天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法技术

本发明专利技术提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，属于医用生物材料技术领域。该方法包括：将在动物身上截取的小肠进行清洗；将清洗干净后的小肠置入密闭容器，于‑80℃液氮中快速冷冻，半小时后取出解冻后套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，剪开小肠浆膜层，用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除，翻转小肠后刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜。将得到的单层及多层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到不同厚度的天然管状小肠脱细胞基质膜。本发明专利技术的制备方法简单，得到的小肠脱细胞基质膜为天然管状。

【技术实现步骤摘要】
天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法
本专利技术属于医用生物材料
，具体涉及一种天然管状小肠脱细胞基质膜制备方法。
技术介绍
小肠脱细胞基质膜(ECM)生物补片，是指取自同种或者异种的组织，经脱细胞处理去除组织中含有的各种细胞而完整保留细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)的三维框架结构并用于修复机体组织的材料。在利用ECM生物补片进行组织器官修复或者重建时，ECM能够起到“模具”的作用。ECM生物补片对宿主的ECM受体传递生物信息，通过整合素、层粘连蛋白受体等诱导并刺激相应的组织器官细胞在其表面附着，从边缘向中心移行，并诱导细胞沿着“模具”的形状分化和生长，最终实现组织器官的再生，与此同时，ECM被逐渐降解并完全吸收，在宿主体内无残留。ECM生物补片的临床应用范围广泛，可以应用于腹壁疝、胸膜、颅骨、神经、内脑膜、消化道以及皮肤等的修复。但是，由于天然的细胞外基质材料制成的生物补片过于柔软，机械性能差，为手术操作带来很多不便，在多种组织的修复上，细胞外基质材料很难实现降解速度与组织再生速度相一致，往往因材料降解过快而导致移植失败。近年来，随着科技的快速发展，针对ECM生物补片制备中如何避免上述问题的产生提出很多的改进。通常是对材料进行化学交联处理，国外对管状ECM生物补片制备的研究较多，在制备管状ECM生物补片时，国外多采用片状ECM生物补片缝制成管状，或者是将片状ECM生物补片像缠绷带一样围绕柱状模具缠绕成管状。但是这种通过缝制或者缠绕而成的管状ECM生物补片，其缝合缘的可靠性、管内壁的光滑性以及管壁的均匀程度都会对组织的修复或者重建造成影响。我国对ECM生物补片的研究和应用起步较晚，制备工艺比较落后，特别是针对天然管状ECM生物补片的制备和应用研究尚处于空白。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜制备方法，该制备方法简单，得到的小肠脱细胞基质膜为天然管状，对人工管状器官的制取起到很好的奠基作用。本专利技术首先提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，该方法包括：步骤一：将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗，将清洗干净后的小肠置入密闭容器，于-80℃液氮中快速冷冻，半小时后取出解冻备用；步骤二：将解冻后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，剪开小肠浆膜层，然后用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除，翻转小肠后刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜；步骤三：将步骤二得到的多层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到单层天然管状小肠脱细胞基质膜。优选的是，所述的步骤一的动物为猪、牛、绵羊、鼠、马。优选的是，所述的步骤一的清洗是在4℃生理盐水中清洗。优选的是，所述的步骤一冷冻过程具体为：将清洗干净后的小肠置入密闭容器，于-80℃液氮中快速冷冻，半小时后取出解冻。优选的是，所述的步骤三冻干温度为-80℃，冻干时间为24h。优选的是，所述的步骤四的灭菌是将密封好的多层管状小肠脱细胞基质膜经直线加速以8000拉德放射剂量照射灭菌。本专利技术提供上述制备方法得到的天然管状小肠脱细胞基质膜。本专利技术的有益效果本专利技术首先提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，本专利技术的方法可以直接制备得到天然管状的小肠脱细胞基质膜。该管状的小肠脱细胞基质膜由于是天然的，管状的，可作为细胞生长的支架。本专利技术的天然管状ECM具有管状均匀性好的特点，ECM无明显破坏，说明该制取方法能制取优质的天然管状小肠脱细胞基质膜。本专利技术还提供上述制备方法得到天然管状小肠脱细胞基质膜，该天然管状小肠脱细胞基质膜，就局部组织来说同片状ECM其它性能相同，所不同的是天然管状无需缝合，基质膜横向，纵向，等各个方向的拉伸变形都与小肠相同，而缝合后的ECM由于对接缝合会造成局部基质膜在不同方向拉伸过程中变形受限。因此天然管状ECM，对于人类人工食管及其他人工管状器官的制取起到入门作用，为下一步人工食管的研究奠定基础。附图说明图1为本专利技术实施例1制备得到的单层天然管状猪小肠脱细胞基质膜充气前的照片图。图2为本专利技术实施例1制备得到的单层天然管状猪小肠脱细胞基质膜充气后的照片图。图3为本专利技术实施例1制备得到的单层天然管状猪小肠脱细胞基质膜真空干燥后的照片图。