本发明专利技术公开了一株米氏假单胞杆菌及其在防治丝瓜根结线虫中的应用。该菌株为米氏假单胞杆菌(Pseudomonas migulae)菌株YT1001，已于2018年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.15214。本发明专利技术的米氏假单胞杆菌菌株容易在在丝瓜根系周围定殖，且防治丝根结线虫的效果好，最后一次施药后14d其防治效果为57.17％。从丝瓜长势看，米氏假单胞杆菌菌株YT1001对丝瓜具有明显的促进生长效果，没有药害，安全可靠。
A Pseudomonas Michaeli strain and its application in the control of Luffa root knot nematode
The invention discloses a Pseudomonas Michaeli strain and its application in the control of Luffa root knot nematode. The strain is Pseudomonas migulae strain YT1001. It was stored in the General Microbial Center of China Microbial Species Preservation and Management Commission on January 15, 2018, and its storage number is CGMCC No. 15214. The Pseudomonas Michaeli strain of the invention is easy to colonize around the root system of luffa, and has good control effect on filament-knot nematode. The control effect is 57.17% 14 days after the last application. From the growth trend of luffa, Pseudomonas Michaeli strain YT1001 has obvious growth promoting effect on luffa, and it is safe and reliable.
【技术实现步骤摘要】
一株米氏假单胞杆菌及其在防治丝瓜根结线虫中的应用
本专利技术属于植物病害生物防治
具体而言，本专利技术涉及一株能够高效防治丝瓜根结线虫的米氏假单胞杆菌及其用途，以及采用该米氏假单胞杆菌制备的生物防治制剂。
技术介绍
植物寄生线虫是一类重要的植物病原物，每年给全球农业造成约1570亿美元的经济损失。常见根结线虫有四个种类，即南方根结线虫(Meloidogyneincognita)、北方根结线虫(M.hapla)、爪哇根结线虫(M.javanica)和花生根结线虫(M.arenaria)。据不完全统计，根结线虫的寄主植物多达3000多种，包括经济、粮食、果树、蔬菜、花卉等作物，其中危害最为严重的是茄科、葫芦科和十字花科等植物。发病田的寄主常年减产15％～20％，严重时达到70％以上。丝瓜是农家庭院种植蔬菜的主要品种，在满足人们日常需要、改善生活条件方面起着重要作用。然而丝瓜根结线虫严重威胁着丝瓜生产。一般病株率为26％～48％，死亡率9.5％。目前防治丝瓜根结线虫的方法包括农业防治和化学防治。其中，农业防治效率低、劳动量大、而且防治作用并不明显；而化学防治的长期用药，使丝瓜根结线虫产生抗药性，最终导致防治效果不理想，再加上化学药剂的大量使用对丝瓜质量安全与环境造成许多负面影响。而生物防治具有对人畜安全、环境兼容性好且病原菌不易产生抗药性等优点，因此丝瓜根结线虫的绿色无公害生物防治越来越多的受到人们关注。假单胞菌在自然界分布广泛，种类繁多，是植物根际土壤周围起生物防治功能的主要细菌类群。目前，世界各地对假单胞菌的应用研究有了大量的报道，涉及领域包括用于农业生物防治、植物生长调节、环境保护和医药开发等，其中，在生物防治与促植物生长方面的研究最为透彻、应用最为广泛，生物防治主要作用对象为植物病原真菌，如雪霉叶枯菌、镰刀菌、棉花黄萎病菌、炭疽菌等。假单胞菌对植物生长的促进作用主要通过其产生的植物生长激素。在环境保护方面，假单胞菌主要被用于化学农药的降解、废水处理、油污处理等。用假单胞菌防治线虫鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株用于高效防治丝瓜根结线虫的新的微生物——米氏假单胞杆菌YT1001。本专利技术的米氏假单胞杆菌菌株容易在在丝瓜根系周围定殖，且防治丝根结线虫的效果好，具有良好的应用前景。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术所提供的菌株为米氏假单胞杆菌(Pseudomonasmigulae)菌株YT1001，是从青岛胶州湾大沽河入海口湿地泥中分离获得的，已于2018年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCCNo.15214。其具有以下生物学特性：革兰阴性，杆状，运动，不产芽胞；在NBTA平板上，菌落均呈红色；在KMB平板上，菌落圆形隆起，边缘整齐，湿润，粘稠，易挑起，菌落初期透明，后期脓状样，菌落较大，显不同程度的黄色。本专利技术米氏假单胞杆菌(P.migulae)菌株YT1001的培养方法或繁殖方法包括：(1)普通培养保存采用NA培养基，配方为：胰蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH调至7.2～7.4。(2)实验室液体培养采用NYBD液体培养基，配方为：牛肉浸膏8g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，氯化钠4.5g，水1000mL，pH调至7.2～7.4。