治疗酶的偶联装配体制造技术

本发明专利技术涉及偶联装配体，其中免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连结部分偶联至治疗酶；并且涉及偶联装配体，其中非肽聚合物连结部分特异性地偶联至免疫球蛋白Fc；其生产方法；和包含其的组合物。

Coupling assembly of therapeutic enzymes

The invention relates to a coupling assembly, in which the immunoglobulin Fc region is coupled to therapeutic enzymes through a non-peptide polymer link portion, and relates to a coupling assembly in which the non-peptide polymer link portion is specifically coupled to the immunoglobulin Fc, a production method thereof, and a composition comprising it.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗酶的偶联装配体
本专利技术涉及治疗酶的缀合物、制备该缀合物的方法和包含该缀合物的组合物，在该缀合物中免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接至治疗酶。
技术介绍
通常地，蛋白质比如治疗酶具有低稳定性并且因而容易被血液中的蛋白水解酶修饰并分解。因此，为了维持这些蛋白质的血液浓度和效能，将它们频繁地施用至患者是必要的。但是，在施用至患者的蛋白质药物大多数处于注射形式的情况下，频繁的注射以维持活性多肽的血液浓度可能使得患者遭受过度痛苦。为了解决这些问题，存在不断的努力以通过增加治疗酶的血液稳定性并以高水平维持它们的血液浓度持续较长时间段来最大化药理学功效。需要治疗酶的这种长效制剂以增加治疗酶的稳定性并同时以维持药物自身的效能处于足够高水平，以及不引起患者中的免疫反应。具体而言，溶酶体贮积病(LSD)是由具体酶中的遗传缺陷引起的致命性紊乱，其可能引起死亡，并且替代疗法对于缺损酶的治疗是必不可少的(FrancesM.Plattetal.,JCellBiol.2012Nov26；199(5):723-34)。酶替代疗法是溶酶体贮积病的标准疗法，并且该疗法通过替代缺陷酶具有缓解现有症状或延迟疾病进展的效果。但是，由于要求每一或两周一次持续2小时至6小时的连续静脉内施用药物，患者和他们的家庭成员的日常生活可能被限制。由于用于治疗人中的溶酶体贮积病的重组酶的半衰期是非常短的——在10分钟至少于3小时的范围内，因此要求终生施用重组酶，因而引起患者的不便。因此，延长重组酶的半衰期具有高度必要性。另外地，对于研发用于溶酶体贮积病的治疗剂存在增加的需要，这是由于如下问题：用于治疗溶酶体贮积病的酶的体内贮存位置彼此不同，治疗酶未能到达骨髓等。
技术实现思路
[技术问题]本专利技术的目标是提供酶缀合物，在该酶缀合物中治疗酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。本专利技术的另一个目标是提供用于预防或治疗溶酶体贮积病的药物组合物，其包含该酶缀合物。本专利技术的仍另一个方面是提供用于制备该酶缀合物的方法。[专利技术的有益效果]本专利技术涉及治疗酶缀合物，并且具体地涉及如此酶缀合物：在该酶缀合物中治疗酶、非肽聚合物连接部分和免疫球蛋白Fc通过共价键连接在一起，从而具有增强的转胞吞作用、体内生物利用度、组织分布、和骨髓靶向性以及酶的体内持续时间。通过本专利技术制备的酶缀合物可以有效地用于治疗溶酶体贮积病(LSD)。[附图说明]图1示出芦荟糖苷酶(半乳糖苷酶，agalsidase)β缀合物的PK实验的结果。图2示出芦荟糖苷酶β缀合物的体外酶活性的结果。图3示出长效芦荟糖苷酶β缀合物的体外细胞内摄取活性的结果。图4示出伊米苷酶缀合物的体外酶活性的结果。图5示出加硫酶(galsulfase)缀合物的体外酶活性的结果。图6示出艾杜糖苷酸酶缀合物的体外酶活性的结果。[技术方案]本专利技术的一方面提供酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的治疗酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。在具体实施方式中，酶选自β-葡糖苷酶、β-半乳糖苷酶、半乳糖-6-硫酸酯酶、酸性神经酰胺酶、酸性鞘磷脂酶、半乳糖脑苷脂酶、芳基硫酸酯酶A、β-氨基己糖苷酶A、β-氨基己糖苷酶B、肝素N-硫酸酯酶、α-D-甘露糖苷酶、β-葡糖醛酸酶、N-乙酰半乳糖胺-6硫酸酯酶、溶酶体酸性脂肪酶、α-N-乙酰-D-氨基葡糖苷酶(NAGLU)、葡糖脑苷脂酶、丁酰胆碱酯酶、几丁质酶、谷氨酸脱羧酶、脂肪酶、尿酸酶、血小板活化因子乙酰水解酶、中性肽链内切酶、髓过氧化物酶、乙酰辅酶A-氨基葡糖苷N-乙酰转移酶、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶、半乳糖胺6-硫酸酯酶(GALN)、透明质酸酶、α-岩藻糖苷酶、β-甘露糖苷酶、α-神经氨酸酶(唾液酸酶)、N-乙酰-葡糖胺-1-磷酸转移酶、粘脂蛋白(mucolipin)-1、α-N-乙酰-氨基半乳糖苷酶、N-天冬氨酰-β-氨基葡糖苷酶、LAMP-2、cystinosin、唾液酸转运蛋白(sialin)、神经酰胺酶、酸性-β-葡糖苷酶、半乳糖基神经酰胺酶、NPC1、组织蛋白酶A、SUMF-1、溶酶体酸性脂肪酶(LIPA)和三肽基肽酶1。本专利技术的另一方面提供酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的α-半乳糖苷酶A和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。本专利技术的仍另一方面提供酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的芳基硫酸酯酶B(ARSB)和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。