一种软组织修复材料及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种软组织修复材料及其制备方法，属于生物医用材料加工技术领域。本发明专利技术提供的制备方法包括以下步骤：1)去除掉哺乳动物小肠组织上的小肠黏膜、肌层和浆膜，用含抗生素的无菌缓冲液冲洗3～5次，得到冲洗后的小肠黏膜下层组织；2)裁剪为段，沿中线剖开、展平，得到前处理小肠黏膜下层组织；3)置于含表面活性剂和核酸酶的无菌缓冲液中，37℃振荡处理1～4h，得到脱细胞小肠黏膜下层组织；4)振荡清洗，切割，干燥，得到干燥后的中央基质膜；5)辐照灭菌，得到软组织修复材料。本发明专利技术制备方法能够得到安全有效的并具有良好生物活性和生物相容性的软组织修复材料。

A soft tissue repair material and its preparation method

The invention relates to a soft tissue repair material and a preparation method, belonging to the field of biomedical material processing technology. The preparation method of the invention comprises the following steps: 1) removing the small intestinal mucosa, muscular layer and serosa on the small intestinal tissue of mammals, washing the small intestinal submucosa 3-5 times with sterile buffer containing antibiotics, and obtaining the washed small intestinal submucosa tissue; 2) cutting into segments, cutting and flattening along the middle line, and obtaining the pre-treated small intestinal submucosa layer. Tissue; 3) placed in a sterile buffer containing surfactants and nucleases, shaking at 37 C for 1-4 hours to obtain acellular small intestinal submucosa tissue; 4) shaking cleaning, cutting, drying, to obtain the dry central matrix membrane; 5) irradiation sterilization, to obtain soft tissue repair materials. The preparation method of the invention can obtain a safe and effective soft tissue repair material with good biological activity and biocompatibility.