(3)固体培养基配方：固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比为98.8∶0.2；所述固料按质量比计为木粉∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝38∶30∶22∶10；所述无机盐的组分及重量比为：磷酸二氢钾22％，硫酸镁8％，硫酸锌3％，硫酸铵13％，轻质碳酸钙54％。(4)发酵培养基配方：同(3)中固体培养基配方。本专利技术还提供一种用于防治丝瓜根结线虫的生物防治制剂，所述生物防治制剂包括所述的米氏假单胞杆菌(P.migulae)菌株YT1001。并且，本专利技术还提供了一种用于防治丝瓜根结线虫的生物防治方法，所述生物防治方法包括向具有根结线虫的丝瓜植株施用上述米氏假单胞杆菌(P.migulae)菌株YT1001或者上述生物防治制剂。本专利技术也提供了上述米氏假单胞杆菌菌株YT1001或者上述生物防治制剂在防治丝瓜根结线虫中的用途。本专利技术所述的生物防治制剂的制备方法包括以下步骤：(1)制备所述米氏假单胞杆菌YT1001的种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中，27～29℃下恒温培养；(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至发酵培养基，在室温27～29℃、相对湿度85％以上的发酵室中进行发酵培养。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述制备方法包括以下步骤：(1)将所述米氏假单胞杆菌的孢子移植到NYBD液体培养基，27～29℃摇床振荡培养1～3d得到种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液按质量比10％的比例接种到固体培养基中，27～29℃下振荡培养1～3d；(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液按体积比1∶6的比例接种至发酵培养基，室温27～29℃、相对湿度85％以上的发酵室中发酵培养3～4d；活性菌≥40亿/克。其中，步骤(1)中的NYBD液体培养基，配方为：牛肉浸膏8g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，氯化钠4.5g，加水至1000mL，pH调至7.2～7.4。步骤(2)中的固体培养基配方：固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比98.8∶0.2；所述固料按质量比计为木粉∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝38∶30∶22∶10；所述无机盐的组分及重量比为：磷酸二氢钾22％，硫酸镁8％，硫酸锌3％，硫酸铵13％，轻质碳酸钙54％。步骤(3)中的发酵培养基同步骤(2)的固体培养基。实验表明，本专利技术的米氏假单胞杆菌菌株容易在在丝瓜根系周围定殖，且防治丝根结线虫的效果好，最后一次施药后14d其防治效果为57.17％。从丝瓜长势看，米氏假单胞杆菌(P.migulae)菌株YT1001对丝瓜具有明显的促进生长效果，没有药害，安全可靠。由该米氏假单胞杆菌制备的生物防治制剂，不仅能够高效的防治丝瓜根结线虫，还能有效促进丝瓜生长，是一种极具应用前景的生物防治制剂。该微生物制剂可以作为生物农药或生物肥料，防治丝瓜根结线虫。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是示例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均在本专利技术的保护范围内。实施例11、米氏假单胞杆菌(P.migulae)YT1001的分离与纯化本专利技术的米氏假单胞杆菌(P.migulae)YT1001是从青岛胶州湾大沽河入海口湿地泥中采用稀释平板法和平板划线法分离获得的，分离方法为：(1)菌株的分离样品于2014年5月11日采集自青岛市胶州湾大沽河入海口泥样，称取1g样品于99mL无菌水中，置于30℃摇床中150rpm震荡10min，然后置于60℃水浴锅中孵育30min，取100μL10-2、10-3、10-4稀释液涂布于LB培本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.米氏假单胞杆菌(Pseudomonas migulae)菌株YT1001，所述菌株的保藏号为CGMCC No.15214。
【技术特征摘要】
1.米氏假单胞杆菌(Pseudomonasmigulae)菌株YT1001，所述菌株的保藏号为CGMCCNo.15214。2.权利要求1所述的米氏假单胞杆菌菌株YT1001在防治丝瓜根结线虫中的用途。3.一种生物防治制剂，包括权利要求1所述的米氏假单胞杆菌菌株YT1001。4.权利要求3所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，包括以下步骤：(1)制备米氏假单胞杆菌菌株YT1001的种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中恒温培养；(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至发酵培养基，在发酵室中进行发酵培养。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征是，所述步骤(2)的固体培养基包括固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比98.8∶0.2；所述固料按质量比计为木粉∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝38∶30∶22∶10；所述无机盐的组分及重量比为：磷酸二氢钾...
【专利技术属性】
技术研发人员：张茂印，牛赡光，张淑静，殷碧秋，刘殷，
申请(专利权)人：山东济宁邦尔利工贸有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37
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