本专利技术的仍另一方面提供酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的艾杜糖苷酸酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。本专利技术的仍另一方面提供酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的α-葡糖苷酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。本专利技术的仍另一方面提供酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的伊米苷酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。在具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中溶酶体贮积病(LSD)选自粘多糖贮积病(MPS)、糖原贮积病和鞘类脂累积病。在另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中粘多糖贮积病(MPS)选自粘多糖贮积病I型(MPSI)和粘多糖贮积病VI型(MPSVI)。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中糖原贮积病是蓬珀病。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中鞘类脂累积病选自法布里病和高歇病。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中该酶缀合物相比于不与免疫球蛋白Fc区连接的酶具有增加的转胞吞作用和生物利用度(BA)。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中转胞吞作用通过免疫球蛋白Fc区与新生Fc受体(FcRn)之间的结合介导。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中酶缀合物相比于不与免疫球蛋白Fc区连接的酶具有增加的组织分布。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中酶缀合物相比于不与免疫球蛋白Fc区连接的酶具有增加的骨髓靶向性。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中免疫球蛋白Fc区是无糖基化的(aglycosylated)。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中免疫球蛋白Fc区包括选自CH1、CH2、CH3和CH4结构域的一至四种结构域。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中免疫球蛋白Fc区包括铰链区。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中免疫球蛋白Fc区是源自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM的免疫球蛋白Fc片段。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中免疫球蛋白Fc区是具有不同起源的结构域的杂化物，所述结构域源自选自IgG、IgA、IgD、IgE和IgM的免疫球蛋白。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中免疫球蛋白Fc区是由单链免疫球蛋白——其由相同起源的结构域构成——组成的二聚体或多聚体。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中免疫球蛋白Fc区是IgG4Fc片段。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中免疫球蛋白Fc区是人无糖基化的IgG4Fc片段。在仍另一个具体实施方式中，本专利技术提供酶缀合物，其中酶缀合物是在其中非肽聚合物连接部分连接至酶的N端的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的治疗酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.29 KR 10-2016-00118861.一种酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的治疗酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。2.根据权利要求1所述的酶缀合物，其中所述酶选自β-葡糖苷酶、β-半乳糖苷酶、半乳糖-6-硫酸酯酶、酸性神经酰胺酶、酸性鞘磷脂酶、半乳糖脑苷脂酶、芳基硫酸酯酶A、β-氨基己糖苷酶A、β-氨基己糖苷酶B、肝素N-硫酸酯酶、α-D-甘露糖苷酶、β-葡糖醛酸酶、N-乙酰半乳糖胺-6硫酸酯酶、溶酶体酸性脂肪酶、α-N-乙酰-D-氨基葡糖苷酶(NAGLU)、葡糖脑苷脂酶、丁酰胆碱酯酶、几丁质酶、谷氨酸脱羧酶、脂肪酶、尿酸酶、血小板活化因子乙酰水解酶、中性肽链内切酶、髓过氧化物酶、乙酰辅酶A-氨基葡糖苷N-乙酰转移酶、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶、半乳糖胺6-硫酸酯酶(GALN)、芳基硫酸酯酶B(ARSB)、透明质酸酶、α-岩藻糖苷酶、β-甘露糖苷酶、α-神经氨酸酶(唾液酸酶)、N-乙酰-葡糖胺-1-磷酸转移酶、粘脂蛋白-1、α-N-乙酰-氨基半乳糖苷酶、N-天冬氨酰-β-氨基葡糖苷酶、LAMP-2、cystinosin、唾液酸转运蛋白、神经酰胺酶、酸性-β-葡糖苷酶、半乳糖基神经酰胺酶、NPC1、组织蛋白酶A、SUMF-1、溶酶体酸性脂肪酶(LIPA)和三肽基肽酶1。3.一种酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的α-半乳糖苷酶A和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。4.