【技术实现步骤摘要】
一种软组织修复材料及其制备方法
本专利技术涉及生物医用材料加工
，具体涉及一种软组织修复材料及其制备方法。
技术介绍
用于组织修复的理想支架材料需要为种植细胞或体内细胞的再生提供与自体组织细胞外基质相似的微环境(包括胞外基质的蛋白组成、结构和生物力学特性)。由于天然细胞外基质复杂精细的微观组织结构和现有技术的局限性，利用人工的方法制备替代天然细胞外基质的材料仍然是一个难题。利用脱细胞的方法，从异体组织中去除细胞成分，保留天然细胞外基质为解决这一难题提供了新的有效解决途径。小肠黏膜下层主要以细胞外基质成分为主，含有少量细胞和部分较大的血管和淋巴管组织，自身具有低免疫原性、抗微生物活性的特点，是制备脱细胞外基质材料的优质来源。随着生命科学和现代医学的发展，脱细胞方法已经得到了长足发展。但脱细胞技术仍旧处于探索阶段，缺少规范化的体系和标准。存在这灭毒工艺不当，造成细胞外基质蛋白失活；处理时间过长，造成组织细胞因子和大量可溶性蛋白流逝；选材不当，待脱细胞处理的组织主要由细胞结构构成，胞外基质含量少，无法进行高效的脱细胞处理；处理方法不当，组织过厚，不能完全去除内部细胞成分，造成潜在的免疫源；所选试剂不当，例如强酸强碱对蛋白造成不可逆的变性，有毒试剂残留体内造成潜在风险。中国专利申请号为200710177285.6的专利技术专利涉及一种SIS组织修复材料的制备方法。虽然对小肠黏膜下层组织达到了脱细胞效果，但在脱细胞过程中使用了大量有机溶剂例如过氧乙酸，甲醇，氯仿和甲烷等，这些试剂不仅对组织的生物活性造成一定程度不可逆的变性而且试剂的残留对体内移植有着潜在的风险。中国专利申请号为200810150792.5的专利技术专利涉脱细胞小肠黏膜下层生物材料的制备方法，同样存在残留试剂具有潜在生物毒性和强碱性脱细胞环境造成生物活性降低的不足。目前仍缺乏一种安全性高、生物活性好的生物材料的制备方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种软组织修复材料及其制备方法。本专利技术采用小肠黏膜下层组织为材料，应用更加安全高效的脱细胞方法，提供了一种安全有效的并具有良好生物活性、生物相容性和适当的生物降解速率的软组织修复材料。本专利技术提供了一种软组织修复材料的制备方法，包括以下步骤：1)去除掉哺乳动物小肠组织上的小肠黏膜、肌层和浆膜，得到小肠黏膜下层组织，用含抗生素的无菌缓冲液冲洗3～5次，得到冲洗后的小肠黏膜下层组织；2)将步骤1)得到的冲洗后的小肠黏膜下层组织裁剪为不长于5cm的段，沿中线剖开、展平，浸泡于无菌缓冲液中，得到前处理小肠黏膜下层组织；3)将步骤2)得到的前处理小肠黏膜下层组织置于含质量百分含量为0.2～1％表面活性剂和200～600U/mL核酸酶的无菌缓冲液中，37℃振荡处理1～4h，得到脱细胞小肠黏膜下层组织；所述表面活性剂包括生物表面活性剂；4)将步骤3)得到的脱细胞小肠黏膜下层组织置于无菌缓冲液中，振荡清洗6～8次，每次5～10min，将清洗后的小肠黏膜下层组织切割，留取中央基质膜，干燥，得到干燥后的中央基质膜；5)将所述干燥后的中央基质膜辐照灭菌，得到软组织修复材料。优选的是，所述小肠组织包括猪小肠组织。优选的是，所述无菌缓冲液包括PBS缓冲液、D-Hanks缓冲液或Tris-HCl缓冲液。优选的是，所述抗生素包括庆大霉素、青链霉素或妥布霉素。优选的是，步骤3)所述所述生物表面活性剂包括氨基酸表面活性剂或槐糖脂，所述氨基酸表面活性剂包括月桂酸肌氨酸或椰油酰谷氨酸钠盐。优选的是，步骤4)所述切割为沿自然脉络纹理进行切割，所述自然脉络纹理包括可见血管网络、淋巴管网络和神经网络。本专利技术还提供了基于上述技术方案所述制备方法得到的软组织修复材料。本专利技术还提供了上述技术方案所述软组织修复材料作为原材料或组成部分，在制备药品或医疗器械中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述软组织修复材料在制备非角化的上皮和内皮损伤或缺失后替代品中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述软组织修复材料在体外3D细胞培养和构建研究模型中的应用。本专利技术提供了一种软组织修复材料的制备方法。本专利技术在维持小肠黏膜下层组织三维组织构造不变的前提下，彻底清除了细胞成分，得到具有完整的三维组织构造的小肠黏膜下层组织基质；本专利技术选择肠黏膜下层组织中细胞成分最少的中央基质膜脱细胞过程所用试剂对组织和宿主无毒无害，保证了脱细胞材料的生物活性和产品的安全性；且本专利技术方法简便、高效、经济、合理，整个工艺过程属于清洁化制备，对环境无污染。本专利技术方法采用小肠黏膜下层组织为材料，应用更加安全高效的脱细胞方法，提供了一种安全有效的并具有良好生物活性和生物相容性的软组织修复材料。试验结果表明，本专利技术制备方法在有效维持组织胞外基质的微观结构和蛋白活性的基础上，有效去除细胞成分，移植后无明显免疫排斥反应，同时具有材料来源广泛、易得，价格低廉的优点。附图说明图1本专利技术提供的小肠黏膜下层组织裁剪时中线示意图；图2为本专利技术实施例1提供的显微观察结果图；图3为本专利技术实施例1提供的不同部位软组织修复材料的扫描电子显微镜照片结果图；图4为本专利技术实施例1提供的猪小肠黏膜下层组织DNA含量和脱细胞处理后猪小肠黏膜下层组织中的DNA含量对比图；图5为本专利技术实施例2提供的四只新西兰大白兔用软组织修复材料修复结膜缺损一周后的照片。具体实施方式本专利技术提供了一种软组织修复材料的制备方法，包括以下步骤：1)去除掉哺乳动物小肠组织上的小肠黏膜、肌层和浆膜，得到小肠黏膜下层组织，用含抗生素的无菌缓冲液冲洗3～5次，得到冲洗后的小肠黏膜下层组织；2)将步骤1)得到的冲洗后的小肠黏膜下层组织裁剪为不长于5cm的段，沿中线剖开、展平，浸泡于无菌缓冲液中，得到前处理小肠黏膜下层组织；3)将步骤2)得到的前处理小肠黏膜下层组织置于含质量百分含量为0.2～1％表面活性剂和200～600U/mL核酸酶的无菌缓冲液中，37℃振荡处理1～4h，得到脱细胞小肠黏膜下层组织；所述表面活性剂包括氨基酸表面活性剂或生物表面活性剂；4)将步骤3)得到的脱细胞小肠黏膜下层组织置于无菌缓冲液中，振荡清洗6～8次，每次5～10min，将清洗后的小肠黏膜下层组织切割，留取中央基质膜，干燥，得到干燥后的中央基质膜；5)将所述干燥后的中央基质膜辐照灭菌，得到软组织修复材料。本专利技术制备过程优选在无菌环境下进行，更优选在无菌超净工作台中进行。本专利技术去除掉哺乳动物小肠组织上的小肠黏膜、肌层和浆膜，得到小肠黏膜下层组织，用含抗生素的无菌缓冲液冲洗3～5次，得到冲洗后的小肠黏膜下层组织。本专利技术对去除的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员处理小肠常规方法即可。本专利技术对所述小肠组织的来源没有特殊的限定，采用常规市售小肠组织即可，所述小肠组织优选为健康的、新鲜的、无病毒感染的、无病史的哺乳动物小肠组织。在本专利技术中，所述小肠组织优选包括猪小肠组织。在本专利技术中，所述无菌缓冲液包括PBS缓冲液、D-Hanks缓冲液或Tris-HCl缓冲液，当所述无菌缓冲液为Tris-HCl缓冲液时，所述Tris-HCl缓冲液的pH值优选为7.4。本专利技术对所述PBS缓冲液、D-Hanks缓冲液和Tris-HCl缓冲液的制备方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的常规PBS缓冲液、D-H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种软组织修复材料的制备方法，包括以下步骤：1)去除掉哺乳动物小肠组织上的小肠黏膜、肌层和浆膜，得到小肠黏膜下层组织，用含抗生素的无菌缓冲液冲洗3～5次，得到冲洗后的小肠黏膜下层组织；2)将步骤1)得到的冲洗后的小肠黏膜下层组织裁剪为不长于5cm的段，沿中线剖开、展平，浸泡于无菌缓冲液中，得到前处理小肠黏膜下层组织；3)将步骤2)得到的前处理小肠黏膜下层组织置于含质量百分含量为0.2～1％表面活性剂和200～600U/mL核酸酶的无菌缓冲液中，37℃振荡处理1～4h，得到脱细胞小肠黏膜下层组织；所述表面活性剂包括生物表面活性剂；4)将步骤3)得到的脱细胞小肠黏膜下层组织置于无菌缓冲液中，振荡清洗6～8次，每次5～10min，将清洗后的脱细胞小肠黏膜下层组织切割，留取中央基质膜，干燥，得到干燥后的中央基质膜；5)将所述干燥后的中央基质膜辐照灭菌，得到软组织修复材料。

