用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用技术方案

本发明专利技术公开了用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用。所述用于生产草酸脱羧酶的重组质粒，包含：草酸脱羧酶基因、分子伴侣基因和调控胞内锰离子浓度的基因。本发明专利技术将所述重组质粒导入大肠杆菌表达菌株和MntP基因缺失的大肠杆菌中，均得到可溶表达且有活性的草酸脱羧酶。并对重组菌株的培养温度和诱导温度进行了优化，发现培养温度为37℃，诱导温度为25℃时，草酸脱羧酶的表达量较高。通过有机溶剂沉淀和硫酸铵沉淀两步简单纯化，草酸脱羧酶比活力能达到45.6U/mg，纯度超过95％。本发明专利技术技术方案具有生产和纯化工艺简单，草酸脱羧酶的表达量和比活力高，易于工业放大，成本低，有利于草酸脱羧酶的工业化生产和应用。

【技术实现步骤摘要】
用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用。
技术介绍
草酸(Oxalicacid)，是生物体的一种代谢产物，又叫乙二酸(Ethanedioicacid)，广泛分布于植物、动物和真菌体中，并在不同的生命体中发挥不同的功能。目前的研究发现至少有100多种植物富含草酸，尤以菠菜、苋菜、甜菜、马齿苋、芋头、茶叶、可可、甘薯和大黄等植物的叶片和种子中含量最高，由于草酸可降低矿质元素的生物利用率，在人体中容易与钙离子形成草酸钙导致肾结石，所以草酸往往被认为是一种矿质元素吸收利用的拮抗物。草酸在人体内不容易被氧化分解掉，经代谢作用后形成的产物，属于酸性物质，可导致人体内酸碱度失去平衡，吃得过多还会中毒。而且草酸在人体内如果遇上钙和锌离子便生成草酸钙和草酸锌，不易吸收而排出体外，影响钙与锌的吸收。儿童生长发育需要大量的钙和锌，如果体内缺乏钙和锌，不仅可导致骨骼、牙齿发育不良，而且还会影响智力发育，过量摄入草酸还会造成人体内血液和尿液中的草酸含量过高，容易与钙离子形成不溶性的草酸钙晶体，草本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于生产草酸脱羧酶的重组质粒，其特征在于，包含：草酸脱羧酶基因、分子伴侣基因、促进锰离子泵入相关的通道蛋白/调控蛋白基因。

【技术特征摘要】
1.用于生产草酸脱羧酶的重组质粒，其特征在于，包含：草酸脱羧酶基因、分子伴侣基因、促进锰离子泵入相关的通道蛋白/调控蛋白基因。2.根据权利要求1所述的用于生产草酸脱羧酶的重组质粒，其特征在于，所述促进锰离子泵入相关的通道蛋白/调控蛋白基因为：来源于大肠杆菌的OxyR基因或与所述OxyR基因编码的蛋白有类似功能的来源于其他物种的基因。3.根据权利要求1所述的用于生产草酸脱羧酶的重组质粒，其特征在于，所述分子伴侣基因为groES-groEL基因，所述分子伴侣基因的启动子选自P43启动子或/和M1-93启动子。4.包含权利要求1～3任一项所述重组质粒的大肠杆菌表达系统。5.根据权利要求4所述的大肠杆菌表达系统，其特征在于，还包含有敲除或抑制或失活MntP基因的宿主菌株。6.根据权利要求4所述的大肠杆菌表达系统，其特征在于，所述宿主菌株为Origami2(D...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪小锋，吴玉峰，汪卫，刘艳红，陈火晴，
申请(专利权)人：武汉康复得生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42