图4为本专利技术实施例1制备得到的单层的天然管状猪小肠脱细胞基质膜放1000倍下电镜下扫描照片。图5为本专利技术实施例1制备得到的单层的天然管状猪小肠脱细胞基质膜放5000倍下电镜下扫描照片。具体实施方式本专利技术首先提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，该方法包括：步骤一：将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗，将清洗干净后的小肠置入密闭容器，于-80℃液氮中快速冷冻，半小时后取出解冻备用；步骤二：将解冻后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，尽可能多的均匀的剪开小肠浆膜层，然后用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除；刮除干净后，翻转小肠后再刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜。步骤三：将步骤二得到的单层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到单层天然管状小肠脱细胞基质膜。按照本专利技术，所述的将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗，优选是将小肠取出后立即浸入4℃生理盐水中进行清洗，所述的动物没有特殊限制，优选为猪、牛、绵羊、鼠或马。按照本专利技术，所述的将小肠浸入生理盐水清洗后的小肠快速冷冻，优选是将将清洗干净后的小肠置入密闭容器，于-80℃液氮中快速冷冻，冷冻时间为半小时；按照本专利技术，将解冻后的小肠套置在环形管状支架上，所述的支架没有特殊限制，能起到将小肠支撑的作用即可，然后用剪刀剪开小肠浆膜层，尽可能多地均匀的剪开小口，然后用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除。所述的有机玻璃板的来源为商购，有机玻璃板的边缘切口要适中，不能太过锐利，否则对基质膜有损伤，不能过于圆盾，细胞刮除不全。在用有机玻璃板进行刮除时，用力不可过猛，用力过猛会损伤基质膜，再用同法刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除。当无组织脱落时，充分冲洗标本，再行刮除，并留取刮除物，及刮取的液体，将留取的刮除物及刮取的液体离心，取离心后的沉淀物涂片，染色，高倍镜下观察，如无细胞成分，即刮除完成，得到单层管状小肠脱细胞基质膜。按照本专利技术，将上述得到的多层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到单层天然管状小肠脱细胞基质膜。所述的冻干温度优选为-80℃，冻干时间优选为24h；所述灭菌优选是将密封好的单层管状小肠脱细胞基质膜经直线加速以8000拉德放射剂量照射灭菌。本专利技术提供上述制备方法，该方法可以得到的优质的天然管状小肠脱细胞基质膜。以下实施例用于说明本专利技术，但不用于限制本专利技术的范围，若未特别指明，本实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。单层天然管状ECM的制备取地产白猪1头，体重在50-100Kg，持续乙醚吸入麻醉下，选取腹中线切口，严格备皮，消毒，铺无菌巾单，切割闭合器截取猪小肠，每段长为15厘米，取出后立即浸入4℃生理盐水中，并以生理盐水洗净小肠。将清洗干净后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，其特征在于，该方法包括：步骤一：将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗，将清洗干净后的小肠置入密闭容器，于‑80℃液氮中快速冷冻，半小时后取出解冻备用；步骤二：将解冻后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，剪开小肠浆膜层，然后用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除，翻转小肠后刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜；步骤三：将步骤二得到的单层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到单层天然管状小肠脱细胞基质膜。

【技术特征摘要】
1.一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，其特征在于，该方法包括：步骤一：将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗，将清洗干净后的小肠置入密闭容器，于-80℃液氮中快速冷冻，半小时后取出解冻备用；步骤二：将解冻后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，剪开小肠浆膜层，然后用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除，翻转小肠后刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜；步骤三：将步骤二得到的单层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到单层天然管状小肠脱细胞基质膜。2.根据权利要求1所述的一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩春山，冯永刚，王图慧，薛锦儒，孙宏斌，张乐宁，崔建华，张丽萍，冯敏，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22