一种酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的芳基硫酸酯酶B(ARSB)和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。5.一种酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的艾杜糖苷酸酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。6.一种酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的α-葡糖苷酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。7.一种酶缀合物，其中用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的伊米苷酶和免疫球蛋白Fc区通过非肽聚合物连接部分连接。8.根据权利要求1-7中任一项所述的酶缀合物，其中所述溶酶体贮积病选自粘多糖贮积病(MPS)、糖原贮积病和鞘类脂累积病。9.根据权利要求8所述的酶缀合物，其中所述粘多糖贮积病(MPS)选自粘多糖贮积病I型(MPSI)和粘多糖贮积病VI型(MPSVI)。10.根据权利要求8所述的酶缀合物，其中所述糖原贮积病是蓬珀病。11.根据权利要求8所述的酶缀合物，其中所述鞘类脂累积病选自法布里病和高歇病。12.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述酶缀合物与不连接至免疫球蛋白Fc区的酶相比具有增加的转胞吞作用和生物利用度(BA)。13.根据权利要求12所述的酶缀合物，其中所述转胞吞作用通过在免疫球蛋白Fc区和新生Fc受体(FcRn)之间的结合介导。14.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述酶缀合物与不连接至免疫球蛋白Fc区的酶相比具有增加的组织分布。15.根据权利要求14所述的酶缀合物，其中所述酶缀合物与不连接至免疫球蛋白Fc区的酶相比具有增加的骨髓靶向性。16.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区是无糖基化的。17.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区包括选自CH1、CH2、CH3和CH4结构域的一至四种结构域。18.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区包括铰链区。19.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区是源自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM的免疫球蛋白Fc片段。20.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区的每个结构域是具有不同起源的结构域的杂化物，所述结构域源自选自IgG、IgA、IgD、IgE和IgM的免疫球蛋白。21.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区是由单链免疫球蛋白组成的二聚体或多聚体，所述单链免疫球蛋白由相同起源的结构域构成。22.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区是IgG4Fc片段。23.根据权利要求22所述的酶缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区是人无糖基化的IgG4Fc片段。24.根据权利要求1-11中任一项所述的酶缀合物，其中所述酶缀合物是其中非肽聚合物连接部分连接至所述酶的N端的酶缀合物。25.一种用于预防或治疗溶酶体贮积病(LSD)的药物组合物，其包括权利要求1或2所述的酶缀合物。26.一种用于预防或治疗溶酶体贮积病(LSD)的药物组合物，其包括权利要求3所述的酶缀合物。27.一种用于预防或治疗溶酶体贮积病(LSD)的药物组合物，其包括权利要求4所述的酶缀合物。28.一种用于预防或治疗溶酶体贮积病(LSD)的药物组合物，其包括权利要求5所述的酶缀合物。29.一种用于预防或治疗溶酶体贮积病(LSD)的药物组合物，其包括权利要求6所述的酶缀合物。30.一种用于预防或治疗溶酶体贮积病(LSD)的药物组合物，其包括权利要求7所述的酶缀合物。31.根据权利要求25-30中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物增加转胞吞作用、生物利用度、组织分布和骨髓靶向性。32.用于制备酶缀合物的方法，其包括：(a)将用于治疗溶酶体贮积病(LSD)的治疗酶与非肽聚合物连接的步骤；和(b)将连接的物质与能够增加所述酶的体内半衰期的生物相容性物质连接的步骤，在所述连接的物质中所述酶和所述非肽聚合物连接。33.根据权利要求32所述的方法，其中所述酶选自β-葡糖苷酶、β-半乳糖苷酶、半乳糖-6-硫酸酯酶、酸性神经酰胺酶、酸性鞘磷脂酶、半乳糖脑苷脂酶、芳基硫酸酯酶A、β-氨基己糖苷酶A、β-氨基己糖苷酶B、肝素N-硫酸酯酶、α-D-甘露糖苷酶、β-葡糖醛酸酶、N-乙酰半乳糖胺-6硫酸酯酶、溶酶体酸性脂肪酶、α-N-乙酰-D-氨基葡糖苷酶(NAGLU)、葡糖脑苷脂酶、丁酰胆碱酯酶、几丁质酶、谷氨酸脱羧酶、脂肪酶、尿酸酶、血小板活化因子乙酰水解酶、中性肽链内切酶、髓过氧化物酶、乙酰辅酶A-氨基葡糖苷N-乙酰转移酶、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶、半乳糖胺6-硫酸酯酶(GALN)、芳基硫酸酯酶B(ARSB)、透明质酸酶、α-岩藻糖苷酶、β-甘露糖苷酶、α-神经氨酸酶(唾液酸酶)、N-乙酰-葡糖胺-1-磷酸转移酶、粘脂蛋白-1、α-N-乙酰-氨基半乳糖苷酶、N-天冬氨酰-β-氨基葡糖苷酶、LAMP-2、cystinosin、唾液酸转运蛋白、神经酰胺酶、酸性-β-葡糖苷酶、半乳糖基神经酰胺酶、NPC1、组织蛋白酶A、SUMF-1、溶酶体酸性脂肪酶(LIPA)和三肽基肽酶1...

【专利技术属性】
技术研发人员：金大振，金正国，郑圣烨，权世昌，
申请(专利权)人：韩美药品株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国,KR