一种重组人PM/Scl100融合蛋白及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种重组人PM/Scl100融合蛋白的制备方法，合成人PM/Scl100基因并在两端添加酶切位点后，亚克隆至克隆载体构建重组质粒；将重组质粒经限制性内切酶消化后，在T4连接酶的作用下，与经过相同限制性内切酶消化后的真核表达载体连接，然后转化大肠杆菌JM109，获得重组载体；将重组载体转化大肠杆菌DH10Bac，获得重组杆粒；将重组杆粒转染进入SF9细胞制得杆状病毒；将杆状病毒转染进入SF9细胞获得重组蛋白；对重组蛋白进行纯化获得所述的重组人PM/Scl100融合蛋白。本发明专利技术能够高效表达、生产重组人PM/Scl100融合蛋白，获得的重组人PM/Scl100融合蛋白的纯度高，收率高。

【技术实现步骤摘要】
一种重组人PM/Scl100融合蛋白及其制备方法
本专利技术属于基因工程和生物工程技术，具体涉及一种重组人PM/Scl100融合蛋白及其制备方法。
技术介绍
系统性硬化症(SSc)是一种病因未明，以小血管结构和功能异常为主要表现，并逐渐出现皮肤和内脏器官的纤维组织增生、硬化，最后萎缩的自身免疫性疾病。该病分为局限型和弥漫型两类。系统性硬化症患者主要存在多种自身抗体，包括抗多发性肌炎-硬化症(PM/Scl)抗体、抗Scl-70抗体、抗着丝点抗体(ACA)、抗核糖核蛋白(RNP)抗体、抗核抗体(ANA)等。近年来由于对此类疾病研究的不断深入以及临床上相关免疫学检测试剂盒不断涌现，发现我国人群中SSc患者不断增多。PM/Scl抗体是在患有多肌炎/硬皮病重叠综合征的患者体内均大量存在，它是针对细胞核PM/Scl大分子复合物的一组异构的自身抗体。研究表明，PM/Scl75和PM/Scl100是其中两个重要的自免抗原。同时，几乎100％的PM/Scl抗体可检测出抗原PM/Scl100，50％-60％的PM/Scl抗体可检测出抗原PM/Scl75。在患有多发性肌炎、硬皮病或多肌炎/硬皮病重叠综合征本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组人PM/Scl100融合蛋白的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）合成人PM/Scl100基因并在两端添加酶切位点后，亚克隆至克隆载体构建重组质粒；（2）将步骤（1）获得的重组质粒经限制性内切酶消化后，在T4连接酶的作用下，与经过相同限制性内切酶消化后的真核表达载体连接，然后转化大肠杆菌JM109感受态细胞，获得重组载体；（3）将步骤（2）获得的重组载体转化大肠杆菌DH10Bac，获得重组杆粒；（4）将步骤（3）获得的重组杆粒转染进入SF9细胞制得杆状病毒；（5）将步骤（4）获得的杆状病毒转染进入SF9细胞获得重组蛋白；（6）对步骤（5）获得的重组蛋白进行纯化获得所述的重组人...

【技术特征摘要】
1.一种重组人PM/Scl100融合蛋白的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）合成人PM/Scl100基因并在两端添加酶切位点后，亚克隆至克隆载体构建重组质粒；（2）将步骤（1）获得的重组质粒经限制性内切酶消化后，在T4连接酶的作用下，与经过相同限制性内切酶消化后的真核表达载体连接，然后转化大肠杆菌JM109感受态细胞，获得重组载体；（3）将步骤（2）获得的重组载体转化大肠杆菌DH10Bac，获得重组杆粒；（4）将步骤（3）获得的重组杆粒转染进入SF9细胞制得杆状病毒；（5）将步骤（4）获得的杆状病毒转染进入SF9细胞获得重组蛋白；（6）对步骤（5）获得的重组蛋白进行纯化获得所述的重组人PM/Scl100融合蛋白。2.根据权利要求1所述的重组人PM/Scl100融合蛋白的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述的合成人PM/Scl100基因的方法为：根据人PM/Scl100kDnucleolarprotein的mRNA序列合成基因序列，然后根据昆虫真核表达系统进行密码子优化，调节GC含量，优化稀有密码子。3.根据权利要求1所述的重组人PM/Scl100融合蛋白的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述的酶切位点为B...

【专利技术属性】
技术研发人员：李庆春，杨阳，钱林，周延庆，
申请(专利权)人：江苏浩欧博生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32