针对癌症的基于PTP的疫苗制造技术

本发明专利技术涉及医学领域。本发明专利技术更具体地涉及肽、含有所述肽的微泡、含有所述肽的组合物，特别是疫苗，以及用于在受试者中刺激免疫反应的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对癌症的基于PTP的疫苗
本专利技术涉及医药领域，并且通常用于治疗和预防领域。本专利技术更具体地涉及由具有7至50个氨基酸的肽组成的先行翻译产物(“PTP”)，涉及含有这种PTP的微泡，涉及含有所述PTP的组合物，特别是疫苗组合物，并且涉及刺激受试者的免疫反应、优选针对肿瘤抗原的免疫反应的方法。
技术介绍
疫苗接种的主要目标是诱导可以控制人类的病毒感染性疾病和癌症的有效免疫反应。免疫系统分为两类：一方面是先天免疫系统，并且另一方面是适应性免疫系统。针对感染或转化细胞的细胞免疫反应需要活化适应性免疫系统。这种活化只能通过刺激抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞如CD8+T细胞、B细胞和T辅助性T细胞如CD4+T细胞来实现。实际上，细胞毒性CD8+T细胞能够检测在其细胞表面呈递抗原的病毒感染细胞或癌细胞，所述抗原结合于MHCI类分子。因此这种识别具有T细胞对感染细胞或肿瘤细胞的直接细胞毒性作用。然而，针对这些不同状态的适当免疫反应需要通过专职性抗原呈递细胞(pAPC)如树突状细胞和巨噬细胞对CD8+T细胞的活化，所述专职性抗原呈递细胞吸收外部肽物质以通过称为交叉呈递的过程将所述外部肽物质呈递在其MHCI类分子上。直接和交叉呈递路径是检测和消除对宿主造成威胁的细胞的基本过程。这个过程还依赖于T辅助性T细胞，所述细胞识别来源于与MHCII类分子结合的外源蛋白质的13-20个氨基酸的短肽形式的抗原。数年前，据假设，直接呈递给MHCI类限制途径的肽来源不是来源于全长蛋白质的降解，而是来源于所谓的缺陷型核糖体产物或DRiP。此后，进一步的研究支持了这一观点，即使尚未了解I类路径的肽的实际来源。专利技术人已经显示爱巴病毒(Epsteinbarrvirus)的潜在蛋白质EBNA1影响mRNA翻译以抑制抗原呈递，并且以这种方式避免了它的检测。此外，他们观察到mRNA翻译的速率与抗原呈递密切相关。另外，一些MHCI类结合肽已被描述为由隐蔽性翻译(cryptictranslation)产生，其是指由非常规翻译机制在细胞中合成的多肽。这些可以是由内含子、内含子/外显子连接区、5'和3'非翻译区或交替翻译阅读框编码的肽。所有这些观察结果使得焦点从蛋白质降解转移至mRNA翻译作为抗原产生的关键过程。最近，专利技术人已经显示，无论肽是由内含子表达还是由外显子表达，抗原呈递都是等效的，并产生所谓的先行翻译产物(PTP)，所述先行翻译产物通过不同于产生全长蛋白质的规范事件的翻译事件产生。前述结果得到了以下事实的支持：如果从细胞核到细胞质的mRNA输出被阻断，则外显子和内含子编码的肽的抗原呈递显著增加。总体而言，专利技术人已经展示，用于MHCI类路径的抗原肽在很大程度上来源于mRNA翻译事件，该mRNA翻译事件与产生全长蛋白质的mRNA翻译事件不同且无关，并且在早期扫描新合成的mRNA期间在细胞核区室中发生(Apcher,Millot等人,2013,Apcher,Daskalogianni等人,2015)。这些PTP可能构成难以捉摸的DRiP。它们可能在mRNA剪接发生之前产生，这例如解释了免疫系统可如何“耐受”组织依赖性替选性剪接产物。如今，旨在改善宿主免疫介导的肿瘤识别和破坏的癌症免疫疗法中的治疗性疫苗接种正成为新的研究热点。但在1996年，在临床试验中已经测试了来源于MAGE-1蛋白的I类结合合成表位作为基于肽的疫苗。然而，使用合成表位作为疫苗的同一组和其它组在黑素瘤患者中看不到任何有益的临床反应。接着，使用针对不同癌症的其它短肽，再次未在患者中展示任何有益的T细胞反应。接着，使用多种肽疫苗，特别是针对黑素瘤，但没有任何突破。最近，已经显示利用合成的长肽(超过20个氨基酸)的免疫更具免疫原性，并且具有比用短肽观察到的免疫更好的抗肿瘤生长作用。含有最小短抗原表位的两种肽之间的这些差异可见于以下事实：较长肽由于其三级结构而可以被保护不受细胞外降解，并且见于以下事实：它们太长而不能与任何细胞系的MHCI类分子直接结合。此外，使用较长肽作为疫苗的益处在于它们需要被内化并且需要被pAPC中的蛋白酶体适当加工，然后在细胞表面被呈递并活化CD8+T细胞。此外，较长肽具有更好的机会含有数个表位，所述表位可以诱导不同CD8+T细胞的活化，并因此诱导多重免疫反应。