDNo.4所示的核苷酸序列组成的多核苷酸，其中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的多核苷酸编码得到的多肽。一种上述的抗肿瘤的组合多肽链的制备方法，包括如下步骤：提供基因表达载体，所述基因表达载体中含有目的基因表达片段，所述目的基因表达片段用于表达抗肿瘤的组合多肽链，所述组合多肽链包括依次连接的TERT抗原表位肽P572、第一连接片段、TERT抗原表位肽P672、第二连接片段、TERT抗原表位肽P540以及TERT的C-末端多肽TERT-C27，所述第一连接片段和所述第二连接片段均包括至少三个连接氨基酸，所述连接氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸中的一种；将所述目的基因表达载体转染到宿主细胞中，并对转染后的所述宿主细胞进行诱导表达，得到所述抗肿瘤的组合多肽链。上述抗肿瘤的组合多肽链在制备抗肿瘤的药物中的应用。上述抗肿瘤的组合多肽链在制备抗黑素瘤的药物中的应用。上述抗肿瘤的组合多肽链包括依次连接的依次连接的TERT抗原表位肽P572、第一连接片段、TERT抗原表位肽P672、第二连接片段、TERT抗原表位肽P540以及TERT的C-末端多肽TERT-C27，第一连接片段和第二连接片段均包括至少三个连接氨基酸，每个连接氨基酸独立地选自甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸中的一种。专利技术人在TERT抗原表位肽的选择、抗原表位肽的连接顺序、连接片段的序列以及组合的多肽等方面进行了大量的探索研究，预料不到地发现，将TERT抗原表位肽P572、TERT抗原表位肽P672、TERT抗原表位肽P540和TERT的C-末端多肽TERT-C27连接形成的组合多肽链，与对照组相比能够更加有效的抑制肿瘤的生长，体内抗肿瘤效果好。附图说明图1为一实施方式的抗肿瘤的组合多肽链的示意图；图2为人源的端粒酶逆转录酶(hTERT)的示意图；图3为人源的端粒酶逆转录酶(hTERT)的C-末端多肽TERT-C27的示意图；图4为一实施方式的抗肿瘤的组合多肽链的制备方法的流程图；图5为实施例1中所用的载体pcDNA3.1骨架载体的图谱；图6为实施例1中获得的重组载体pSAg8的图谱；图7为实施例1中获得的融合质粒pSAg8-C27载体的图谱；图8为对比例1的多肽链SAg7-C27的示意图；图9为小鼠体内注射实验组和对照组的腺病毒载体后肿瘤体积的统计图；图10为小鼠体内注射实验组和对照组的腺病毒载体后小鼠的生存率的统计图。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例及附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。请参阅图1，一实施方式的抗肿瘤的组合多肽链的示意图，该组合多肽链包括依次连接的TERT抗原表位肽P572、第一连接片段、TERT抗原表位肽P672、第二连接片段、TERT抗原表位肽P540以及TERT的C-末端多肽TERT-C27。第一连接片段和第二连接片段均包括至少三个连接氨基酸，连接氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸中的一种。具体地，第一连接片段(Linker-1)和第二连接片段(Linker-2)均包括至少三个连接氨基酸，连接氨基酸选自甘氨酸(缩写为G)、丝氨酸(缩写为S)和丙氨酸(缩写为A)中的一种。本实施方式中，第一连接片段包括三个连接氨基酸，依次为丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸(A-G-G)。第二连接片段包括三个连接氨基酸，依次为甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸(G-S-G)。其他实施方式中，第一连接片段和第二连接片段的氨基酸还可以是其他的组合方式，例如甘氨酸-丙氨酸-甘氨酸(G-A-G)等等。甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸的氨基酸残基片段较小，既能将抗原表位肽P572、抗原表位肽P672以及抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗肿瘤的组合多肽链，其特征在于，包括依次连接的TERT抗原表位肽P572、第一连接片段、TERT抗原表位肽P672、第二连接片段、TERT抗原表位肽P540以及TERT的C‑末端多肽TERT‑C27，所述第一连接片段和所述第二连接片段均包括至少三个连接氨基酸，每个所述连接氨基酸独立地选自甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸中的一种。

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤的组合多肽链，其特征在于，包括依次连接的TERT抗原表位肽P572、第一连接片段、TERT抗原表位肽P672、第二连接片段、TERT抗原表位肽P540以及TERT的C-末端多肽TERT-C27，所述第一连接片段和所述第二连接片段均包括至少三个连接氨基酸，每个所述连接氨基酸独立地选自甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸中的一种。2.根据权利要求1所述的抗肿瘤的组合多肽链，其特征在于，所述TERT抗原表位肽P572的N-末端、所述TERT抗原表位肽P672的N-末端和所述TERT抗原表位肽P540的N-末端分别设有起始密码子。3.根据权利要求1所述的抗肿瘤的组合多肽链，其特征在于，所述TERT-C27的N-末端设有起始密码子，所述TERT抗原表位肽P540直接与所述TERT-C27的起始密码子连接。4.根据权利要求1所述的抗肿瘤的组合多肽链，其特征在于，所述TERT-C27的为：(a)、由SEQIDNo.1所示的氨基酸序列组成的多肽；(b)、与SEQIDNo.1所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少98％同源性的多肽，或(c)、由SEQIDNo.1所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或多个氨基酸被缺失、替代或增加得到的多肽。5.根据权利要求1或4所述的抗肿瘤的组合多肽链，其特征在于，所述TERT-C27的为：(a)、由SEQIDNo.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸编码得到的多肽；(b)、与SEQIDNo.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸具有至少98％同源性的多核苷酸编码得到的多肽；或(c)、由SEQIDNo.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸，其中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的多核苷酸编码得到的多肽。6.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：林李家宓，王晓梅，林桂淼，蒋文晓，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东,44