一种植物乳杆菌细菌素的抗体、试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及一种植物乳杆菌细菌素的抗体、试剂盒及其使用方法。本发明专利技术所述植物乳杆菌细菌素的抗体，经氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示蛋白免疫获得，能够准确、高效地检测植物乳杆菌细菌素，具有特异性好、灵敏度高的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种植物乳杆菌细菌素的抗体、试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及生物检测领域，具体而言，涉及一种植物乳杆菌细菌素的抗体、试剂盒及其使用方法。
技术介绍
细菌素作为一种安全高效的天然生物抑菌剂，近年来在食品保藏和抑菌类药物开发等行业的应用受到了极大的关注。细菌素(bacteriocins)是某些细菌产生的具有抑菌生物活性的多肽、蛋白质或蛋白质复合物。细菌素最初是从革兰氏阴性细菌大肠杆菌中发现的。由乳酸菌代谢所产的细菌素被称为乳酸菌素，是一种安全的蛋白类物质，可被蛋白酶消化，对真核细胞无影响。同时可抑制某些病原菌和腐败菌的生长，如：抑制食品中单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、幽门螺杆菌和沙门氏菌等致病菌。乳酸菌素能够成为天然生物防腐剂的开发对象基于以下特点：①其产生菌乳酸菌生长繁殖快，生产周期短，具有工业化生产前景；②具有人体蛋白酶生物降解性，不会在人体内蓄积，也不会对人体肠道的正常菌群产生影响；③不同于抗生素会耐药性，不会诱发致病微生物对抗生素的抗性；④便于现代基因工程技术对细菌素基因进行修饰和克隆。乳酸菌的分离源多数为具有益生特性的传统发酵食品和人体肠道，因此，具有抗菌活性的乳酸菌及其代谢产物被认为是基本安全的。乳酸乳球菌素Nisin和乳酸片球菌素Pediocin是目前大规模商业化应用的乳酸菌细菌素，已经被80多个国家允许作为食品防腐剂，主要应用在加工奶酪、牛奶制品和罐头制品中。申请人从天然发酵的肉制品中筛选得到一株植物乳杆菌。通过体外抑菌实验证实，植物乳杆菌能够代谢产生一种细菌素蛋白，命名为植物乳杆菌细菌素，该细菌素蛋白对单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、屎肠球菌(Enterococcusfacealis)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)、志贺氏菌(Shigelladysenteriae)等都具有一定的抑菌效果。由于植物乳杆菌细菌素对大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等革兰氏阴性菌都具有一定的抑菌效果，相对于Nisin在食品防腐保鲜领域具有更为广阔的应用前景。而目前限制植物乳杆菌细菌素在食品保鲜应用中存在的最大问题是，还没有建立食品中植物乳杆菌细菌素的定量检测方法。由于植物乳杆菌细菌素是一种蛋白质，因此建立针对植物乳杆菌细菌素的免疫学定量检测方法显得尤为重要。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种植物乳杆菌细菌素的抗体，所述抗体能够准确、高效地检测该植物乳杆菌细菌素。本专利技术的第二目的在于提供一种试剂盒，所述试剂盒包括前述抗体，能够准确、高效地检测植物乳杆菌，进一步地，所述试剂盒以抗体M301作为包被抗体，抗体M123作为检测抗体，二者配对成功，在检测植物乳杆菌时具有准确性好、灵敏度高的优点。本专利技术的第三目的在于提供一种植物乳杆菌细菌素的检测方法，所述方法使用前述抗体或试剂盒。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种植物乳杆菌细菌素的抗体，所述抗体经氨基酸序列如SEQIDNO：1所示蛋白免疫获得。在一些具体的实施方式中，所述抗体为M301或M123，其中，所述抗体M301由保藏编号为CGMCCNo.15194的杂交瘤产生，所述抗体M123由保藏编号为CGMCCNo.15193的杂交瘤产生。本专利技术还涉及一种试剂盒，所述试剂盒包括前述抗体。在一些具体的实施方式中，所述试剂盒包括抗体M301和抗体M123，其中，所述抗体M301作为包被抗体，所述抗体M123作为检测抗体。在一些具体的实施方式中，所述抗体M123与辣根过氧化物酶偶联，优选地，通过过碘酸盐氧化法偶联。在一些具体的实施方式中，所述试剂盒至少还包括以下一种或多种：酶标板、洗涤液、封闭液、显色液和终止液。在一些具体的实施方式中，所述洗涤液为包括0.03％v/v～0.07％v/v(优选，0.05％v/v)Tween20的PBS缓冲液。在一些具体的实施方式中，所述封闭液为包括0.7％w/v～1.2％w/v(优选，1％w/v)牛血清白蛋白、0.07％v/v～0.12％v/v(优选，0.1％v/v)Tween20的PBS缓冲液。