去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了本发明专利技术提供的去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用。相对于现有技术，本发明专利技术提供了去甲斑蝥素治疗破骨细胞过度激活相关疾病的新用途，去甲斑蝥素可通过下调p‑ERK和p‑p38的磷酸化水平，进而抑制破骨细胞的分化过程，表明去甲斑蝥素能够治疗破骨细胞过度激活相关疾病。

【技术实现步骤摘要】
去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用
本专利技术涉及去甲斑蝥素的新应用，特别涉及去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用。
技术介绍
破骨细胞是细胞内唯一的“噬骨”细胞。该细胞属于高度分化的多核细胞，直径可达100μm。活化的破骨细胞具有明显极化特性，破骨细胞极化时细胞核向细胞顶端移动，该侧在骨表面的对侧，称为基侧膜，同时在贴近骨表面的一侧其细胞膜会折叠形成大量的微细的指状突出，称为皱褶缘，它可以增加该侧细胞膜的表面积以便细胞向骨表面释放大量的降解酶和酸性质粒。位于破骨细胞皱褶缘的外围有一个封闭带，它能够紧紧的吸附在骨表面，将细胞覆盖的骨表面区域包括皱褶缘在内的区域封闭起来形成一个密闭的微环境，从而构成一个有利于骨吸收的局部密闭腔隙。在生理状况下，破骨细胞引发的骨吸收与成骨细胞引起的骨形成共同维持着骨代谢稳态。当破骨细胞功能过度活跃时，骨吸收亢进，将会导致一系列骨吸收过度活跃所致疾病，如骨质疏松症、骨溶解、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨髓炎、牙周炎、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症、成骨不全、牙槽骨缺失、免疫抑制治疗或长期使用糖皮质激素的引起的骨质丢失等。靶向抑制破骨细胞的活性和功能是治疗此类疾病最有效的策略之一。目前针对临床上常用的抑制破骨细胞过度激活的药物主要包括双膦酸盐(Bisphosphonate)、雌激素(Estrogen)及其受体调节剂(SERMs)、降钙素(Calcitonin)等，其中双膦酸盐类药物应用最广泛。已有的这些药虽然有一定效果，但仍有不同程度的局限，比如唑来膦酸(双膦酸盐类)可能会引发肾毒性和心脏毒性等副作用；迪诺塞麦(Denosumab)长期使用可能对免疫系统功能产生潜在影响，且价格昂贵，并不适用于大多数家庭。因此研发更为经济且副作用小的药物是必不可少的。斑蝥素(Cantharidin，CTD)是从鞘翅目芫著科昆虫斑蝥中提取的有效成分，对肝癌、肺癌、食管癌、结肠癌等有一定的治疗效果，但是对泌尿系统有较强的刺激作用，去甲斑蝥素(Norcantharidin，NCTD)是将斑蝥素去1、2位甲基去除后人工合成的，同样具有抗癌作用，但其副作用相对于斑蝥素较低，已有文献报道去甲斑蝥素具有抑制肿瘤血管生成和抗骨髓瘤的作用，但其对破骨细胞的影响尚未见任何报道。
技术实现思路
专利技术目的：为解决上述技术问题，本专利技术目的在于提供了去甲斑蝥素(NCTD)制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用。技术方案：本专利技术提供了去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用。所述破骨细胞过度激活相关疾病为骨质疏松症、骨溶解、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨髓炎、牙周炎、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症、成骨不全、牙槽骨缺失、免疫抑制治疗或长期使用糖皮质激素的引起的骨质丢失。所述去甲斑蝥素能够通过下调p-ERK和p-p38的磷酸化水平抑制MAPK信号通路。所述药物是以所述去甲斑蝥素作为单一成分所制成的药物。所述药物是以所述去甲斑蝥素作为活性成分，加上药学上可接受的辅料所制成的药物。所述药物选自注射剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊或口服液所述药物选自注射剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊或口服液，但不限于上述剂型。本专利技术所述去甲斑蝥素在治疗破骨细胞过度激活相关疾病时，可以单独使用，也可以与其他药物配合同时使用，或者与其他药物一起制成复方制剂使用，都可以达到治疗类风湿性关节炎的目的。本专利技术在制备不同剂型时加入所需的各种常规辅料(即药学上可接受的辅料)，例如稀释剂、黏合剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、矫味剂、包合材料、吸附材料等以常规的制剂方法制备成任何一种常用的制剂，例如可以是注射剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂等。