一种消毒散口服液HPLC指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术公开一种消毒散口服液HPLC指纹图谱的建立方法，该方法包括供试品溶液的制备、HPLC色谱条件的确定及HPLC指纹图谱的制作。其中色谱条件为：色谱柱：依利特C18色谱柱(4.6×250nm，5μm)；流动相：甲醇‑乙腈‑0.05％磷酸溶液；梯度洗脱；检测波长为250nm，280nm；流速：1.0mL·min

【技术实现步骤摘要】
一种消毒散口服液HPLC指纹图谱的建立方法
本专利技术属于中药
，具体涉及一种消毒散口服液指纹图谱的建立方法。
技术介绍
中药指纹图谱作为一项质量控制技术，能全面、综合地控制药品的质量，具有特征明显、专属性强、重现性好等特点。随着中医药的推广应用，指纹图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已成为国内外广泛接受的一种对中药质量进行控制和评价的技术。消毒散口服液是有由牛蒡子、荆芥穗、甘草3味中药组成，处方源自元代曾世荣的《活幼心书》，具有“解急惊风毒，赤紫丹瘤，壮热狂躁，睡卧不安，胸膈满闷，咽喉肿痛，九道有血妄行，及遍身疮疥”。药理研究表明，其具有镇咳、抗炎、镇痛等功效。目前还没查到有关消毒散口服液的质量研究和标准提升相关的文献资料及明确的检测方法，而对其中药味(牛蒡子、荆芥穗、甘草)，多参考中国药典给出的方法，即单独对其中各药味进行薄层鉴别及对某些药味的主要成分进行含量测定，不能对其中多味药材的多个主要化学成分进行全面的、系统的检测和控制。目前，以指纹图谱控制消毒散口服液的质量，国内外尚未见专利公开及文献报道。本专利技术中我们对消毒散口服液进行了指纹图谱试验研究，建立了指纹图谱测定方法，并对建立的方法进行了精密度、重复性等方法学验证试验，结果表明方法稳定可行。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种消毒散口服液HPLC指纹图谱的建立方法，用于对消毒散口服液质量进行控制和评价。本专利技术的HPLC指纹图谱的建立方法包括：1供试品溶液的制备：精密吸取消毒散口服液适量，置量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。2对照品溶液的制备：分别取甘草苷、牛蒡苷、牛蒡子苷元，甘草酸铵，胡薄荷酮对照品适量，加入甲醇制成每1mL分别约含甘草苷5～15μg、牛蒡苷230～270μg、牛蒡子苷元5～15μg、甘草酸铵230～270μg、胡薄荷酮40～70μg的混合对照品溶液；3HPLC色谱条件和系统适应性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇—乙腈—0.05％～0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为：0.5mL/min～1.5mL/min；检测波长：240nm～260nm，270nm～290nm；柱温：25℃～35℃；4测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。优选的，本专利技术的HPLC指纹图谱的最佳建立方法如下：1供试品溶液的制备：取本品，精密吸取2mL，置25mL量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用。2对照品溶液的制备：分别精密称取甘草苷、牛蒡苷、牛蒡子苷元、甘草酸铵、胡薄荷酮对照品适量，加甲醇制成每1mL分别约含甘草苷10μg、牛蒡苷250μg、牛蒡子苷元10μg、甘草酸铵250μg、胡薄荷酮60μg的混合对照品。3HPLC色谱条件和系统适应性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，梯度洗脱表见表1，检测波长为250nm，280nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样量10μL；理论踏板数按牛蒡苷计不得低于10000.表1梯度洗脱条件4测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到一种消毒散口服液的指纹图谱。将数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》进行评价，得到对照图谱。其中所述一种消毒散口服液HPLC指纹图谱，共有14个特征峰，归属于牛蒡子的特征峰为：3号峰，4号峰，5号峰，7号峰，8号峰，9号峰；归属于荆芥穗的特征峰为：6号峰，14号峰；归属于甘草的特征峰为：1号峰，2号峰，10号峰，11号峰，12号峰，13号峰。其中所述一种消毒散口服液HPLC指纹图谱的建立方法，在250nm，280nm波长检测下利用各对照品对主要峰进行比较确定：2号峰为甘草苷，5号峰为牛蒡苷，9号峰为牛蒡子苷元，12号峰为甘草酸，14号峰为胡薄荷酮。其中所述一种消毒散口服液HPLC指纹图谱，以牛蒡苷为参照峰S，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述的相对保留时间峰1-3在第一规定值的±10％之内，峰4-13在第一规定值的±5％之内。所述的第一规定值为0.254(峰1)，0.275(峰2)，0.338(峰3)，0.549(峰4)，1.000(峰5,S)，1.402(峰6)，1.424(峰7)，1.447(峰8)，1.457(峰9)，1.475(峰10)，1.492(峰11)，1.522(峰12)，1.573(峰13)，1.617(峰14)。其中所述一种消毒散口服液HPLC指纹图谱，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》进行评价，供试品批与批间的相似度均大于0.90。本专利技术提供的消毒散口服液HPLC指纹图谱建立方法经精密度、重复性和稳定性测试，测试结果表明，该方法的精密度、稳定性和重复性良好，可对消毒散口服液的质量进行全面地评价，有效地保证了成品的质量，可克服现有技术检测指标单一，不能反映内在质量的特点。附图说明图1是一种消毒散口服液6批样品的HPLC指纹图谱(250nm)。图2是一种消毒散口服液6批样品的HPLC指纹图谱(280nm)。图3是一种消毒散口服液的HPLC对照图谱(250nm)。图4是一种消毒散口服液的HPLC对照图谱(280nm)。图5是一种消毒散口服液的HPLC对照品图谱。图6是一种消毒散口服液的HPLC甘草苷对照品。图7是一种消毒散口服液的HPLC牛蒡苷对照品。图8是一种消毒散口服液的HPLC牛蒡子苷元对照品。图9是一种消毒散口服液的HPLC甘草酸对照品。图10是一种消毒散口服液的HPLC胡薄荷酮对照品。图11是一种消毒散口服液的HPLC特征峰归属图。具体实施方式下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。本专利技术提供了一种消毒口服液的HPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：(1)取消毒口服液适量，与溶剂混合后，得到供试品溶液；(2)取甘草苷、牛蒡苷、牛蒡子苷元，甘草酸铵，胡薄荷酮对照品适量，用溶剂溶解，混合，得对照品溶液；(3)分别将对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行检测，记录色谱，用指纹图谱软件对图谱进行处理，得到消毒散口服液指纹图谱。在本专利技术中，供试品溶液按照以下方法配制：精密吸取消毒散口服液适量，置量瓶中，加入溶剂稀释，混匀，过滤，得到供试品溶液。在本专利技术提供的上述配制供试品溶液的方法中，所精密吸取消毒散口服液最优量为2mL；所述的容量瓶为25mL；所述的溶剂为甲醇；所述过滤的滤膜孔径为0.1～0.45μm，优选0.22μm。在本专利技术中，对照品溶液按照以下方法配制：取甘草苷、牛蒡苷、牛蒡子苷元、甘草酸铵、胡薄荷酮对照品适量，用溶剂溶解，混合，得对照品溶液；所述溶剂优选为甲醇；所述的对照品溶液中，甘草苷、牛蒡苷、牛蒡子苷元，甘草酸铵，胡薄荷酮的含量分别为甘草苷5～15μg/mL、牛蒡苷230～270μg/mL、牛蒡子苷元5～15μg/mL、甘草酸铵230～270μg/mL、胡薄荷酮40～70μg/mL的混合对照品溶液，优选为甘草苷10μg/mL、牛蒡苷250μg/mL、牛蒡子苷元10μg/mL、甘草本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种消毒散口服液HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一，供试品溶液的制备：取消毒散口服液，加溶剂制成供试品溶液；步骤二，对照品溶液的制备：取甘草苷、牛蒡苷、牛蒡子苷元、甘草酸铵、胡薄荷酮对照品，加溶剂溶解，制成混合对照品；步骤三，HPLC色谱条件和系统适应性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇—乙腈—磷酸溶液为流动相；步骤四，测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。