在一些具体的实施方式中，所述显色液包括底物显色A液和底物显色B液，其中，每500mL底物显色A液包括醋酸钠12～15g(优选为13.6g)、柠檬酸1～2g(优选为1.6g)，每500mL底物显色B液包括：乙二胺四乙酸二钠0.15～0.25g(优选为0.2g)、柠檬酸0.8～1.0g(优选为0.95g)、丙三醇45～55mL(优选为50mL)、TMB·2HCl0.1～0.2g(优选为0.15g)。在一些具体的实施方式中，所述终止液为1.5M～2.5M(优选，2M)硫酸溶液。本专利技术还涉及一种检测植物乳杆菌细菌素的方法，所述方法使用前述抗体，或前述试剂盒对植物乳杆菌蛋白进行检测。在一些具体的实施方式中，所述方法包括：(1)将抗体M301包被至酶标板上；(2)将待测样品、阴性对照和阳性对照分别加入酶标板中，恒温孵育一段时间后，用洗涤液洗涤；(3)加入酶标抗体M123，恒温孵育一段时间后，用洗涤液洗涤；(4)将底物显色A液与底物显色B液等体积混合，加入酶标板中，室温避光孵育一段时间后加入终止液终止反应，并测定其OD450值。在一些具体的实施方式中，所述方法具体包括：(1)以75～125μL/孔(优选为100μL/孔)的量将浓度为0.1μg/mL～30μg/mL(优选为5μg/mL)抗体M301包被至酶标板上；(2)以75～125μL/孔将待测样品、阴性对照和阳性对照分别加入酶标板中，在35℃～40℃(优选为37℃)下，恒温孵育25～35min(优选为30min)，之后用洗涤液洗涤2～4次(优选为3次)；(3)将酶标抗体123按(1:5000)～(1:20000)稀释后(优选为1:10000)，在35℃～40℃(优选为37℃)下，恒温孵育25～35min(优选为30min)，之后用洗涤液洗涤；(4)将底物显色A液与底物显色B液等体积混合，以75～125μL/孔(优选为100μL/孔)的量将混合液加入酶标板中，室温避光孵育10～20min(优选为15min)后加入终止液40μL/孔～60μL/孔(优选为50μL/孔)终止反应，并测定其OD450。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为实施例2所述4只小鼠的免疫效价；图2为实施例5所述双抗夹芯ELISA检测方法的标准曲线。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购买获得的常规产品。下述实施例具体阐述植物乳杆菌单克隆抗体的制备方法以及双抗夹心ELISA检测体系的建立。实施例1抗原的合成及偶联根据植物乳杆菌细菌素蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物乳杆菌细菌素的抗体，其特征在于，所述抗体经氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示蛋白免疫获得。

【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌细菌素的抗体，其特征在于，所述抗体经氨基酸序列如SEQIDNO：1所示蛋白免疫获得。2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体为M301或M123，其中，所述抗体M301由保藏编号为CGMCCNo.15194的杂交瘤产生，所述抗体M123由保藏编号为CGMCCNo.15193的杂交瘤产生。3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述抗体。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括抗体M301和抗体M123，其中，所述抗体M301作为包被抗体，所述抗体M123作为检测抗体。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体M123与辣根过氧化物酶偶联，优选地，通过过碘酸盐氧化法偶联。6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少还包括以下一种或多种：酶标板、洗涤液、封闭液、显色液和终止液。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为包括0.03％v/v～0.07％v/v(优选，0.05％v/v)Tween20的PBS缓冲液；所述封闭液为包括0.7％w/v～1.2％w/v(优选，1％w/v)牛血清白蛋白、0.07％v/v～0.12％v/v(优选，0.1％v/v)Tween20的PBS缓冲液；所述显色液包括底物显色A液和底物显色B液，其中，每500mL底物显色A液包括醋酸钠12～15g(优选为13.6g)、柠檬酸1～2g(优选为1.6g)，每500mL底物显色B液包括：乙二胺四乙酸二钠0.15～0.25g(优选为0.2g)、柠檬酸0.8～1.0g(优选为0.95g)、丙三醇45～55mL(优选为50mL)、TMB·2HCl0.1～0.2g...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢远红，张红星，刘慧，金君华，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京,11