【技术特征摘要】
1.一种软组织修复材料的制备方法，包括以下步骤：1)去除掉哺乳动物小肠组织上的小肠黏膜、肌层和浆膜，得到小肠黏膜下层组织，用含抗生素的无菌缓冲液冲洗3～5次，得到冲洗后的小肠黏膜下层组织；2)将步骤1)得到的冲洗后的小肠黏膜下层组织裁剪为不长于5cm的段，沿中线剖开、展平，浸泡于无菌缓冲液中，得到前处理小肠黏膜下层组织；3)将步骤2)得到的前处理小肠黏膜下层组织置于含质量百分含量为0.2～1％表面活性剂和200～600U/mL核酸酶的无菌缓冲液中，37℃振荡处理1～4h，得到脱细胞小肠黏膜下层组织；所述表面活性剂包括生物表面活性剂；4)将步骤3)得到的脱细胞小肠黏膜下层组织置于无菌缓冲液中，振荡清洗6～8次，每次5～10min，将清洗后的脱细胞小肠黏膜下层组织切割，留取中央基质膜，干燥，得到干燥后的中央基质膜；5)将所述干燥后的中央基质膜辐照灭菌，得到软组织修复材料。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述小肠组织...

【专利技术属性】
技术研发人员：史伟云，赵龙，周庆军，
申请(专利权)人：山东省眼科研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37