已经研究了免疫细胞或肿瘤细胞分泌的外来体(exosome)在肿瘤免疫疗法中的潜力。外来体来源于多泡体(MVB)中的腔内(intralumenal)囊泡，并且选择性并入了特殊蛋白质。外来体是直径为30至100nm的囊泡。已经假设肿瘤来源外来体可能含有肿瘤抗原，因此可以用作癌症疫苗的肿瘤抗原来源。此外，许多研究小组报道，来源于树突状细胞(DC)的外来体可能是用于诱导特异性抗肿瘤免疫的适用且有效的药剂。然而，越来越多的证据表明来源于肿瘤的外来体是不完美的，因为它们可能在不同路径中通过不同作用诱导肿瘤免疫逃避，如通过抑制DC的分化或通过负调节NK细胞(Valenti,Huber等人,2006；Clayton,Mitchell等人,2008；Whiteside,Mandapathil等人,2011)。专利技术人现在在本文中描述了一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含由内含子或外显子序列产生的PTP，所述PTP优选与含有PTP的微泡、通常地外来体组合，所述疫苗组合物能够诱导针对肿瘤的适当CD8+T细胞免疫反应，从而使得完全抑制肿瘤生长，优选破坏肿瘤。
技术实现思路
本专利技术涉及用于改善抗原特异性免疫反应的产品和方法，特别是在癌症治疗和预防领域。本专利技术基于如下意外发现：先行翻译产物(“PTP”)，其由具有7至50个氨基酸的肽组成，通常包含至少一个MHCI类表位，优选包含至少一个MHCI类表位和至少一个MHCII类表位，能够在罹患癌症的受试者中诱导针对表达这种肽的肿瘤的有效、优选持续的免疫反应。因此，本专利技术的第一目的涉及一种用作受试者的疫苗、优选癌症疫苗的先行翻译产物(“PTP”)，所述先行翻译产物由通常为5kDa或更小且具有7至50个氨基酸的肽组成。PTP通常由选自以下的序列表达:内含子、3'或5'非翻译区(UTR)、LncRNA(长非编码RNA)、miRNA(微小RNA)、基因间序列以及其组合。PTP优选包含至少一个MHCI类表位和/或至少一个MHCII类表位。本专利技术的第二目的涉及一种微泡，通常是外来体或等效的肿瘤来源微泡，如黑素体，所述微泡包含至少一种PTP(优选数种PTP)，通常为本文所述的PTP，所述PTP优选包含至少一个MHCI类表位和/或至少一个MHCII类表位。本专利技术的第三目的涉及一种组合物，特别是疫苗组合物，所述组合物包含至少一种PTP(优选数种PTP)和/或微泡，通常为本文所述的外来体或肿瘤来源微泡，以及药学上可接受的载体或赋形剂。优选的疫苗组合物至少包含本文所述的第一PTP、微泡以及药学上可接受的载体或赋形剂。优选地，微泡包含至少一种由具有7至50个氨基酸的肽组成的第二PTP，所述第二PTP优选包含至少一个MHCI类表位和/或至少一个MHCII类表位，所述微泡任选地包含第一PTP。本专利技术还涉及一种编码PTP的核酸序列，其根据本专利技术用作疫苗；并且涉及包含这种核酸序列和药学上可接受的载体或赋形剂的组合物，特别是疫苗组本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疫苗组合物，其至少包含由具有7至50个氨基酸的肽组成的第一先行翻译产物(PTP)、微泡以及药学上可接受的载体或赋形剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.03 EP 16305243.41.一种疫苗组合物，其至少包含由具有7至50个氨基酸的肽组成的第一先行翻译产物(PTP)、微泡以及药学上可接受的载体或赋形剂。2.权利要求1的疫苗组合物，其中所述微泡包含至少一种由具有7至50个氨基酸的肽组成的第二PTP，所述第二PTP优选包含至少一个MHCI类表位和/或至少一个MHCII类表位，并且其中所述微泡任选地包含所述第一PTP。3.权利要求1或2的疫苗组合物，其中所述组合物还包含对应于所述第一PTP的全长蛋白质。4.权利要求1至3任一项的疫苗组合物，其中所述微泡表达所述第一PTP和至少第二PTP两者，任选地还表达至少一种第三不同PTP。5.权利要求4的疫苗组合物，其中微泡是活化CD8+T细胞的微泡，通常是外来体或肿瘤来源微泡，如黑素体。6.权利要求1至5任一项的疫苗组合物，其中所述组合物包含活化CD4+T细胞和/或CD8+T细胞的PTP。7.权利要求1至6任一项的疫苗组合物，其中所述疫苗是癌症疫苗。8.权利要求7的疫苗组合物，其中所述组合物包含PTP和...

【专利技术属性】
技术研发人员：塞巴斯蒂安·阿普谢，罗宾·福雷乌斯，山坂享弘，艾莉森·皮尔森，玛蒂尔德·鲍尔皮坎特，
申请(专利权)人：法国古士塔柏罗斯学院，
类型：发明
国别省市：法国,FR