本发明专利技术提供一种磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法。本发明专利技术将过表达带标签的重组抗原的细胞上清液与包被有抗标签抗体的磁微粒共孵育，经磁分离、清洗得到磁微粒‑重组抗原复合物并将其与第一保护液混合得到所述磁微粒化学发光免疫检测试剂，第一保护液的pH值为6～8，其包含1～20mM CaCl2，40～60mM Tris，100～200mM NaCl，0.05％～0.5％表面活性剂，0.05％～0.5％防腐剂和1％～5％BSA。本发明专利技术的制备方法可以很好的保护重组抗原蛋白的三维构象表位，保证了蛋白活性，从而保证检测结果准确度，同时该制备方法操作简单，条件温和，成本低，适合大规模工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于磁微粒化学发光免疫检测，具体涉及一种磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法。
技术介绍
1、化学发光免疫分析(clia)以高灵敏度闻名，可在低浓度下检测分析物，在宽动态范围内提供良好检测限。磁微粒具有操作简便、分离效率高、比表面积大及物理稳定性良好的优点。在检测抗体的化学发光体外诊断试剂盒中，磁微粒常作为固相载体通过化学偶联、生物修饰等作用与抗原结合，定性或定量地对样本中的抗体进行检测。
2、通常在重组抗原表达后，先对蛋白进行亲和层析、离子交换层析等条件较为严苛的纯化操作，再使纯化后的抗原与磁微粒偶联。在蛋白纯化和偶联操作中，剪切力、起泡沫和离子强度的快速变化容易让蛋白失活，导致化学发光免疫分析结果不准确，出现漏检。尤其一些蛋白的抗体识别的是蛋白的三维构象表位，极其在剧烈的处理后三维结构被破坏，例如桥粒芯蛋白-3(desmoglein-3)。另外，由于上述现有方法操作复杂，需要操作熟练的人员，而且流程耗时长，增加了蛋白失活的风险并导致试剂盒制备成本高。
技术实现思路
>1、本专利技术所解本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，将过表达带标签的重组抗原的细胞上清液与包被有抗标签抗体的磁微粒共孵育，经磁分离、清洗得到磁微粒-重组抗原复合物，将所述磁微粒-重组抗原复合物与第一保护液混合得到所述磁微粒化学发光免疫检测试剂，所述第一保护液的pH值为6～8，其包含1～20mM CaCl2，40～60mM Tris，100～200mM NaCl，0.05％～0.5％表面活性剂，0.05％～0.5％防腐剂和1％～5％BSA。
2.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂为TritonX 100、Tween 20或...
【技术特征摘要】
1.一种磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，将过表达带标签的重组抗原的细胞上清液与包被有抗标签抗体的磁微粒共孵育，经磁分离、清洗得到磁微粒-重组抗原复合物，将所述磁微粒-重组抗原复合物与第一保护液混合得到所述磁微粒化学发光免疫检测试剂，所述第一保护液的ph值为6～8，其包含1～20mm cacl2，40～60mm tris，100～200mm nacl，0.05％～0.5％表面活性剂，0.05％～0.5％防腐剂和1％～5％bsa。
2.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂为tritonx 100、tween 20或l23中的一种或多种；和/或，所述防腐剂为proclin300、叠氮钠的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述带标签的重组抗原包括但不限于带标签的桥粒芯蛋白-3；所述标签为avi-tag、his-avi-tag、his-tag、myc-tag中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述过表达带标签的重组抗原的细胞上清液中的带标签的重组抗原的质量为所述包被有抗标签抗体的磁微粒的质量的1％～5％；
5.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述孵育在室温下进行，所述孵育的时间为2.5～4h。
6.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，通过昆虫表达体系制备所述带标签的重组抗原的细胞培养上清液或细胞裂解上...
【专利技术属性】
技术研发人员：马文静，战捷，刘青新，李敏，周生儒，潘萌，李纪阳，
申请(专利权)人：江苏浩欧博生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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