本专利技术明确了NCTD对破骨细胞分化的抑制作用，并进一步阐明了分子机制。结果显示，NCTD可通过下调p-ERK和p-p38的磷酸化水平，进而抑制破骨细胞的分化过程。这些结果强有力提示，NCTD对破骨细胞过度激活相关疾病(如骨质疏松症、骨溶解、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨髓炎、牙周炎、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症、成骨不全、牙槽骨缺失、免疫抑制治疗或长期使用糖皮质激素的引起的骨质丢失等)具备潜在的治疗作用。技术效果：相对于现有技术，本专利技术提供了去甲斑蝥素治疗破骨细胞过度激活相关疾病的新用途，NCTD可通过下调p-ERK和p-p38的磷酸化水平，进而抑制破骨细胞的分化过程，表明去甲斑蝥素能够治疗破骨细胞过度激活相关疾病。附图说明图1：去甲斑蝥素对BMMs细胞活性的影响。(A)去甲斑蝥素结构式。(B)NCTD(0μM、5μM、10μM、20μM、40μM、80μM、160μM、320μM)处理BMMs48h后，检测OD490mm。(C)NCTD对BMMs的半抑制浓度(显著性差异：*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001vsRANKL处理但NCTD未处理组)图2：NCTD明显抑制破骨细胞分化(A,B)在96孔板中用含有RANKL、M-CSF和不同浓度的NCTD(0μM、1μM、2.5μM、5μM、10μM)诱导BMMs分化形成破骨细胞，并进行TRAP染色。(C)TRAP+阳性细胞计数(细胞核数量大于等于3)。(D)每个破骨细胞平均面积统计。(显著性差异：*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001vsRANKL处理但NCTD未处理组)图3：NCTD在破骨细胞形成早期发挥抑制作用。在破骨细胞形成的不同时间点用5μMNCTD处理细胞，TRAP染色后比较破骨细胞数目和面积。(A)各药物处理组TRAP染色代表性图片；(B)不同药物处理组破骨细胞数目和面积统计。(显著性差异：*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001vsControl)图4：去甲斑蝥素对BMMs细胞凋亡影响。(A)BMMs分别用0μM、2.5μM、5μM和10μM的NCTD处理24h，AnnexinV-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况。图5：NCTD能抑制破骨细胞形成过程中标志性基因的表达。分别用不同浓度NCTD处理细胞，RANKL诱导5天后提取总RNA，用Q-PCR检测CTSK(A)、CTR(B)、TRAP(C)、NFATc1(D)、c-Fos(E)表达量。(*P<0.05,**P<0.01和***P<0.001vsRANKL处理但NCTD未处理组)图6：NCTD抑制RANKL刺激的MAPK信号通路激活(A)BMMs无血清饥饿3h，用不同浓度NCTD处理1h后，分别用RANKL(100ng/ml)刺激15min，提取细胞总蛋白，进行WesternBlot检测。(B)实验重复3次后，对实验结果进行灰度分析。(显著性差异：*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001vsRANKL处理但NCTD未处理组)具体实施方式下面结合附图进一步描述本专利技术的技术解决方案。下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用。2.根据权利要求1所述的去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用，其特征在于，所述破骨细胞过度激活相关疾病为骨质疏松症、骨溶解、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨髓炎、牙周炎、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症、成骨不全、牙槽骨缺失、免疫抑制治疗或长期使用糖皮质激素的引起的骨质丢失。3.根据权利要求1所述的去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关疾病药物中的应用，其特征在于，所述去甲斑蝥素能够抑制MAPK信号通路。4.根据权利要求3所述的去甲斑蝥素在制备治疗破骨细胞过度激活相关...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘梅，王静，孙胜楠，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32