【技术特征摘要】
1.一种消毒散口服液HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一，供试品溶液的制备：取消毒散口服液，加溶剂制成供试品溶液；步骤二，对照品溶液的制备：取甘草苷、牛蒡苷、牛蒡子苷元、甘草酸铵、胡薄荷酮对照品，加溶剂溶解，制成混合对照品；步骤三，HPLC色谱条件和系统适应性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇—乙腈—磷酸溶液为流动相；步骤四，测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。2.根据权利要求1所述一种消毒散口服液HPLC指纹图谱的建立方法，其特征是：步骤一，供试品溶液的制备：精密吸取消毒散口服液1mL～3mL，置量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；步骤二，对照品溶液的制备：取甘草苷、牛蒡苷、牛蒡子苷元、甘草酸铵、胡薄荷酮对照品适量，加入甲醇制成每1mL分别含甘草苷5～15μg、牛蒡苷230～270μg、牛蒡子苷元5～15μg、甘草酸铵230～270μg、胡薄荷酮40～70μg的混合对照品溶液；步骤三，HPLC色谱条件和系统适应性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇—乙腈—0.05％～0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为：0.5mL/min～1.5mL/min；检测波长：240nm～260nm，270nm～290nm；柱温：25℃～35℃；步骤四，测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。3.根据权利要求2所述一种消毒散口服液HPLC指纹图谱的建立方法，其特征是：步骤一，供试品溶液的制备：精密吸取消毒散口服液2mL，置25mL的量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；步骤二，对照品溶液的制备：分别精密称取甘草苷、牛蒡苷、牛蒡子苷元、甘草酸铵、胡薄荷酮对照品适量，加甲醇制成每1mL分别约含甘草苷10μg、牛蒡苷250μg、牛蒡子苷元10μg、甘草酸铵250μg、胡薄荷酮60μg的混合对照品及单独对照品；步骤三，HPLC色谱条件和系统适应性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速：1.0mL·min-1...

【专利技术属性】
技术研发人员：江东龙，谭道鹏，卢禁，曾伟珍，
申请(专利权)人：深圳海王医药科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44